利用DNA免疫技术制备人CLDN18.2单克隆抗体

目的:制备CLDN18.2特异性单克隆抗体并对其特性和在免疫检测中的应用进行鉴定,为CLDN18.2的抗体药物研发奠定基础。方法:将in vivo-jetPEI-Gal和pcDNA3.1-CLDN18.2质粒在体外混合后经尾静脉免疫小鼠,筛选效价较高的小鼠进行细胞融合和单克隆筛选,制备CLDN18.2的特异性单克隆抗体,然后对获得的单克隆抗体的亲和力和特异性及其在细胞ELISA、流式细胞术、细胞免疫荧光和免疫沉淀等实验中的应用进行鉴定。结果:共获得15株有较好特异性的CLDN18.2单克隆抗体,其与CLDN18.2结合的EC50s均在纳摩尔或亚纳摩尔级,可在ELISA、免疫沉淀、流式细胞术和细胞免疫荧光实验中用于对CLDN18.2的特异检测,但均不能用于Western blot实验。结论:成功制备并获得了15株可识别蛋白天然构象、亲和力高、特异性好的小鼠抗人CLDN18.2单克隆抗体,为CLDN18.2抗体药物的研发奠定了重要基础。

hCGβ-C3d3基因免疫BALB/c小鼠选择性促进B细胞克隆扩增

评价分子佐剂C3d在基因免疫中选择性促进抗原特异性B细胞增殖作用。分别用质粒pCMV4-hCG-βC3d3和pCMV4-hCGβ免疫BALB/c小鼠,免疫剂量为50 pmol。间隔3周相同剂量加强免疫1次。加强免疫后第1周及第2周,MTT法分析各组小鼠脾脏B细胞和T细胞增殖;ELISPOT法分析两免疫组小鼠脾脏hCGβ抗原特异性IgG分泌细胞。结果显示在加强免疫后第1周及第2周,hCG-βC3d3免疫组B细胞增殖能力显著高于hCGβ免疫组及正常对照组;而各组间T细胞增殖状况未见明显差异。hCG-βC3d3免疫组较hCGβ免疫组小鼠脾细胞分泌IgG的量和分泌hCGβ抗体的细胞数量均明显增加。结果表明分子佐剂C3d对于B细胞具有选择性克隆扩增作用。