DNA甲基转移酶1蛋白在膀胱移行细胞癌中的表达及其临床意义

目的:研究DNA甲基转移酶1(DNA methyltransferase1,DNMT1)在膀胱移行细胞癌(transitional cell carcinoma of the bladder,TCCB)组织中的表达及其与肿瘤生物学行为的关系。方法:应用免疫组织化学SP法检测60例TCCB组织中DNMT1的表达,结合临床资料,分析其与肿瘤生物学行为的相关性。结果:TCCB组织中DNMT1阳性表达率为(86.7%,52/60),明显高于癌旁组织(43.3%,26/60)及正常膀胱组织(33.3%,5/15)(P<0.01);DNMT1蛋白的阳性表达率与肿瘤分化程度和性别呈一定的相关性(P<0.01),与TCCB患者的年龄和临床分期无明显相关性(P>0.05)。结论:DNMT1蛋白过表达在人TCCB的发生和发展中起一定作用。

DNA甲基转移酶1与CD11a基因在系统性红斑狼疮患者中mRNA水平的表达

目的检测系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)患者中DNA甲基转移酶1(DNA methyltransferase 1,DNMT1)和CD11a基因的表达水平,探讨DNMT1的表达异常在SLE发病中的作用。方法用Real-time PCR方法测定SLE患者缓解期、活动期和正常人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)中DNMT1和CD11a基因的表达水平。结果 SLE活动期患者PBMC中DNMT1的表达水平较对照组(P=0.014)和缓解期组(P=0.030)显著下降;缓解期的DNMT1表达水平与对照组(P=0.264)相比差异无统计学意义;SLE患者DNMT1的表达水平与SLE疾病活动指数(SLE disease activity index,SLEDAI)呈现负相关(P<0.05)。SLE活动期患者PBMC中CD11a的表达水平较对照组(P=0.003)显著升高(P<0.05);缓解期的CD11a表达水平与对照组(P=0.250)和缓解期组(P=0.069)相比差异无统计学意义(P>0.05);SLE患者CD11a的表达水平与SLEDAI呈正相关(P<0.05)。SLE患者DNMT1与CD11a的表达水平无显著相关性(P>0.05)。结论 SLE患者PBMC中DNMT1表达水平的降低可能是造成基因组DNA低甲基化的重要原因,使得CD11a等致病基因过度表达,进而导致SLE发病。

RNA干扰Dnmt1和Dnmt3b对小鼠胚胎成纤维细胞凋亡和基因组DNA甲基化水平的影响

DNA甲基转移酶1(DNMT1)负责DNA甲基化维持,DNA甲基转移酶3b(DNMT3b)主要负责DNA从头甲基化,在体细胞中同时干扰Dnmt1、Dnmt3b表达会给细胞带来何种影响还未见报道。实验以小鼠胚胎成纤维细胞为实验对象,用RNA干扰方法对Dnmt1和Dnmt3b进行敲低,研究分别干扰和同时干扰这两个基因对小鼠胚胎成纤维细胞凋亡、基因组甲基化水平的影响。研究发现,si RNA转染后24 h,Dnmt3b干扰组和Dnmt1+Dnmt3b同时干扰组细胞的增殖细胞核抗原(PCNA)mRNA水平显著降低(P<0.05);转染后48h,Dnmt3b单独干扰组、Dnmt1+Dnmt3b同时干扰组中细胞凋亡显著增加(P<0.05);Dnmt3b单独干扰组细胞基因组甲基化水平下降32%(P<0.01),Dnmt1+Dnmt3b同时干扰组细胞的基因组甲基化水平下降约44%(P<0.01)。结果表明,DNMT3b在小鼠胚胎成纤维细胞正常增殖、基因组甲基化水平的维持上具有重要作用。

肺癌患者血清中DNMT1、DNMT3a、DNMT3b和HDAC1蛋白的表达

目的:研究肺癌患者血清中DNA甲基化转移酶(DNMT)1、DNMT3a、DNMT3b和组蛋白去乙酰化酶1(HDAC1)蛋白的表达情况。方法:采用酶联免疫吸附试验(ELISA)方法测定136例肺癌患者、140例肺良性疾病及145例健康体检者血清中DNMT1、DNMT3a、DNMT3b和HDAC1蛋白的表达,并分析DNMT1、DNMT3a、DNMT3b和HDAC1蛋白表达与肺癌临床病理特征的关系。结果:3组血清中DNMT1、DNMT3a、DNMT3b和HDAC1蛋白表达差异有统计学意义(F=3.281、62.510、37.273、57.721,P<0.05),肺癌患者均高于正常对照及肺良性疾病患者;非条件logistic回归分析提示DNMT1、DNMT3a、DNMT3b和HDAC1蛋白高表达均可影响肺癌的发生发展(P<0.001);肺癌患者血清中DNMT1、DNMT 3a、DNMT 3b和HDAC1蛋白表达无组织学类型特异性(P>0.05),但不同临床分期其蛋白表达差异有统计学意义(t=0.843、0.244、0.222、0.878,P<0.05)。结论:肺癌患者血清中DNMT1、DNMT3a、DNMT3b和HDAC1蛋白的高表达可能在肺癌的发生发展中发挥一定的作用。

前列腺癌组织中DNMT1的表达与GSTP1、APC甲基化状态的关系及临床意义

目的探讨前列腺癌组织中DNA甲基转移酶1(DNA methyltransferase 1,DNMT1)的表达与谷胱甘肽S转移酶P1(glutathione S transferase P1,GSTP1)、结肠腺瘤性息肉病(adenomatous polyposis coli,APC)甲基化状态的关系及临床意义。方法采用RT-PCR的方法检测56例前列腺癌(prostate cancer,PCa)组织和10例前列腺增生(benign prostatichyperplasia,BPH)组织中DNMT1和GSTP1、APC的mRNA表达,采用甲基化特异性PCR(MS-PCR)的方法检测GSTP1、APC的启动子区CpG岛甲基化状态。结果大多数PCa组织中DNMT1 mRNA高表达(在低分化癌中阳性率为90.0%),而GSTP1和APC低表达(在低分化癌中阳性率分别为23.3%和33.3%),BPH组织中DNMT1 mRNA低表达(40.0%),而GSTP1和APC高表达(分别为90.0%和80.0%),低分化癌与BPH相比,差异有统计学意义(P<0.05);大多数PCa组织中GSTP1、APC启动子区CpG岛呈高甲基化状态(在低分化癌中阳性率分别为83.3%和73.3%),而BPH组织中呈低甲基化(阳性率分别为10.0%和20.0%),低分化癌与BPH相比,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 PCa组织中GSTP1、APC失活的机制可能与DNMT1的高表达导致其启动子区CpG岛异常高甲基化有关。

应用染色质免疫沉淀技术分析DNMT3b和HDAC1蛋白与SLC22A18基因启动子的结合

目的建立优化的染色质免疫沉淀技术(ChIP),分析乳腺癌细胞MDA-MB-231中DNA甲基转移酶3b(Dnmt3b)和组蛋白去乙酰化酶1(HDAC1)与SLC22A18基因启动子区的结合情况。方法建立并优化ChIP实验技术,运用ChIP技术检测DNA甲基转移酶抑制剂5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-aza-dc)和组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古霉素A(TSA)分别单独和联合作用于人乳腺癌细胞MDA-MB-231后,用Dnmt3b和HDAC1特异性抗体沉淀DNA,聚合酶链式反应(PCR)检测SLC22A18基因5'端特异性序列,免疫印迹法(Westernblotting)检测Dnmt3b和HDAC1蛋白的表达情况。结果获得了优化的ChIP实验条件,Dnmt3b和HDAC1抗体沉淀的染色质片段中扩增出SLC22A18基因5'端特异性序列。5-aza-dc、TSA单独用药可抑制DNMT3b、HDAC1与SLC22A18启动子区特异序列的结合,5-aza-dc和TSA联合作用可以明显抑制DNMT3b、HDAC1与SLC22A18启动子的结合;Western blotting结果表明,5-aza-dc、TSA单独及联合用药不影响DNMT3b和HDAC1蛋白的表达。结论 DNMT3b和HDAC1在MDA-MB-231细胞内结合于SLC22A18基因启动子的特异区域,参与该基因的表达调控。

DNA甲基转移酶1在人瘢痕疙瘩成纤维细胞中的表达及意义

目的探讨DNA甲基转移酶1（DNA methyltransferase1，DNMT1）在瘢痕疙瘩的不同生长期和不同部位的成纤维细胞表达及其意义。方法收集53例瘢痕疙瘩患者手术切除的瘢痕疙瘩标本，并按生长期分为A（〈6个月）、B（6～12个月）、C（1～2年）、D（〉2年）4组；免疫组织化学法检测各组标本正常皮肤、浸润部、增生部及老化部成纤维细胞DNMT1的表达并比较差异；RT-PCR法检测各组标本及不同部位成纤维细胞DNMT1mRNA的表达。结果DNMT1在成纤维细胞中主要分布于细胞核内；瘢痕疙瘩成纤维细胞DNMT1蛋白阳性表达率（72％）及DNMT1mRNA表达均高于正常皮肤成纤维细胞（8％，P=0．001）；瘢痕疙瘩生长期较短组成纤维细胞DNMT1阳性表达率（100％，评分：10．47±1．85）及DNMT1mRNA表达均高于生长期较长组（45％，评分：7．71±1．80，P=0．007）；瘢痕疙瘩浸润部（100％，评分：10．47±1．85）成纤维细胞DNMT1阳性表达率及DNMT1mRNA表达均高于增生部（78％，评分：6．63±1．75）与老化部（38％，评分：5．53±1．55，P=0．001）。结论DNMT1在瘢痕疙瘩发病中具有重要作用；随着瘢痕疙瘩生长期的延长，DNMT1的表达有降低趋势；随着瘢痕疙瘩中央成纤维细胞老化，DNMT1表达降低。提示DNMT1在瘢痕疙瘩生长过程中起着重要的作用，并且与瘢痕疙瘩浸润生长密切相关。

DNA甲基转移酶1在胰腺癌组织中的表达及其临床意义

目的 探讨DNA甲基转移酶1（DNMT1）在胰腺癌组织中的表达及其临床意义.方法 收集手术切除的30例胰腺癌组织和配对癌旁组织.采用实时定量PCR法检测DNMT1 mRNA的表达;免疫组织化学法检测DNMT1蛋白的表达;分析胰腺癌组织DNMT1蛋白表达强度与临床病理参数之间的关系.结果 胰腺癌组织中DNMT1 mRNA的表达量为2.32（1.17～5.17）,显著高于配对癌旁组织的0.78（0.07～3.14,P＜0.05）.胰腺癌组织中导管细胞DNMT1蛋白表达阳性率为（54.5±21.2）%,显著高于癌旁组织（10.9±15.0）%的表达阳性率（P＜0.01）.以胰腺癌导管细胞DNMT1阳性率54.5%为界,分为高表达组（19例）和低表达组（11例）.DNMT1表达强度和临床分期（χ^2=6.897,P=0.029）、淋巴结转移（χ^2=4.739,P=0.029）、神经浸润与否（χ^2=5.44,P=0.020）相关,而与年龄、性别、肿瘤位置、肿瘤大小、肿瘤分化、血清CEA和CA19-9浓度无关.结论 胰腺癌组织DNMT1 mRNA和蛋白表达明显增加,DNMT1蛋白表达强度与胰腺癌的侵袭力、淋巴结转移和神经浸润相关.

RNA干扰DNA甲基转移酶1对人胰腺癌PaTu8988细胞增殖和凋亡的影响

目的观察以DNA甲基转移酶1（DNA methy transferas 1，DNMT1）基因为靶基因的RNA干扰对人胰腺癌PaTu8988细胞增殖及凋亡的影响。方法设计、合成针对DNMT1基因的siRNA和阴性对照siRNA（N—siRNA）。实验分为空白对照组、脂质体组（仅予脂质体）、N—siRNA组（转染30 nmol N-siRNA）、siRNA组（转染30 nmol siRNA）。siRNA转染48h后，实时PCR法检测DNMT1 mRNA水平；WST-8法检测细胞增殖；流式细胞技术检测细胞凋亡。结果siRNA组DNMT1mRNA的抑制率为（86．0±4．3）％，明显高于N—siRNA组的（40．1±2．2）％和空白对照组的0（P〈0．01）；细胞存活率为（47．6±5．6）％，明显低于N—siRNA组的（68．1±4．1）％和空白对照组的100％（P〈0．01）；细胞凋亡率为（14．94±2．89）％，明显高于空白对照组的（7．51±1．12）％、脂质体组的（7．06±0．39）％、N—siRNA组的（8．84±1．44）％（均P〈0．01）。结论siRNA能特异、有效地抑制人胰腺癌PaTu8988细胞DNMT1 mRNA的表达，同时抑制细胞增殖、促进细胞凋亡。

燃煤污染型砷中毒患者DNA甲基转移酶1mRNA的表达及临床意义

目的了解DNA甲基转移酶1（DNMT1）mRNA在燃煤污染型地方性砷中毒（简称地砷病）患者中的转录及表达情况，探讨其在地砷病发生、发展乃至癌变中的作用。方法2008年，在贵卅f省兴仁县交乐乡燃煤污染型地砷病病区，按“地方性砷中毒诊断标准”选择68例地砷病患者（轻度24例、中度28例，重度16例），其中有40例经过皮肤病理学诊断，分为一般病变组（20例）、癌前病变组（14例）及癌变组（6例）。在距病区约12km的非砷暴露村大果朵村．选择23例居民作为对照组。在知情同意的原则下，采集上述被调查者的外周血，采用实时荧光定量PCR（FQ—PCR）检测血中DNMT1mRNA的表达。另收集自愿接受手术治疗的61例地砷病患者皮肤组织标本（一般病变34例、癌前病变21例，癌变6例）和15例正常皮肤组织标本，采用免疫组织化学法检测地砷病患者皮肤及对照皮肤组织中DNMT1蛋白的表达。结果轻、中、重度地砷病患者外周血DNMT1mRNA表达分别为0．22183±0．59509、0．24611±0．50979和0．38927±0．41133，轻、中度患者的DNMT1mRNA表达量明显低于对照组（0．69595±0．46398，P均〈0．01）；一般病变组、癌前病变组和癌变组患者外周血中DNMTlmRNA表达分别为0．32064±0．54746、0．31309±0．52913和0．15907±0．34256，均低于对照组（0．69595±0．46398，P均〈0．05）。一般病变组、癌前病变组以及癌变组皮肤DNMT1蛋白阳性表达率分别为88．24％（30／34）、100．00％（21／21）和100．00％（6／6），与对照组[0（o／15）]比较表达增强（P均〈0．01），并随患者皮肤损害程度加重而逐渐增强（r=0．740，P〈0．01）。结论DNMT1参与了砷中毒的发生发展，其蛋白表达增强是砷中毒发生的早期事件，DNMT1有望成为砷中毒诊疗的新靶点。

靶向性沉默DNMTl基因对胰腺癌细胞DNA甲基化的影响

目的观察DNA甲基转移酶1（DNMTl）基因沉默后对人胰腺癌PaTu8988细胞的DNMT活性及hMLH·1基因CpG岛DNA甲基化状态的影响。方法由美国Ambion公司设计合成DNMTIsiRNA和阴性对照siRNA，分别用15、30nmol／L的浓度转染胰腺癌PaTu8988细胞，以未转染组细胞作为对照。应用实时PCR和蛋白质印迹法检测DNMTlmRNA和蛋白的表达；用DNMT活性检测试剂盒检测其活性；用亚硫酸氢盐测序PCR（BSP）法检测hMLH-1基因CpG岛的甲基化状态；实时PCR法检测hMLH-1mRNA的表达。结果转染48h后，DNMTlsiRNAl5、30nmol／L组细胞DNMTlmRNA表达量分别为0．573±0．026和0．143-3-0．044，显著低于对照组的1．020±0．217及阴性siRNA15、30nmol／L组的0．900±0．475和0．938±0．327（P值均〈0．05）；DNMTlsiRNA组的DNMTl蛋白表达亦低于对照组和阴性siRNA组。DNMTlsiRNAl5、30nmol／L组细胞DNMT活性分别为0．364±0．124和0．250±0．072，明显低于对照组的0．931±0．065及阴性siRNA15、30nmol／L组的0．665±0．055和0．472±0．040。DNMT活性与DNMTlmRNA表达呈正相关（r=0．69，P〈0．01）。DNMTlRNA干扰后导致hMLH-1基因CpG位点的8个甲基化减少到1个甲基化。结论DNMTlsiRNA能特异性抑制胰腺癌PaTu8988细胞DNMTl基因的表达，明显抑制DNMT的活性，并引起hMLH-1基因CpG岛去甲基化。

DNA甲基转移酶1抑制对涎腺腺样囊性癌细胞生长、侵袭及转移的影响

目的研究DNA甲基转移酶1（DNA methyltransferases 1，DNMT-1）表达抑制对涎腺腺样囊性癌（salivary adenoid cystic carcinoma，SACC）细胞体内、体外的生物学影响，探讨DNMT-1在SACC发生、侵袭及转移中的作用。方法对前期实验建立的DNMT-1表达稳定抑制的ACC-M细胞（实验干扰组）、空载对照ACC—M细胞系（空载对照组）及ACC—M细胞系（空白对照组），在体外分别应用甲基噻唑基四唑（MTT）法生长曲线分析、流式细胞周期分析、平板克隆实验、体外侵袭能力分析等方法，体内对裸鼠皮下、尾静脉注射肿瘤细胞，综合分析评估DNMT-1表达抑制对ACC—M细胞体内增殖、侵袭及转移的影响。结果实验干扰组细胞倍增时间延长[（34．7±2．1）h]、细胞周期S期比例[（17．4±1．7）％]、克隆形成率[（43．0±1．3）％]降低，与空白对照组[分别为（26．2±3．1）h、（31．5±2．0）％、（71．0±4．7）％]及空载对照组[分别为（28．4±3．9）h、（39．0±2．0）％、（66．0±5．2）％]差异有统计学意义（P〈0．05）；各组体外侵袭能力的差异无统计学意义（P〉0．05）；体内DNMT-1表达稳定抑制的ACC—M细胞，其皮下成瘤率（6／10）、瘤体体积[（2．18±0．83）mm^3]、重量[（O．0156±0．0046）g]均显著低于空白对照组[分别为10／10，（155．44±1．67）mm^3、（0．0724±0．0157）g]及空载对照组[分别为10／10、（147．46±1．73）mm^3、（0．0729±0．0177）g]，差异均有统计学意义（P〈0．05）；各组的肺转移率差异无统计学意义（P〉0．05）；DNMT-1表达稳定抑制的ACC-M细胞，其肺转移瘤的个数[（2．0±0．5）个]、直径[（70．0±20．3）μm]均显著低于空白[（28．0±5．5）个、（195．0±25．4）μm]及空载（27．0±4．5）个、（190．0±19．9）μm]对照组，P〈0．05。结论抑制DNMT-1的表达能有效降低ACC细胞的生长、增殖及转移能力。

沉默DNA甲基转移酶上调N-myc下游调节基因1表达对前列腺癌DU145细胞生物学行为的影响

目的观察小干扰RNA（siRNAs）沉默DNA甲基转移酶（DNMTs）上调N-myc下游调节基因1（NDRG1）表达对前列腺癌DU145细胞生物学行为的影响。方法使用siRNAs分别抑制DU145细胞中DNMT1、DNMT3b及DNMT1＋DNMT3b的表达；使用Westernblot、实时定量反转录聚合酶链反应（RT—qPCR）检测细胞中DNMT1、DNMT3b及NDRG1的表达改变；通过细胞计数试剂盒（CCK-8）、Muse凋亡检测仪、划痕实验和Transwell侵袭实验，检测细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭能力的改变；筛选上述改变最显著组DU145细胞，抑制细胞中NDRG1表达，再次检测上述细胞生物学行为。结果Westernblot及RT-qPCR结果显示，与对照组比较，DNMT1抑制组、DNMT3b抑制组及联合抑制组的NDRG1mRNA（1．59±0．03，1．23±0．01，1．36±0．11比0．90±0．15，1．00±0．03）和蛋白（1．07±0．16，0．49±0．01，0．92±0．09比0．23±0．04，0．30±0．07）表达显著增加（P〈0．05）。CCK-8结果显示，在24、48、72h，DNMT1抑制组吸光度（A）值为0．189±0．030、0．266±0．048、0．419±0．058；DNMT3b抑制组为0．221±0．023、0．318±0．072、0．498±0．064；联合抑制组为0．199±0．021、0．284±0．062、0．488±0，091，与对照组比较，显著减少（P〈0．05）。凋亡检测结果显示，DNMT1抑制组凋亡率为（22．40±1．36）％、DNMT3b抑制组为（14．20±0．80）％、联合抑制组为（17．60±0．74）％，与对照组比较，显著增加（P〈0．05）。划痕实验结果显示，DNMT1抑制组划痕面积愈合率为（53．01±3．22）％、DNMT3b抑制组为（70．97±2．12）％、联合抑制组为（63．93±4．42）％，与对照组比较显著减少（P〈0．05）。Transwell实验结果显示，DNMT1抑制组侵袭细胞数为（16±3）个、DNMT3b抑制组为（32±5）个、联合抑制组为（20±4）个，与对照组比较，显著减少（P〈0．05）。其中，DNMT1抑制组效果最显著（P〈0．05），联合抑制未见显著协同效应。与对照组比较，NDRG1-siRNA可显著逆转由DNMT1-siRNA引起的DU145细胞生物学行为改变（P〈0．05）。结论通过抑制DNMT1、DNMT3b在前列腺癌DU145细胞中的表达，可部分恢复NDRG1的表达，并可显著抑制肿瘤细胞增殖，促进细胞凋亡，减弱细胞迁移及侵袭能力，其中单独抑制DNMT1效果最显著．联合抑制无明显协同效应．提示DNMT1可以成为前列腺癌去甲基化治疗的一个有效靶点。

氢醌致人支气管上皮细胞DNA甲基化改变中聚ADP-核糖聚合酶1的作用

【摘要】目的观察氢醌诱导体外细胞DNA甲基化水平改变，探讨聚ADP-核糖聚合酶l[poly（ADP．ribose）polymerasel，PARPll在该过程中的作用。方法以10、20、40、60、80μmol／L浓度的氢醌分别处理人支气管皮细胞（16HBE）及其PARPl缺陷细胞（16HBE—shPARP1）48h，对照组加入等体积的PBS溶液。采用高效毛细管电泳检测基因组DNA整体甲基化水平，检测PARP1和DNA甲基转移酶1（DNAmethvltransferases1，DNMT1）mRNA表达的变化。结果16HBE和16HBE．shPARPl细胞基因组整体甲基化百分比（mCpG％）分别为（4．89％±O．07％）和（9．53％±0．51％）。经5．氮杂脱氧胞苷（DAC）处理72h后，mCpG％值分别下降为（3．07％±0．12％）和（6．34％±0．3％），经单因素方差分析，2种细胞不同处理组mCpG％的差异有统计学意义（F值为61．25和60．36，均P〈0．01）。16HBE细胞各氢醌染毒组的PARPImRNA相对表达分别为对照组的145．0％、159．0％、169．0％、215．0％和236．0％，差异均有统计学意义（P〈0．01）；16HBE．shPARPl细胞，各氢醌染毒组PARPlmRNA相对表达水平分别为对照组的170．0％、223．0％、264．0％、327．0％和320．0％，差异均有统计学意义（P〈0．01）。当氢醌染毒剂量达到20、40、60、80μmol／L，16HBE细胞DNMT1mRNA相对表达水平分别为对照组的114．0％、126．0％、136．0％和162．0％，差异有统计学意义（均P〈0．01）；当氢醌染毒剂量达10、20、40、60、80μmol／L，16HBE—shPARPl细胞DNMT]mRNA相对表达水平分别为对照组的141．0％、165．2％、186．9％、202．1％和217．3％，差异有统计学意义（P〈0．01）。结论氢醌能引起16HBE细胞低甲基化，PARP1可通过影响DNMT1的表达及改变DNMT1的活性来调节16HBE细胞DNA甲基化改变。

探究动脉粥样硬化疾病进程中三个关键DNA甲基转移酶的表达变化

目的:通过构建体内外动脉粥样硬化(AS)模型探究动脉粥样硬化疾病进程中三个关键DNA甲基转移酶的表达变化。方法:14只6周龄的Apo E基因敲除(ApoE^(-/-))的C57BL/6J雄性小鼠,14只6周龄的野生型C57BL/6J雄性小鼠分别随机分两组进行高脂喂养或正常饮食喂养,构建AS体内模型观察主动脉组织病理形态学改变,全自动生物分析仪测定血脂水平,实时荧光定量PCR(qPCR)检测小鼠肝脏组织DNA甲基转移酶(DNMT1,DNMT3A,DNMT3B)的表达变化;利用THP-1构建泡沫细胞模型,qPCR检测DNMTs表达变化。结果:ApoE^(-/-)高脂饮食和ApoE^(-/-)正常饮食小鼠主动脉弓和无名动脉均出现粥样硬化斑块;ApoE^(-/-)高脂饮食和正常饮食小鼠外周血总胆固醇TC显著高于野生型小鼠对应饮食组(P<0.01),同一组内(ApoE^(-/-)小鼠组或野生型小鼠组)高脂饮食小鼠TC显著高于正常饮食小鼠;同普通饮食野生型小鼠组相比,野生型小鼠高脂饮食组和ApoE^(-/-)高脂饮食组DNMT3A表达水平降低(P=0.025,P=0.018),DNMT3B表达水平降低(P=0.006,P=0.013);THP-1细胞泡沫化过程中,DNMT1表达水平显著降低(P=0.022)。结论:肝脏组织及单核细胞DNA甲基转移酶DNMTs的表达改变,可能在动脉粥样硬化疾病发生中发挥重要作用。

燃煤污染型砷中毒人群MGMT基因甲基化、转录及表达的研究

目的了解O6-甲基鸟嘌呤DNA甲基转移酶基因(MGMT基因)启动子区甲基化、转录及表达以及DNA甲基转移酶1(DNMT1)的转录及表达与砷中毒的关系。方法采集68例燃煤污染型砷中毒(以下简称砷中毒)患者(轻度24例、中度28例、重度16例)及23例非病区居民外周血。用甲基化特异性PCR法(MSP)检测MGMT基因启动子区甲基化,实时荧光定量PCR(FQ-PCR)法检测MGMT及DNMT1 mRNA的水平。利用自愿手术治疗的砷中毒患者皮肤组织标本(61例,其中34例为一般病变,21例为癌前病变,6例为癌变)和对照皮肤组织标本(15例),以免疫组织化学(IHC)法检测砷中毒患者及对照皮肤组织中MGMT及DNMT1蛋白的表达。结果 MGMT基因启动子区甲基化阳性率与砷中毒程度有关(χ2=13.739,P<0.01)。砷中毒组MGMT mRNA表达水平与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05);MGMT基因启动子区甲基化患者和非甲基化患者之间MGMT mRNA和DNMT1 mRNA表达差异无统计学意义(P>0.05)。但轻、中度患者DNMT1 mRNA表达明显低于对照组(P<0.01);癌前病变组和癌变组皮肤组织中MGMT蛋白表达明显低于对照组(P<0.01),与皮肤损害程度有关(rs=-0.446,P<0.01);MGMT基因启动子区甲基化患者MGMT蛋白表达明显低于非甲基化组(P<0.05)。砷中毒组皮肤组织中DNMT1蛋白表达强于对照组(P<0.01),并与皮肤损害程度有关(rs=0.740,P<0.01);且MGMT基因启动子区甲基化患者组织中DNMT1蛋白表达明显高于非甲基化组(P<0.05)。结论 MGMT基因启动子区高甲基化抑制了燃煤污染型砷中毒患者皮肤组织中MGMT蛋白的表达,且DNMT1蛋白的高表达参与了此抑制过程。