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卫氏并殖吸虫基因组DNA文库构建Ⅱ.基因组DNA文库的构建及鉴定 被引量:2
1
作者 冯笑川 张林元 +4 位作者 沈一平 张兆松 陈淑贞 吴观陵 赵慰先 《中国寄生虫病防治杂志》 CSCD 1994年第2期116-118,共3页
以EcoRI酶切安徽地区卫氏并殖吸虫基因组DNA,电泳分离回收0.4~4kb的DNA片段。与EcoRI酶切并经牛肠碱性磷酸脂酶处理的大肠杆菌质粒pUR222载体,在T4DNA连接酶作用下重组连接,构建卫氏并殖吸虫基因... 以EcoRI酶切安徽地区卫氏并殖吸虫基因组DNA,电泳分离回收0.4~4kb的DNA片段。与EcoRI酶切并经牛肠碱性磷酸脂酶处理的大肠杆菌质粒pUR222载体,在T4DNA连接酶作用下重组连接,构建卫氏并殖吸虫基因组DNA文库,获得1.08×106个重组克隆。经重组克隆质粒的快速鉴定和卫氏并殖吸虫基因组DNA探针菌落原位杂交证实,重组克隆中含有与卫氏并殖吸虫基因组DNA同源的DNA插入片段,并初筛到19个阳性重组克隆。表明卫氏并殖吸虫基因组DNA文库构建成功。 展开更多
关键词 卫氏并殖吸虫 基因组 dna文库
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卫氏并殖吸虫基因片段的克隆与鉴定 被引量:4
2
作者 凌家俭 侯敏 +2 位作者 刘剑南 章子豪 张耀娟 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期144-146,共3页
目的 从卫氏并殖吸虫成虫cDDA文库中筛选并鉴定可用于免疫诊断和免疫预防的基因克隆。方法采用预吸收成虫抗原免疫兔血清(IRS,多抗)筛选阳性克隆,经PCR扩增后测定其插入片段的大小。序列分析后,对筛选的重组子进行双酶切,亚克隆入表达载... 目的 从卫氏并殖吸虫成虫cDDA文库中筛选并鉴定可用于免疫诊断和免疫预防的基因克隆。方法采用预吸收成虫抗原免疫兔血清(IRS,多抗)筛选阳性克隆,经PCR扩增后测定其插入片段的大小。序列分析后,对筛选的重组子进行双酶切,亚克隆入表达载体pRESETB,并转化大肠杆菌BL-21细胞,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,对表达产物进行SDS-PAGE和Western blotting分析鉴定。结果 所筛选的阳性克隆插入片段约800bp。DNA序列分析显示其为编码半胱氨酸蛋白酶族组织蛋白酶L的基因序列。Pw-2重组子特异性表达产物约为32kDa,可被卫氏并殖吸虫免疫兔血清特异地识别。结论 从卫氏并殖吸虫成虫cDNA文库筛选的重组质粒Pw-2编码属于半胱氨酸蛋白酶族组织蛋白酶L。 展开更多
关键词 卫氏并殖吸虫 基因片段 克隆 鉴定 重组蛋白
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卫氏并殖吸虫基因片段的亚克隆及其表达的研究 被引量:3
3
作者 凌家俭 侯敏 +2 位作者 刘剑南 章子豪 张耀娟 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2002年第5期357-359,共3页
目的:获得诊断肺吸虫病的特异性重组抗原,以了解其作为免疫诊断抗原的价值。方法:将免疫筛选获得的卫氏并殖吸虫基因克隆双酶切,所得cDNA片段亚克隆入表达载体pRESETB,经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达,以聚丙烯凝胶电泳(SDS-P... 目的:获得诊断肺吸虫病的特异性重组抗原,以了解其作为免疫诊断抗原的价值。方法:将免疫筛选获得的卫氏并殖吸虫基因克隆双酶切,所得cDNA片段亚克隆入表达载体pRESETB,经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达,以聚丙烯凝胶电泳(SDS-PAGE)和免疫印迹法(Westernblotting)对表达产物进行鉴定。结果:成功地将文库中2个大小不同的卫氏并殖吸虫基因片段连接到载体中。其中Pw-2重组子特异性表达产物是分子质量约为32ku的蛋白带,可被卫氏并殖吸虫免疫兔血清特异性识别。结论:成功构建了编码卫氏并殖吸虫特异性抗原的重组克隆Pw-2。 展开更多
关键词 卫氏并殖吸虫 重组抗原 亚克隆 Cdna文库
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卫氏并殖吸虫基因文库的构建——Ⅰ重组克隆的方法 被引量:2
4
作者 冯笑川 张兆松 +4 位作者 陈淑贞 吴观陵 沈一平 赵慰先 张林元 《中国血吸虫病防治杂志》 CAS CSCD 1993年第3期161-163,共3页
以SDS-酚-乙醇沉淀法提取卫氏并殖吸虫成虫基因组DNA,分别用Sau 3A和Eco RI核酸限制性内切酶酶切,电泳回收0.4—4Kb大小的DNA片段,与相应的大肠杆菌质粒载体pBR^(322)或pUR^(222)重组连接,转染大肠杆菌7118。结果显示,pUR^(222)质粒经... 以SDS-酚-乙醇沉淀法提取卫氏并殖吸虫成虫基因组DNA,分别用Sau 3A和Eco RI核酸限制性内切酶酶切,电泳回收0.4—4Kb大小的DNA片段,与相应的大肠杆菌质粒载体pBR^(322)或pUR^(222)重组连接,转染大肠杆菌7118。结果显示,pUR^(222)质粒经碱性磷酸脂酶处理后与DNA片段以1/4(W/W)比例重组连接,获得的重组克隆最多,并且可以利用菌落的色泽不同,从麦康凯培养基平板上直接挑选出重组克隆。是利用质粒载体构建基因文库重组克隆的较好方法。 展开更多
关键词 dna文库 重组克隆 卫氏并殖吸虫
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