^(32)P后标记新法研究DNA-苯醌加合物的生成

用以加P_1核酸酶提高灵敏度的^(32)P后标记新法研究了离体活细胞培养及试管反应形成的DNA-苯醌(BQ)加合物.4个被检加合物中有两个相应于苯醌与DNA上的胞嘧啶和鸟嘌呤作用形成的共价键加合物,其中较大的为首次发现的胞嘧啶-苯醌加合物.测得其相对标记率(RAL)试管条件为6.70×10^(-8)和8.93×10^(-9),细胞培养为8.23×10^(-9)和6.91×10^(-9),达到了在基因水平上研究DNA加合物的基本要求.

黄曲霉素B1-DNA加合物的实验研究

用３２Ｐ后标记的方法测小牛胸腺ＤＮＡ和黄曲霉素Ｂ１体外反应产物里的ＤＮＡＡＦＢ加合物，发现有４种不同的ＤＮＡ加合物，加合物含量的ＲＡＬ＝１０８（加合物）／１０７（正常核酸），对比用ＤＮＡ的４种碱基和ＡＦＢ１反应所形成的加合物，发现有３种ＤＮＡＡＦＢ１的加合物是来自鸟嘌呤碱基被修饰所形成的，占ＤＮＡ加合物总量的９０％．用定量的黄曲霉素Ｂ１腹腔注射入大白鼠中，２４ｈ取其肝、肾、肺、脾等组织，加合物的总含量分别是肝＞肾＞肺＞脾．用ＡＲＯＣＬＯＲ诱导能促进各组织中ＤＮＡ加合物的形成，但是对不同的组织有不同的促进作用．

苯DNA加合物的组织分布及其与细胞遗传毒性的关系

用Ｐ１增强的３２Ｐ－后标记方法测定了经腹腔注射染苯小鼠不同组织ＤＮＡ加合物的分布及其与苯引起的外周血白细胞（ＷＢＣ）减少、淋巴细胞微核形成及骨髓细胞染色体畸变的关系。结果表明：１．苯在小鼠骨髓、肝脏和外周血ＷＢＣ均可形成ＤＮＡ加合物，其加合物含量以骨髓最高，肝脏次之，ＷＢＣ最低。本结果与苯的代谢及毒性作用特点相一致。２．ＤＮＡ加合物形成与细胞毒性有关系，ＤＮＡ加合物量增加，淋巴细胞微核及骨髓细胞染色体畸变亦增加，而外周血白细胞数明显减少，显示细胞遗传毒性和细胞毒性均增大。本研究为ＤＮＡ加合物作为生物学监测指标，筛选高危人群提供了有力的实验依据。

城市与农村不吸烟女性肺组织中DNA加合物含量

为更客观地评价空气污染与肺癌的关系，用３２Ｐ后标记法检测城市与农村不吸烟女性肺癌患者与非肺癌患者正常肺组织中ＤＮＡ加合物的含量。城乡妇女、城乡肺癌患者、城乡非肺癌妇女、城市肺癌妇女与农村非肺癌妇女、农村肺癌患者与非肺癌妇女之间均未见统计学差异，但发现城市患者比农村患者，肺癌患者比非肺癌患者的肺组织ＤＮＡ加合物含量高的趋势。

体内GMA-DNA加合物的研究

目的 在整体动物水平验证大鼠不同器官是否能形成甲基丙烯酸环氧丙脂(GMA)-DNA加合物。方法 大鼠灌胃给予GMA(31.25～250mg/kg体重),14d后,用32P-后标记法分析肝、肾、外周血白细胞和睾丸中GMA-DNA加合物的形成状况。结果 不同组织器官中形成类型不同、数量不等的GMA-DNA加合物。其中白细胞有4种,肝和肾均有3种,睾丸有1种。当GMA剂量为0～125mg/kg体重时,GMA-DNA加合物的形成量随GMA剂量的增加呈上升趋势,且在所检测组织器官中,其形成量的次序为:肾>肝>白细胞>睾丸。加合物N3-甲基丙烯酸-2羟丙基-脱氧胞嘧啶核苷一磷酸(N3-methacrylate-2-hydroxypropy1-dCMP)存在于肝、肾和白细胞中而不存在于睾丸中。结论 具有亲电子集团的GMA能与DNA带负电荷中心反应形成GMA-DNA加合物。

用苯及其生物代谢物酚、醌处理大鼠各器官中DNA加合物的形成和分布

用苯及其在生物体内代谢物酚，醌处理大鼠，２４ｈ后取其肝、肾、肺、脾诸组织，用^（３２）Ｐ后标记方法测４种器官中ＤＮＡ加合物含量，其结果是：在上述各器官中均发现有ＤＮＡ加合物的形成，４种器官中总加合物量值对苯、酚、醌依次为９．１８─８９．１３、２０．９─２４３．８、５３．１─３０８．９加合物／１０~８正常核酸，３种系列化合物对大鼠４种器官中ＤＮＡ加合物形成能力依次为醌＞酚＞苯。而大鼠中４种器官对同一化合物的加合物形成能力依次为肝＞肾＞肺＞脾。这种结果较好地反映出３种系列化合物的代谢过程和生态毒理效应的差异性。

致癌物染毒大鼠体内DNA加合物的检测

本文报道了我们用联苯胺以及联苯胺衍生偶氮染料刚果红,依文思蓝经口染毒大鼠后用^(32)P后标记方法对其肝脏中的DNA加合物的检测结果,3种物质均检出1种DNA加合物,其含量分别为18.17,1.03,1.74μmol/kgDNA。结果表明联苯胺衍生偶氮染料经偶氮还原产生的联苯胺或联苯胺衍生物,能同联苯胺样在大鼠肝内形成加合物,这种DNA加合物很可能是接触联苯胺衍生偶氮染料的人群膀胱癌发病高的原因。

性别、年龄因素对人肺组织DNA加合物形成量影响的探讨

探讨了ＤＮＡ加合物的量在人肺组织中随年龄、性别的分布。实验结果表明：年龄与肺组织中ＤＮＡ加合物的相关系数很低，不同年龄组ＤＮＡ加合物的平均相对加合物标记（ＲＡＬ）值无显著性差异。男性肺组织中ＤＮＡ加合物的量显著高于女性（Ｐ＜０．０５），除与吸烟因素有关外，男女肺组织中ＤＮＡ加合物量的差异也不能排除内分泌因素的影响。

生物检测标志物和分析方法

有四种分子水平的生物检测标志物在当前研究环境因素-基因变异-疾病之间相关性的分子生物学领域中起着重要的作用,它们是生物大分子样品的DNA加合物、蛋白质加合物、8-羟基脱氧鸟苷、生物排泄物中的烷基化脱氧嘌呤.因为DNA的特殊作用,DNA加合物作为生物标志物倍受重视.DNA加合物的分析方法有荧光法(灵敏度达1加合物/10^(5-6)正常核酸)、免疫法(灵敏度达1加合物/10^(6-8)正常核酸)、^(32)后标记法(灵敏度达1加合物/10^(8-10)正常核酸)、HPLC+^(32)P后标记法等,由于^(32)P后标记法灵敏度高,应用范围广,是目前测生物样品DNA加合物的首选方法.

2-脱氧-3-磷酸胞嘧啶-苯醌加合物的确定

用^(32)P后标记法,HPLC及PEI·TLC同谱层析等方法对DNA-苯醌(BQ)加合物进行了研究,并对其中一个主要加合物进行了碱基定位,确证该斑点系BQ与分子DNA上的2′-脱氧-3′-磷酸胞嘧啶作用形成的加合物(dC-BQ加合物)。

血红蛋白-环氧苯乙烯加合物的分析

采用环氧苯乙烯（ＳＯ）和血红蛋白中羧酸基和巯基位的加合物同时测定的方法，对大鼠（ＳＤ）血红蛋白ＳＯ加合物进行了体外实验及腹腔注射环氧苯乙烯和苯乙烯的体内实验．结果表明在血红蛋白中所分析的３种加合物（ＳＧ，１ＰＥ，２ＰＥ）均随着ＳＯ剂量而增加，半胱氨酸加合物和羧酸加合物之比率随着各不同组的实验而不同，而２ＰＥ对１ＰＥ比率较为恒定，说明ＳＯ和半胱氨酸反应α位优于β位，最低检测浓度是：ＳＧ为８ｐｍｏｌ／ｇ（蛋白），１ＰＥ为５ｐｍｏｌ／ｇ（蛋白），２ＰＥ为０６ｐｍｏｌ／ｇ（蛋白）．

DNA加合物检测

DNA加合物是一类极其重要的、具有多种标志作用的生物标志物,可应用于环境致癌物的暴露监测、基因毒性测定、个体敏感性和环境致癌物与基因的相互作用研究、癌症风险评价、环境致癌因素筛查以及癌症预防研究等。可靠、灵敏、准确的分析检测技术是DNA加合物作为生物标志物得到广泛应用的关键。当前DNA加合物分析、检测的方法主要包括:32P后标记法、免疫分析法、免疫毛细管电泳激光诱导荧光法、液相色谱串联质谱法、微分离-质谱联用法等。本文对这些分析技术和方法及其在DNA加合物检测方面的应用做一简要综述。

苯DNA加合物的形成特征、条件和方法探讨

为进一步探讨苯ＤＮＡ加合物的形成特征，稳定地检测苯ＤＮＡ加合物，采用３２Ｐ－后标记法对染苯小鼠体内ＤＮＡ加合物的形成特征及影响因素进行了研究。结果表明：加合物种类与染苯天数有关：５００ｍｇ／ｋｇ染苯５天组外周血白细胞可检出２个ＤＮＡ加合物斑点，而７天组可检出３个主要的和至少１个微弱的加合物斑点；染苯达一定剂量后，加合物含量和种类不再增加，１０００ｍｇ／ｋｇ与５００ｍｇ／ｋｇ染苯７天组的检测结果基本相同；苯醌可能是苯形成ＤＮＡ加合物的主要代谢产物，２．５ｍｇ／ｋｇ苯醌染毒５天的小鼠白细胞中可检出３个主要的及２个微弱的加合物斑点，其层析特性与染苯小鼠加合物的层析性质基本一致。提示：动物染苯天数及次数、层析点样量及层析时间对加合物斑点形成均有影响。