DMEM培养结肠小袋虫的正交试验

利用L9(34)正交试验设计,研究了淀粉量、小牛血清比例和培养基初始pH 3个因素对结肠小袋虫在DMEM培养基中所获得的最高种群密度的影响。方差分析表明,初始pH影响最大,其次为淀粉量,血清比例影响最小。最佳培养基组成为淀粉40 mg/安瓿、血清150 mL/L(DMEM培养液2.55 mL+0.45 mL小牛血清),最适宜的DMEM培养基初始pH为7.0。

人芽囊原虫在DMEM单相培养基中体外培养方法的建立

目的建立人芽囊原虫（Blastocystis hominis，B．h）在DMEM单相培养基中的体外连续培养方法，为进一步研究其诊断、生活史、致病机制奠定基础。方法比较不同pH值、血清种类、血清浓度及接种量等条件下虫体生长繁殖情况及影响因素。结果使用DMEM培养基、接种量大于10^5/管、pH7．0～8．0、10％～30％小牛血清（或人、马血清），青、链霉素及二性霉素B，于37℃条件下厌氧培养，每三、六或五天转种一次，可达到体外长期培养B．h的目的。结论使用DMEM单相培养基可用于人芽囊原虫的诊断及体外长期培养。

Neurobasal^(TM)-A和DMEM/F12培养液对大鼠胎儿神经干细胞生长的影响

用带有 3 [H]的胸苷对分裂细胞进行标记 ,通过细胞计数仪测定细胞数量的方法 ,对比了大鼠胎儿神经干细胞在添加相同成分的 Neurobasal TM-A和 DMEM/F1 2培养液中的生长情况 .结果表明 Neurobasal TM-A在有 EGF和 b

自制DMEM/F12培养基对奶牛乳腺上皮细胞生物学功能的影响

验证自制DMEM/F12培养基与商品化DMEM/F12培养基相比是否会对奶牛乳腺上皮细胞生物学功能造成负面影响,为进一步研究氨基酸对乳蛋白合成影响及其机理奠定基础。从对奶牛乳腺上皮细胞增殖能力、泌乳相关基因表达和酪蛋白合成这几个方面比较自制DMEM/F12培养基与DMEM/F12培养基的差别。结果显示,自制DMEM/F12培养基对乳腺上皮细胞的增殖活力要显著高于DMEM/F12培养基(P<0.0001);自制DMME/F12培养基与商品化DMEM/F12培养基相比乳腺上皮细胞CSN1S1、CSN3基因表达显著上调(P<0.05),上调量分别达到了3.57倍和3.27倍,CSN1S2、CSN2基因表达量差异不显著(P>0.05);自制DMEM/F12培养基与商品化DMEM/F12培养基相比,对乳腺上皮细胞αS酪蛋白及β-酪蛋白的合成的影响差异并不显著(P>0.05)。由此得出,与商品化DMEM/F12培养基相比,自制DMEM/F12培养基在奶牛乳腺上皮细胞增殖、泌乳相关基因表达和酪蛋白合成方无负面影响。

不同种类血清对新生大鼠大脑皮层神经细胞培养的影响

目的 探讨不同动物血清和人ＡＢ型血清对新生大鼠大脑皮层神经细胞培养的影响。方法Ｏｌｙｍｐｕｓ相差显微镜观察加入高糖ＤＭＥＭ的不同动物和人ＡＢ型血清对新生大鼠大脑皮层神经细胞的生长发育、增殖分化、迁移、形态学及存活细胞等的变化。结果 马血清和人ＡＢ型血清组的神经细胞、胶质细胞和成纤维细胞生长旺盛，神经细胞存活数明显高于其它血清组（Ｐ＜０．０５）。结论 人ＡＢ型血清和马血清有利于新生大鼠大脑皮层神经细胞的生长发育。

不同pH值的培养液对兔骨髓间充质干细胞体外培养的影响

目的 探讨不同pH值的低糖DMEM培养液对兔骨髓间充质干细胞 (MSCs)体外培养的影响 ,寻找最适宜MSCs生长的培养液的pH值。方法 采用常规的细胞培养传代技术以及光、电镜技术和细胞增殖活性的检查方法 ,观察不同pH值的低糖DMEM培养液对MSCs生长、增殖、形态的影响。结果 培养液的pH值在 7.2～ 7.4之间时 ,MSCs生长活跃 ,增殖速度极快 ,无接触抑制 ,镜下细胞呈单一梭形外观的成纤维细胞 ,形成成纤维细胞集落。pH值大于 7.4时 ,MSCs逐渐停止增殖 ,镜下细胞膜贴壁展开、边缘卷曲 ,细胞面积变大为正常的数倍 ,形态极不规则。pH值在 7.1～ 7.19之间时 ,变化不大 ,仅增殖速度稍减慢。pH值小于7.1时 ,MSCs生长增殖速度亦明显减慢 ,镜下细胞逐渐从培养瓶壁脱落 ,成为圆球形悬浮细胞。结论 MSCs对碱性的培养液较敏感 ,稍偏碱即影响生长增殖 ,对酸性的培养液则有一定的耐受。使用培养液前有条件也最好用pH计测定pH值 ,同时注意观察细胞生长增殖情况及培养瓶中培养液的颜色 。

影响重组CHO C28细胞HBsAg表达的重要因素

摸索乙肝疫苗生产过程中细胞培养的最佳方案。探究重组CHO细胞培养过程中不同厂家的血清、DMEM培养基等相关原材料对HBsAg表达及细胞生长形态的影响。

培养基对小鼠单核巨噬细胞RAW264.7诱导分化破骨细胞的影响

目的 探讨培养基对小鼠单核巨噬细胞RAW264.7向破骨细胞分化的影响。方法 实验分为3组:高糖DMEM培养基组(DMEM组);高糖DMEM/α-MEM培养基组(DMEM/α-MEM组);α-MEM培养基组(α-MEM组)。按常规方法采用上述3种培养基进行破骨细胞培养,培养5 d后,采用抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate resistant acid phosphatase, TRAP)染色观察各组破骨细胞的形成情况,并采用实时荧光定量PCR方法观察破骨细胞分化相关标志物NFATc-1、c-Fos和TRAF-6 mRNA的表达;培养11 d后采用甲苯胺蓝染色进行骨陷窝面积分析,观察破骨细胞骨吸收功能情况。结果 3组均可以观察到典型的TRAP^(+)破骨细胞。与DMEM组相比,DMEM/α-MEM组、α-MEM组TRAP^(+)破骨细胞数量明显增加(P<0.01),但各组形态略有不同。在骨吸收功能上,与DMEM组和DMEM/α-MEM组相比,α-MEM组骨陷窝面积明显增加(P<0.01)。在破骨细胞分化相关调控因子表达上,与DMEM组相比,α-MEM组NFATc-1、c-Fos和TRAF-6 mRNA表达显著增加(P<0.01,P<0.05);DMEM/α-MEM组NFATc-1 mRNA表达显著增加(P<0.01),c-Fos和TRAF-6 mRNA表达有增加的趋势,但差异无统计学意义;α-MEM组与DMEM/α-MEM组比较差异无统计学意义。结论 高糖DMEM培养基、高糖DMEM/α-MEM培养基、α-MEM培养基均可用于小鼠单核巨噬细胞RAW264.7诱导分化破骨细胞的实验;从破骨细胞数量、状态及功能来看,α-MEM培养基更适合做为破骨细胞分化培养基。

DMEM体外培养结肠小袋纤毛虫的研究

目的建立结肠小袋纤毛虫DMEM培养方法,为进一步研究其生活史及致病机制奠定基础。方法用DMEM培养基培养结肠小袋纤毛虫,观察不同淀粉量、不同血清量、不同初始pH值及不同接种量下的培养效果。结果用DMEM培养基培养结肠小袋纤毛虫,最适淀粉含量为20 mg/安瓿,最适血清含量20%,最适pH值为7.0;种群自然增长率和种群所达到的最大种群密度随接种量的不同而明显改变。结论DMEM培养基可用于结肠小袋纤毛虫的体外培养。

RPMI-1640和DMEM/F12培养基对大鼠颈环上皮细胞培养的比较研究

目的:比较大鼠颈环上皮细胞在不同培养基中的生长状况。方法:分离培养大鼠颈环上皮细胞,分别采用RPMI-1640和DMEM/F12两种培养基培养,用倒置显微镜观察细胞的生长状态,MTT比色法检测细胞增殖活性。结果:倒置显微镜下,两组细胞在接种24 h后细胞大量贴壁并伸展,14 d时RPMI-1640组细胞呈现明显的凋亡现象,DMEM/F12组细胞生长状态良好。两种方法培养的颈环上皮细胞增殖活性差异有显著性意义(P﹤0.05)。结论:DMEM/F12培养基较RPMI-1640更适合颈环上皮细胞的贴壁及增殖。

DMEM培养基体外培养阴道毛滴虫效果的实验观察

目的研究阴道毛滴虫在不同浓度胎牛血清DMEM培养基中的生长效果,比较阴道毛滴虫在DMEM培养基与15%肝浸汤培养基中的生长情况。方法调节DMEM培养基中胎牛血清终浓度分别为10%、20%、50%,接种密度为15×104/ml的阴道毛滴虫,置37℃恒温箱培养,每24小时取样一次,光镜观察虫体形态,利用血球计数板计数阴道毛滴虫增殖密度并计算增殖倍数。接种密度为1. 8×104/ml的阴道毛滴虫分别至DMEM、15%肝浸汤培养基中,比较阴道毛滴虫生长时间、增殖倍数及形态。结果接种密度为15×104/ml的阴道毛滴虫在终浓度为10%、20%、50%胎牛血清的DMEM培养基内分别培养48 h、24 h、72 h达增殖高峰。接种密度为1. 8×104/ml的阴道毛滴虫在DMEM培养基中120 h增殖倍数达高峰,为32. 63倍,虫体形态大而圆;在15%肝浸汤培养基中96 h增殖倍数达高峰,为59. 40倍,虫体形态多呈梨形;虫体在DMEM培养、肝浸汤培养基中生存时间最长分别为14 d、5 d。结论阴道毛滴虫在DMEM培养基中增殖率低于在肝浸汤培养基中,但虫体在DMEM培养基中存活时间更长,其形态大而圆,因此DMEM培养基适合阴道毛滴虫的体外生长,保种,染色,及形态观察。

国产原材料在肠道病毒71型灭活疫苗(Vero细胞)生产中的替代研究

目的评估国产原材料(199培养基、DMEM培养基和球状微载体)替代进口原材料在肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)灭活疫苗(Vero细胞)规模化生产的可行性。方法在其他生产物料、生产设备、工艺流程和主要质控点等均不变的前提下,采用国产原材料进行3批次EV71灭活疫苗规模生产,对比分析进口原材料(变更前)和国产原材料(变更后)生产批次中间产品、成品的各项质量指标及产品稳定性。结果变更前后中间产品和成品的各项检测结果均符合质量标准要求,病毒收获液的抗原含量和病毒滴度平均值分别为6903 U/mL、8.7 lgCCID_(50)/mL和6171 U/mL、8.6 lgCCID_(50)/mL;原液的抗原含量、蛋白含量、比活、Triton X-100残留和纯度平均值分别为17605 U/mL、15μg/mL、1180 U/μg、7.0μg/mL、99.93%和15631 U/mL、14μg/mL、1111 U/μg、6.7μg/mL、100.00%;半成品的pH和铝含量平均值分别为6.8、0.18 mg/剂和6.9、0.18 mg/剂;成品的pH、体外相对效力、体内效力、渗透压摩尔浓度和铝含量平均值分别为6.9、388.0 U/剂、28.67 U、4.7 EU、333.7 mOsmol/kg、0.18 mg/剂和6.9、388.7 U/剂、25.00 U、6.2 EU、335.7 mOsmol/kg、0.18 mg/剂,均符合质量标准要求。变更前后产品长期稳定性和加速稳定性的结果均符合质量标准要求,且具有较好的一致性。结论国产原材料具有应用于EV71灭活疫苗(Vero细胞)规模生产的可行性。

纯镁在不同腐蚀体系中的降解行为研究

目的:观察纯镁在不同体系中的降解行为,研究其在不同介质中不同的降解机制。方法:利用模拟体液(SBF)和细胞培养基(DMEM)分别作为纯镁的腐蚀介质,参照ASTM-G31-72标准选择相应体积的溶液进行浸泡,测量1 d、2 d、4 d、8 d和16 d各体系中钙镁离子浓度、pH改变,并通过扫描电镜、EDS和XRD等对材料表面形貌及物相进行分析。结果:在SBF模拟体液中浸泡的样品在第8 d已经成分散的颗粒状,看不到完整的样品。而DMEM中样品却仍然可以保持完整形貌。SBF溶液中镁离子的释放量及钙离子消耗量明显高于DMEM溶液。2种腐蚀介质中pH变化没有太大的差异,最终的pH都维持在10.0左右。纯镁在2种腐蚀介质中生成的产物有很大的差别。在SBF体系中,样品腐蚀产物主要是氢氧化镁,并出现了少量镁的磷酸盐沉淀。而在DMEM中,腐蚀产生了大量的磷酸一氢镁和磷酸镁,同时有少量的氢氧化镁结晶。结论:纯镁在2种体系中腐蚀速度差别很大,在SBF体系腐蚀速度明显大于DMEM体系中。纯镁在SBF体系和DMEM中不同时间点产生的腐蚀产物不同。

仿生溶液法检测材料生物活性准确性的研究

目的:探讨仿生溶液(SBF)检测种植体生物活性的准确性。方法:采用宏观形貌一致的两种商用种植体Osseotite和NanoTiteTM分别体外浸泡于仿生溶液及DMEM+10%胎牛血清培养基中14天,应用X-射线光电子能谱仪(XPS)、扫描电镜(SEM)检测其表面磷灰石形成情况。结果:SBF中的两种样本表面无明显晶体形成;DMEM培养基中Osseotite表面无明显晶体形成,NanoTiteTM表面磷灰石晶体成球状簇集,并伴大量有机分子附着;XPS显示NanoTiteTM经DMEM浸泡后表面磷灰石晶体为碳酸羟基磷灰石。结论:SBF作为材料表面生物活性的检测模型,可导致假阴性结果的出现。有机大分子对生物矿化层的形成具有显著影响,以DMEM培养基作为体外生物活性研究模型的检测结果可信度更高。