PCR-ELISA微孔板杂交技术检测结核杆菌DNA

目的 采用PCR ELISA微孔板杂交技术检测结核杆菌DNA。方法 采用PCR技术扩增结核杆菌DNA ,并将扩增产物加入预先包被结核杆菌探针的微孔板 ,再加入结核杆菌显色探针 ,同时进行微孔板核酸夹心杂交ELISA显色。共检测肺部疾病患者痰标本 5 10例。结果 该法的灵敏度为 5 9.3% ,特异性为 95 .0 % ;阳性预测值为 96 .3% ,阴性预测值为 5 1.4 %。结论 PCR ELISA微孔板杂交技术可快速、准确地检测结核杆菌DNA ,是结核病早期诊断和鉴别诊断的可靠实验室方法。

DNA固定技术对结核分枝杆菌PCR产物杂交结果影响的研究

目的 比较各种ＤＮＡ 固定方法对结核分枝杆菌ＰＣＲ 产物杂交结果的影响。方法 选取结核分枝杆菌ＰＣＲ 扩增产物并点于尼龙膜上，用紫外线、加热和碱液三种方法固定ＤＮＡ，然后以ＰＣＲ 产物作探针用增强化学发光标记试剂进行标记，并对三种不同方法固定的ＰＣＲ 产物杂交分析。结果 结核分枝杆菌ＤＮＡ固定方法对ＰＣＲ 扩增产物的检测结果具有较大的影响，碱液固定具有较好的敏感性和重复性。结论 各地结核分枝杆菌ＰＣＲ 实验室可考虑用碱液法对ＰＣＲ

人结核分枝杆菌特异性核酸探针制备及结核病PCR检测技术的初步临床应用

采用人结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberulosis TB)染色体DNA为模板,选择位于插入片段IS6110中884～865和568～588碱基对处的两个片段为引物,扩增出317bp的特异性片段,将其克隆进pUC19载体。酶切图谱分析和DNA序列测定证实为目的片段。该片段经DIG标记,分别与11种分枝杆菌DNA进行Southern杂交,结果证明只与人型复合分枝杆菌发生杂交反应。利用该对引物建立的PCR检测技术对74份结核病痰液标本进行检测,并与临床细菌快速培养结果相比较,发现48份临床阳性均为PCR阳性,在26份临床阴性标本中亦发现11份PCR检测阳性。将标本PCR产物与克隆探针进行杂交,显示两者结果完全一致。说明PCR检测体系结果可靠,其灵敏度明显高于目前临床所采用的方法,可作为一种常规技术用于结核病的临床检测。

对硝基苯甲酸生长试验鉴别结核与非结核分枝杆菌应用评价

目的对应用对硝基苯甲酸(PNB)生长试验鉴别结核分枝杆菌复合群(MTC)与非结核分枝杆菌(NTM)进行评价。方法采用PNB生长试验、PCR-反向核酸探针杂交和PCR-DNA直接测序对52株MTC和264株NTM临床分离株进行鉴定。结果以PCR-反向核酸探针杂交和PCR-DNA测序结果为鉴定标准,PNB生长试验中52株MTC菌株均为(100%)阴性(-),264株NTM菌株中233株(88%)为阳性(+),31株(12%)为(-)。结论仅应用PNB生长试验鉴别MTC与NTM存在局限性。用PCR-反向核酸探针杂交能将分枝杆菌鉴定至属、将MTC与NTM相鉴别,并能将NTM准确鉴定至种的水平。