RASAL1在同型半胱氨酸致肺血管内皮通透性增加中的作用及机制研究

目的探讨同型半胱氨酸(homocystein,Hcy)对肺微血管内皮细胞(pulmonary microvascular endothelial cells,PMVECs)通透性的影响及Ras蛋白样激活剂(Ras protein activator like,RASAL1)的作用及机制。方法CBS^(+/-)小鼠喂养高蛋氨酸饮食(HMD)16周复制高同型半胱氨酸血症(HHcy)动物模型;HE染色观察肺组织结构变化;qRT-PCR检测肺组织RASAL1、DNMT1 mRNA水平;Western blot检测RASAL1、DNMT1、ZO-1、VE-cadherin蛋白表达;MS-PCR检测RASAL1启动子区甲基化;PMVECs转染Ad-RASAL1检测ZO-1和VE-cadherin表达;si-DNMT1干扰片段转染PMVECs,检测RASAL1表达。结果HMD小鼠血清Hcy水平明显增加,HE染色显示肺组织结构严重紊乱,RASAL1、ZO-1、VE-cadherin表达降低而DNMT1表达增加,RASAL1启动子区甲基化程度增加。PMVECs转染Ad-RASAL1后ZO-1和VE-cadherin表达增加;敲低DNMT1后,RASAL1表达增加。结论Hcy可以导致PMVECs通透性增加,其机制与上调RASAL1甲基化水平有关。

RNA干扰Dnmt1和Dnmt3b对小鼠胚胎成纤维细胞凋亡和基因组DNA甲基化水平的影响

DNA甲基转移酶1(DNMT1)负责DNA甲基化维持,DNA甲基转移酶3b(DNMT3b)主要负责DNA从头甲基化,在体细胞中同时干扰Dnmt1、Dnmt3b表达会给细胞带来何种影响还未见报道。实验以小鼠胚胎成纤维细胞为实验对象,用RNA干扰方法对Dnmt1和Dnmt3b进行敲低,研究分别干扰和同时干扰这两个基因对小鼠胚胎成纤维细胞凋亡、基因组甲基化水平的影响。研究发现,si RNA转染后24 h,Dnmt3b干扰组和Dnmt1+Dnmt3b同时干扰组细胞的增殖细胞核抗原(PCNA)mRNA水平显著降低(P<0.05);转染后48h,Dnmt3b单独干扰组、Dnmt1+Dnmt3b同时干扰组中细胞凋亡显著增加(P<0.05);Dnmt3b单独干扰组细胞基因组甲基化水平下降32%(P<0.01),Dnmt1+Dnmt3b同时干扰组细胞的基因组甲基化水平下降约44%(P<0.01)。结果表明,DNMT3b在小鼠胚胎成纤维细胞正常增殖、基因组甲基化水平的维持上具有重要作用。

DNA甲基化基因DNMT1的研究进展

DNA甲基转移酶1(DNMT1)是哺乳动物基因组表观遗传修饰中DNA甲基化的关键基因,其编码的蛋白是一种分子量大且功能复杂的酶,具有多种调控功能,参与机体发育过程中干细胞生长、细胞增殖、器官发育、衰老和肿瘤发生等多个生物学过程。本文将对DNMT1基因的结构与分子作用机制进行介绍,并总结其表达调控、生物学功能及其与肿瘤等人类疾病相关的研究进展。

DNMT1与UHRF1基因在胃癌细胞系中的表达特点及其与癌细胞DNA甲基化的关系

[目的]探讨DNMT1和UHRF1在胃癌的形成和转化中的表达特点和可能的生物学作用。[方法]提取CIMP型H(High)的胃癌细胞系HGC-27和CIMP型为L(low)的胃癌细胞系MGC803,BGC823及AGS的核酸样品进行UHRF1和DNMT1表达的分析。[结果]DNMT1在MGC823和HGC-27表达水平明显高于其他胃癌细胞系(P<0.01);UHRF1在HGC-27中有表达水平高于其他3个胃癌细胞系(P<0.01)。[结论]胃癌细胞DNA的甲基化不但和DNMT1有关而且和UHRF1也有着密切关系。

BRCA1 affects global DNA methylation through regulation of DNMT1

在 CpG 岛的全球 DNA hypomethylation 结合了本地 hypermethylation 是为乳癌的一个特点，然而，位于这个变化下面的机制留下逃犯。在这研究，我们证明 DNMT1，编码 methylation 维护酶，是 BRCA1 的一个 transcriptional 目标。BRCA1 通过一个潜在的 OCT1 地点和绑定绑在 DNMT1 基因的倡导者为维持 transcriptional 被要求在老鼠和人的房间的倡导者的活跃配置。我们进一步证明 BRCA1 的那损害功能在在 premaligant 阶段在一个 BRCA1 变异的老鼠模型检验的纸巾的几种类型导致全球 DNA hypomethylation，印的 genomic 的损失，和一种开的染色质配置。BRCA1 缺乏也与几 protooncogenes 的显著地增加的表达式层次被联系，包括 c-Fos，哈地岬，和 c-Myc，与在肿瘤的一个更高的表达式，当时乳房的上皮的房间显示了的 premalignant 在肿瘤和控制之间的一个中间的状态。在人的临床的样品，有 DNMT1 的减少的层次的 BRCA1 相互关联的减少的表示，和 CpG 岛的减少的 methylation。因此， BRCA1 通过断然调整 DNMT1 表示阻止全球 DNA hypomethylation，并且这为联系 BRCA1 的乳癌形成提供机制之一。

siRNA沉默膀胱癌T24细胞DNA甲基转移酶1(DNMT1)表达的研究

目的研究siRNA对膀胱癌细胞T24 DNA甲基转移酶1(DNMT1)表达的沉默作用。方法将筛选出的siRNA转染入膀胱癌T24细胞分为空白组、脂质体组、阴性对照组和siRNA组,分别运用RT-PCR、Western blot检测转染后不同时段DNMT1 mRNA水平、蛋白水平变化。结果筛选出的siRNA转染膀胱癌T24细胞DNMT1 24h开始出现mRNA减少,24h、48h、72h分别降至(66.05±4.87)%、(39.36±4.53)%和(40.86±4.81)%(P<0.05)。转染后24h、48h、72h蛋白水平分别降至(90.21±3.68)%、(71.45±3.44)%和(67.74±3.38)%(P<0.05)。结论 siRNA能有效地沉默膀胱癌细胞T24 DNMT1的表达。

肺癌患者血清中DNMT1、DNMT3a、DNMT3b和HDAC1蛋白的表达

目的:研究肺癌患者血清中DNA甲基化转移酶(DNMT)1、DNMT3a、DNMT3b和组蛋白去乙酰化酶1(HDAC1)蛋白的表达情况。方法:采用酶联免疫吸附试验(ELISA)方法测定136例肺癌患者、140例肺良性疾病及145例健康体检者血清中DNMT1、DNMT3a、DNMT3b和HDAC1蛋白的表达,并分析DNMT1、DNMT3a、DNMT3b和HDAC1蛋白表达与肺癌临床病理特征的关系。结果:3组血清中DNMT1、DNMT3a、DNMT3b和HDAC1蛋白表达差异有统计学意义(F=3.281、62.510、37.273、57.721,P<0.05),肺癌患者均高于正常对照及肺良性疾病患者;非条件logistic回归分析提示DNMT1、DNMT3a、DNMT3b和HDAC1蛋白高表达均可影响肺癌的发生发展(P<0.001);肺癌患者血清中DNMT1、DNMT 3a、DNMT 3b和HDAC1蛋白表达无组织学类型特异性(P>0.05),但不同临床分期其蛋白表达差异有统计学意义(t=0.843、0.244、0.222、0.878,P<0.05)。结论:肺癌患者血清中DNMT1、DNMT3a、DNMT3b和HDAC1蛋白的高表达可能在肺癌的发生发展中发挥一定的作用。

DNA甲基转移酶1蛋白在膀胱移行细胞癌中的表达及其临床意义

目的:研究DNA甲基转移酶1(DNA methyltransferase1,DNMT1)在膀胱移行细胞癌(transitional cell carcinoma of the bladder,TCCB)组织中的表达及其与肿瘤生物学行为的关系。方法:应用免疫组织化学SP法检测60例TCCB组织中DNMT1的表达,结合临床资料,分析其与肿瘤生物学行为的相关性。结果:TCCB组织中DNMT1阳性表达率为(86.7%,52/60),明显高于癌旁组织(43.3%,26/60)及正常膀胱组织(33.3%,5/15)(P<0.01);DNMT1蛋白的阳性表达率与肿瘤分化程度和性别呈一定的相关性(P<0.01),与TCCB患者的年龄和临床分期无明显相关性(P>0.05)。结论:DNMT1蛋白过表达在人TCCB的发生和发展中起一定作用。

DNMT1基因与胃癌RASSF1A基因失活的关系

目的研究胃癌组织及癌旁组织中R ASSF1A表达情况,检测沉默DNMT1基因后胃癌SGC-7901细胞系R ASSF1A基因启动子区甲基化状况及R ASSF1A基因表达。方法逆转录-聚合酶链式反应(reversetranscription polymerase chain reaction,R T-PCR)、免疫组织化学方法检测40例胃癌组织和癌旁组织R ASSF1A基因表达情况;R T-PCR、甲基化特异性聚合酶链反应(methylation specific PCR,MSP)检测5-Aza-CdR、RNA干扰技术沉默DNA甲基转移酶1后SGC-7901细胞后R ASSF1A基因表达及DNA甲基化状态改变。结果胃癌组织RASSF1A基因mRNA及蛋白表达率显著低于癌旁组织,(60%vs100%,P<0.05);不同分化程度、临床分期及有无淋巴结转移的胃癌组织中表达差异有统计学意义(P<0.05);SGC-7901细胞RASSF1A基因表达随5-Aza-CdR浓度和作用时间的增加而增强(P<0.05),沉默DNMT1后R ASSF1A基因重新表达,DNA甲基化状态被逆转。结论 R ASSF1A基因在胃癌组织中存在较高的表达缺失,且与胃癌的临床分期、病理分级及淋巴结转移有关,RASSF1A基因可能在DNMT1基因的调控下发生甲基化,丧失其活性。

DNA甲基转移酶1与CD11a基因在系统性红斑狼疮患者中mRNA水平的表达

目的检测系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)患者中DNA甲基转移酶1(DNA methyltransferase 1,DNMT1)和CD11a基因的表达水平,探讨DNMT1的表达异常在SLE发病中的作用。方法用Real-time PCR方法测定SLE患者缓解期、活动期和正常人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)中DNMT1和CD11a基因的表达水平。结果 SLE活动期患者PBMC中DNMT1的表达水平较对照组(P=0.014)和缓解期组(P=0.030)显著下降;缓解期的DNMT1表达水平与对照组(P=0.264)相比差异无统计学意义;SLE患者DNMT1的表达水平与SLE疾病活动指数(SLE disease activity index,SLEDAI)呈现负相关(P<0.05)。SLE活动期患者PBMC中CD11a的表达水平较对照组(P=0.003)显著升高(P<0.05);缓解期的CD11a表达水平与对照组(P=0.250)和缓解期组(P=0.069)相比差异无统计学意义(P>0.05);SLE患者CD11a的表达水平与SLEDAI呈正相关(P<0.05)。SLE患者DNMT1与CD11a的表达水平无显著相关性(P>0.05)。结论 SLE患者PBMC中DNMT1表达水平的降低可能是造成基因组DNA低甲基化的重要原因,使得CD11a等致病基因过度表达,进而导致SLE发病。

DNMT1和p27蛋白在原发性与继发性胶质母细胞瘤中的表达及相关性

目的探讨原发性胶质母细胞瘤和继发性胶质母细胞瘤中DNA甲基转移酶1(DNMT1)蛋白及p27蛋白的表达及相关性。方法收集2000年1月1日至2012年12月31日经手术切除胶质母细胞瘤患者组织蜡块标本64例(原发胶质母细胞瘤32例,继发性胶质母细胞瘤32例)作为研究对象。检测64例胶质母细胞瘤标本和13例正常脑组织中DNMT1蛋白及p27蛋白的表达情况。结果在正常脑组织中,DNMT1蛋白不表达,而在原发性和继发性胶质母细胞瘤中的阳性表达率分别为59.4%和81.3%。在正常脑组织中,p27蛋白的阳性表达率为100.0%,高于其在原发性和继发性胶质母细胞瘤中的50.0%和25.0%(P<0.05)。DNMT1蛋白及p27蛋白在原发性和继发性胶质母细胞瘤中的表达差异存在统计学意义(P<0.05),但两者表达无相关性(r=0.41,P>0.05)。结论 DNMT1蛋白及p27蛋白在原发性和继发性胶质母细胞瘤中的表达存在差异,联合检测肿瘤标本中两者的表达情况有助于判断不同类型胶质母细胞瘤。

DNA甲基转移酶1基因在人肝外胆管癌组织和细胞中的表达及意义

目的:研究DNA甲基转移酶1(DNMT1)在人肝外胆管癌组织和人胆管癌细胞系QBC939中的表达,并分析DNMT1的表达与胆管癌临床病理因素之间的关系,探讨其在胆管癌发生发展过程中的作用。方法:用免疫组织化学法检测DNMT1在24例人肝外胆管癌组织和20例慢性胆管炎组织中的阳性细胞表达率,将二者进行对比并分析其与胆管癌临床病理之间的关系;用RT-PCR和Western Blot分别检测DNMT1在人胆管癌细胞系QBC939中转录水平和蛋白水平的表达情况。结果:(1)在24例胆管癌组织中DNMT1蛋白阳性细胞表达率为(37.57±11.24)%,而在20例伴慢性炎症的胆管壁组织中DNMT1蛋白阳性细胞表达率为(10.73±6.61)%,二者之间的差异具有显著性意义(P=0.005);(2)DNMT1蛋白的异常表达与胆管癌组织的分化程度相关,低分化肿瘤的表达水平最高,其次为中等分化肿瘤,高分化肿瘤的表达水平较低,DNMT1蛋白的异常表达与性别、年龄、肿瘤大小、肿瘤部位、有无淋巴结转移和临床分期无明显关系;(3)在人胆管癌细胞系QBC939中,通过RT-PCR和Western Blot均能检测到DNMT1基因mRNA和蛋白的表达。结论:(1)在胆管癌组织中,DNMT1蛋白的表达较慢性胆管炎组织明显增加,并与肿瘤组织分化程度有关,与性别、年龄、肿瘤大小、肿瘤部位、有无淋巴结转移和临床分期无明显关系,提示DNMT1的高表达可能与胆管癌的发生发展有关,且可能是胆管癌发生中的一个早期分子事件;(2)DNMT1在人胆管癌细胞系QBC939中存在表达。

反义DNMT1、DNMT3b基因真核表达载体联合转染对人胆管癌细胞增殖和凋亡的影响

目的观察联合转染反义DNMT1、DNMT3b基因真核表达载体对人胆管癌细胞株QBC-939的增殖能力和细胞凋亡的影响。方法分别构建反义DNMT1基因和反义DNMT3b基因真核表达载体,脂质体介导法将二者先后转染入QBC-939,经G418筛选和荧光细胞克隆挑选得到稳定转染细胞株,并用Western blot检测转染前后的蛋白表达变化;用MTT法和软琼脂克隆形成试验观察各组细胞的增殖能力,流式细胞术检测细胞生长周期及凋亡率的变化。结果Western blot检测证实转染反义基因能使相应蛋白表达水平降低;联合转染反义DNMT1、DNMT3b基因和单独转染反义DNMT1基因能影响QBC-939的生长曲线,使细胞增殖减慢,并以前者为甚;联合转染反义DNMT1、DNMT3b基因和单独转染反义DNMT1基因的细胞克隆形成率分别为(6.78±0.89)%和(14.86±2.13)%,明显低于未转染组;联合转染反义DNMT1、DNMT3b基因和单独转染反义DNMT1能影响QBC-939的细胞周期,使之阻滞于G1期,细胞凋亡率从(1.63±0.27)%分别增加到(18.47±1.46)%和(6.19±0.78)%;在上述效应检测中,单独转染反义DNMT3b基因实验组对QBC-939细胞的生长无明显影响。结论通过联合转染反义DNMT1和DNMT3b基因真核表达载体,能抑制胆管癌细胞的生长和增殖,并促进凋亡的发生,其效果明显优于单独转染DNMT1反义基因;在DNA甲基化的过程中,DNMT1起着主要的作用,DNMT3b扮演着协同的角色,二者通过甲基化途径对胆管癌的发生发挥作用。

前列腺癌组织中DNMT1的表达与GSTP1、APC甲基化状态的关系及临床意义

目的探讨前列腺癌组织中DNA甲基转移酶1(DNA methyltransferase 1,DNMT1)的表达与谷胱甘肽S转移酶P1(glutathione S transferase P1,GSTP1)、结肠腺瘤性息肉病(adenomatous polyposis coli,APC)甲基化状态的关系及临床意义。方法采用RT-PCR的方法检测56例前列腺癌(prostate cancer,PCa)组织和10例前列腺增生(benign prostatichyperplasia,BPH)组织中DNMT1和GSTP1、APC的mRNA表达,采用甲基化特异性PCR(MS-PCR)的方法检测GSTP1、APC的启动子区CpG岛甲基化状态。结果大多数PCa组织中DNMT1 mRNA高表达(在低分化癌中阳性率为90.0%),而GSTP1和APC低表达(在低分化癌中阳性率分别为23.3%和33.3%),BPH组织中DNMT1 mRNA低表达(40.0%),而GSTP1和APC高表达(分别为90.0%和80.0%),低分化癌与BPH相比,差异有统计学意义(P<0.05);大多数PCa组织中GSTP1、APC启动子区CpG岛呈高甲基化状态(在低分化癌中阳性率分别为83.3%和73.3%),而BPH组织中呈低甲基化(阳性率分别为10.0%和20.0%),低分化癌与BPH相比,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 PCa组织中GSTP1、APC失活的机制可能与DNMT1的高表达导致其启动子区CpG岛异常高甲基化有关。

AML和ALL患者骨髓DNMT1,SFRP1基因甲基化及其与临床病理特征和预后相关性研究

目的检测急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)和急性淋巴细胞白血病(acute lymphoblastic leukemia,ALL)患者骨髓中DNA甲基化转移酶1(DNA methyltransferase 1,DNMT1)、分泌型卷曲相关蛋白1(secreted frizzled related protein 1,SFRP1)基因甲基化及mRNA表达水平,探讨其与临床病理特征和预后的关系。方法根据FBA(French-American-British classification systems;法-美-英分型系统)标准选取2019年11月~2020年11月于邯郸市中心医院新诊断的急性白血病患者70例,其中AML 50例和ALL 20例;另选取65例非恶性血液病患者作为正常对照组。用甲基化特异性聚合酶链式反应(methylation-specific PCR,MSP)检测所有研究对象骨髓标本中DNMT1和SFRP1基因甲基化状态,并分析两基因甲基化与AML和ALL患者临床参数之间的关系;用实时定量PCR检测所有研究对象化疗前和化疗缓解后骨髓标本中DNMT1,SFRP1和β-catenin mRNA表达;Pearson相关分析明确DNMT1,SFRP1和β-catenin mRNA水平之间的相关性;对所有患者进行随访,比较DNMT1和SFRP1基因甲基化与预后的关系。结果AML和ALL患者中DNMT1基因甲基化发生率分别为26.0%和25.0%,较对照组(73.8%)显著下降(χ^(2)=47.683,P<0.001);SFRP1基因甲基化发生率分别为78.0%和85.0%,较正常对照组(18.5%)显著增加(χ^(2)=55.265,P<0.001),差异均有统计学意义。AML组DNMT1基因甲基化与WBC水平、遗传学预后分组有明显相关性(χ^(2)=6.524,5.732,均P<0.001);SFRP1基因甲基化与WBC水平、BM水平和遗传学预后分组有明显相关性(χ^(2)=8.115,5.395,5.060,均P<0.05)。ALL组DNMT1基因甲基化只与遗传学预后分组有关(χ^(2)=4.802,P<0.05);SFRP1基因甲基化与WBC水平、遗传学预后分组有明显相关性(χ^(2)=4.920,5.115,均P<0.05)。与对照组相比,AML和ALL患者化疗前DNMT1和β-catenin mRNA表达均显著升高(t=4.807~10.456,均P<0.05),SFRP1表达显著下降(t=24.791,12.069,均P<0.05)。与化疗前相比,AML和ALL患者化疗后DNMT1和β-catenin mRNA表达显著下降(t=3.461~6.374,均P<0.05),SFRP1表达显著上升(t=17.076,7.454,P<0.05)。两组患者DNMT1与SFRP1表达呈明显负相关(r=-0.328,-0.315,均P<0.05);SFRP1与β-catenin表达呈明显正相关(r=0.682,0.728,均P<0.05);两组患者DNMT1与β-catenin表达均无明显相关性。两组患者DNMT1基因甲基化生存率高于其未甲基化生存率(χ^(2)=3.862,3.679,均P<0.05);SFRP1基因甲基化生存率低于其未甲基化生存率(χ^(2)=2.927,3.155,均P<0.05)。结论DNMT1和SFRP1基因甲基化与恶性血液病患者临床病理及预后相关,究其原因可能与DNMT1和SFRP1基因甲基化异常激活Wnt/β-catenin信号通路有关。

应用染色质免疫沉淀技术分析DNMT3b和HDAC1蛋白与SLC22A18基因启动子的结合

目的建立优化的染色质免疫沉淀技术(ChIP),分析乳腺癌细胞MDA-MB-231中DNA甲基转移酶3b(Dnmt3b)和组蛋白去乙酰化酶1(HDAC1)与SLC22A18基因启动子区的结合情况。方法建立并优化ChIP实验技术,运用ChIP技术检测DNA甲基转移酶抑制剂5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-aza-dc)和组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古霉素A(TSA)分别单独和联合作用于人乳腺癌细胞MDA-MB-231后,用Dnmt3b和HDAC1特异性抗体沉淀DNA,聚合酶链式反应(PCR)检测SLC22A18基因5'端特异性序列,免疫印迹法(Westernblotting)检测Dnmt3b和HDAC1蛋白的表达情况。结果获得了优化的ChIP实验条件,Dnmt3b和HDAC1抗体沉淀的染色质片段中扩增出SLC22A18基因5'端特异性序列。5-aza-dc、TSA单独用药可抑制DNMT3b、HDAC1与SLC22A18启动子区特异序列的结合,5-aza-dc和TSA联合作用可以明显抑制DNMT3b、HDAC1与SLC22A18启动子的结合;Western blotting结果表明,5-aza-dc、TSA单独及联合用药不影响DNMT3b和HDAC1蛋白的表达。结论 DNMT3b和HDAC1在MDA-MB-231细胞内结合于SLC22A18基因启动子的特异区域,参与该基因的表达调控。

DNMT1基因在口腔鳞状细胞癌中的表达及意义

采用Real-Time PCR检测DNA甲基转移酶-1(DNMT1)mRNA在20例口腔正常黏膜组织及43例口腔鳞状细胞癌(OSCC)组织中的表达,用免疫组织化学法和Western blot分别检测DNMTl蛋白在组织样本中的表达。结果显示DNMTl mRNA在OSCC中高表达(Z=-2.028,P<0.05),43例OSCC组织中,DNMTl蛋白阳性表达率为81%,而在20例口腔正常黏膜组织中的阳性表达率为25%(P<0.05)。DNMTl有可能参与OSCC的发生发展。

DNMT3a通过提升基因内部甲基化介导紫杉醇诱导的LINE-1异常表达

药物诱导的长散在重复序列LINE-1异常激活可促进细胞基因组不稳定,而基因组不稳定是促进肿瘤发生发展和耐药表型形成的重要因素。因此,探索LINE-1异常激活的分子机制具有重要的理论和临床意义。DNA甲基化是调控基因表达的重要方式,已知DNA甲基转移酶家族成员DNMT3a不仅能通过促进基因启动子甲基化抑制基因表达,还可通过增强基因内部甲基化上调基因表达。本实验室前期研究发现,将乳腺癌细胞暴露于化疗药物可诱导LINE-1异常高表达,但LINE-1启动子甲基化水平并无显著改变。本研究进一步探讨了在化疗药物压力下DNMT3a是否可通过增强LINE-1基因内部甲基化水平促进LINE-1在乳腺癌细胞中的异常高表达。ChIP实验和甲基分析结果显示,用化疗药物紫杉醇(PTX)处理乳腺癌细胞,不仅可以诱导DNMT3a表达,而且可以促进DNMT3a与LINE-1基因内部区域的结合,提升其基因内部甲基化水平,进而上调LINE-1的表达水平。利用表达载体增加细胞内DNMT3a的表达水平,可显著上调LINE-1基因内部的甲基化及基因的表达水平,而下调DNMT3a的表达可有效抑制LINE-1表达。上述研究结果表明,DNMT3a介导的基因非启动子区甲基化在药物诱导的LINE-1异常激活中发挥重要作用,为认识LINE-1在乳腺癌化疗耐药性形成过程中异常激活的机制提供了新思路。

5-氮杂-2′-脱氧胞苷和MS-275对非小细胞肺癌细胞株生长及DNMT1蛋白表达的影响

目的:探讨表观治疗对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞DNMT1蛋白表达的影响及生物学作用。方法:NSCLC细胞分组治疗,CCK-8、MTT检测表观药物对NSCLC细胞的影响,Western blot检测其对NSCLC细胞DNMT1蛋白表达的影响。结果:CCK-8和MTT结果显示,表观治疗可抑制NSCLC细胞的增殖及生长;Western blot结果显示,5-氮杂-2′-脱氧胞苷和MS-275的表观治疗可降低DNMT1蛋白的表达。结论:5-氮杂-2′-脱氧胞苷和MS-275的表观治疗能有效抑制NSCLC细胞中DNMT1蛋白的表达,并且对NSCLC细胞的增殖和生长有明显抑制作用。