5-马来酰亚胺-2-(间马来酰亚胺基苯基)苯并噁唑用于荧光光度法直接测定还原型谷胱甘肽的研究

以5-马来酰亚胺-2-(间马来酰亚胺基苯基)苯并噁唑(DMPB)为荧光试剂,建立了在一定量半胱氨酸(Cys)存在下荧光光度法直接测定还原型谷胱甘肽(GSH)的新方法.研究表明,DMPB荧光很弱,其结构中的两个马来酰亚胺基团都能与GSH或Cys发生反应,生成具有强荧光的产物.并且DMPB与GSH或Cys的生成物(分别称为DMPB-GSH和DMPB-Cys)的最大荧光波长会以不同的速率从λex/λem=302/372nm红移至λex/λem=310/430 nm,最终均在λex/λem=310/430 nm处稳定.在pH 7.0的Na2HPO4-KH2PO4缓冲溶液中和35℃下,DMPB与GSH或Cys反应15 min后,生成的DMPB-GSH的最大荧光波长为λex/λem=302/372 nm,且最大荧光强度可以稳定1h,而DMPB-Cys的最大荧光波长为λex/λem=310/430 nm,且荧光较弱.利用这一差别,我们选择在λex/λem=302/372 nm的荧光波长下测定GSH,完成了0.3倍(Cys:GSH,摩尔比)Cys存在下对GSH的直接测定,方法线性范围为4.0×10-8～9.6×10-7mol·L-1,检出限(S/N=3)为1.5×10-9mol·L-1.用该法测定了人全血中的GSH,结果令人满意.