子宫颈部肿瘤中DNA甲基化转移酶-1表达和P16/MGMT基因启动子甲基化的临床意义

目的探讨子宫颈部肿瘤中Dnmt-(1DNA甲基化转移酶-1)表达和P16/MGMT基因启动子甲基化的临床意义。方法用MS-PCR(Methylation Specific-PCR)和免疫组织化学染色方法研究Dnmt-1蛋白和P16/MGMT基因启动子甲基化在117例子宫颈部良、恶性病变组织中的表达意义。结果Dnmt-1在浸润性鳞状上皮癌和腺癌中的表达明显高于慢性宫颈炎和宫颈上皮内瘤变。P16/MGMT基因启动区在慢性宫颈炎中全部表现为非甲基化,而在宫颈上皮内瘤变、浸润性鳞状上皮癌和腺癌中则表现为很高的异常甲基化水平。在子宫颈腺癌中,P16/MGMT基因启动子甲基化率在Dnmt-1表达阳性组明显高于Dnmt-1表达阴性组。结论Dnmt-1蛋白表达和P16/MGMT基因启动子甲基化在宫颈癌进展过程中的早期就起着非常重要的作用,而且Dnmt-1蛋白表达和P16/MGMT甲基化检测对于恶性肿瘤的诊断有着重要的辅助意义。

DNA甲基化与细胞周期

细胞基因的遗传性及表观遗传性变异所致细胞周期过程的改变是恶性肿瘤的重要发病机制。在诸多调控细胞周期的影响因素中,DNA甲基化造成的表观遗传改变逐渐引起了人们的重视。目前的研究发现,DNA甲基化与越来越多的细胞周期调控基因关系密切,但它们之间的确切作用机制仍不十分明确。现就目前国内外关于DNA甲基化对细胞周期影响的研究进展作一综述。

MSAP技术及其在植物遗传学研究中的应用

DNA甲基化是表观遗传学的重要组成部分,在调节植物基因表达、生长发育和抵御逆境等方面起着重要作用。随着对DNA甲基化研究的不断深入,基于PCR检测DNA甲基化状态的技术DNA甲基化敏感扩增多态性(MSAP)由于其检测多态性高,操作简单等优点被广泛应用于植物种质资源鉴定、植物改良、种群遗传结构分析及植物进化研究等遗传学各个领域。该文综述了MSAP技术的原理、实验方法以及其在植物遗传学研究中的应用,并对其今后应用前景进行了展望。

同型半胱氨酸对人血管平滑肌细胞5,10-亚甲基四氢叶酸还原酶基因启动子甲基化修饰及mRNA表达的影响

目的探讨同型半胱氨酸(Hcy)对人血管平滑肌细胞(HVSMCs)5,10-亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)基因启动子甲基化修饰及其mRNA表达的影响。方法正常人脐动脉血管平滑肌细胞体外培养,在培养基中加入临床高Hcy血症相关浓度及极高浓度的Hcy(0、30、100、200、500和1000μmol/L),并孵育72h,以MS-PCR分析MTHFR启动子区域甲基化状态,采用RT-PCR测定MTHFR mRNA的表达水平。结果不同浓度Hcy处理人血管平滑肌细胞后,其MTHFR基因启动子区域出现去甲基化,甲基化水平明显降低。RT-PCR结果显示MTHFR mRNA表达增加。结论Hcy可促进人血管平滑肌细胞MTHFR启动子区域去甲基化,并使MTHFR mRNA表达增加。

RUNX3基因甲基化与肿瘤的关系

人类runt相关转录因子3(RUNX3)基因是新近发现的一种抑癌基因,目前认为其失活的主要机制是高甲基化和杂合性缺失。RUNX3基因可能为转化生长因子-β(TGF-β)转导通路中的一个重要环节,参与TGF-β上皮细胞生长的负调控。大量研究已表明RUNX3与胃癌、肺癌、内胚窦癌、胰腺癌、胆管癌、肝癌、结肠癌、前列腺癌等多种肿瘤的发生发展有密切关系,并且RUNX3基因启动子的过度甲基化是导致RUNX3低表达,促进肿瘤发生发展的一个重要因素。

5-Aza-CdR对人肺腺癌A549细胞及SHOX2基因甲基化的影响

目的观察5-氮杂-2’-脱氧胞苷酸(5-Aza-CdR)对人肺腺癌A549细胞以及short stature homeobox 2(SHOX2)基因甲基化水平的影响。方法不同浓度的5-Aza-CdR处理A549细胞24~72 h,MTT比色法和流式细胞术检测药物处理后细胞增殖、周期和凋亡的变化,同时应用甲基化特异性PCR(MSP)法检测药物作用后SHOX2基因甲基化状态的变化。结果 5-Aza-CdR呈浓度依赖性抑制A549细胞增殖(P<0.05或0.01),随着5-Aza-CdR作用浓度的增加S期细胞明显增多,而G1期细胞减少;5、10μmol/L 5-Aza-CdR组凋亡率分别为(26.53±1.87)%和(38.84±3.10)%,均显著高于对照组(11.35±0.37)%的凋亡率(P<0.05或0.01)。MSP结果显示随着5-Aza-CdR浓度的增加,SHOX2基因启动子的甲基化条带减弱,而非甲基化条带则增强。结论 5-Aza-CdR能通过去甲基化作用逆转SHOX2基因启动子的高甲基化状态,并促进细胞的增殖和凋亡。

焦炉工人周围血细胞p16基因甲基化研究

目的分析焦炉工人周围血细胞中p16基因启动子区CpG岛异常甲基化状态,寻找焦炉工人肺癌辅助筛查的生物标志物。方法以74名男性焦炉工人为接触组,以47名供水厂男性职工为对照组。采集2组人员的班后尿,用高效液相色谱法检测其内暴露指标1-羟基芘(1-OH-Py)的水平;同时采集晨起空腹肘静脉血,分离周围血单个核细胞,用彗星实验检测DNA损伤情况;并提取基因组DNA,用甲基化特异性聚合酶链反应技术检测p16基因启动子区CpG岛甲基化发生情况。结果接触组尿1-OH-Py水平[(0.46±0.12)μmol/mol Cr]和DNA拖尾的Olive尾距[(0.41±0.25)μm]高于对照组[(0.17±0.06)μmol/mol Cr、(0.32±0.12)μm],差异有统计学意义(P<0.05)。接触组p16基因的异常甲基化的检出率(36.49%)高于对照组(4.26%),差异有统计学意义(P<0.01);并且p16基因的异常甲基化检出率随着尿1-OH-Py的水平升高逐渐增加,差异有统计学意义(P<0.01)。结论周围血p16基因异常甲基化可能是焦炉工人肺癌早期筛查有效的生物标志物。