人血管内皮生长因子-C基因编码区cDNA的克隆与测序

目的 克隆人舌癌组织中血管内皮生长因子 (VEGF)_C功能片段的cDNA ,为进一步研究VEGF_C在口腔鳞癌中表达的意义及与淋巴转移的关系打下基础。方法 以RT_PCR法从舌鳞癌组织中克隆VEGF_C基因功能片段的cDNA ,用限制性内切酶消化和PCR筛选出阳性克隆pCRII_VEGF_C ,以SP6和T7引物完成VEGF_CcDNA的全序列测定。结果 从人舌癌组织总RNA中克隆到约 1 1kb大小的VEGF_C基因cDNA ,经测序与Genbank公布的人VEGF_C基因cDNA序列的同源性为 99 6 %。结论 从人舌癌组织中克隆得到的VEGF_C基因功能片段cDNA ,为进一步研究VEGF_C在口腔癌颈淋巴结转移中的功能效应提供了物质基础。

人神经生长因子β亚基cDNA的克隆及在大肠杆菌中的表达

目的 :从海马组织提取中国人神经生长因子基因 (NGFβ) ,分析中国人NGFβ序列 ,再克隆成熟肽部分 ,使NGFβ在大肠杆菌中表达。 方法 :提取组织总RNA进行逆转录 ,克隆到PCRⅡ载体 ,得 6 5 0bpDNA片段 ,以PCRⅡ /NGFβ载体为模板 ,扩增C端成熟肽部分 ,并克隆到PG5中 ,转化大肠杆菌BL2 1用异丙基 - β -D -半乳糖苷(IPTG)诱导培养。表达产物提纯、复性后 ,进行活性测定。结果 :NGFβcDNA全序列为 10 4 7bp ,所克隆的蛋白编码部分为 6 36bp ,由 2 12个氨基酸组成 ,序列分析结果与Genebank完全一致 ,成熟肽部分表达后 ,经SDS -PAGE电泳在 14kD左右有 1条明显的新增蛋白带 ,与预期的分子量相符 ,并Western印迹证实 ,rNGF约占菌体蛋白 10 %左右。结论 :通过序列分析证实 ,重组NGFβ在大肠杆菌中获得较高水平的表达 。

小鼠神经生长因子cDNA的克隆及核苷酸序列分析

用Ｔ４－ＤＮＡ连接酶在限制性内切酶ＳｍａＩ存在下，将神经生长因子ｃＤＮＡ片断克隆到具有双向转录启动子的载体质粒ｐＧＥＭ３Ｚｆ（＋）中。Ｓａｎｇｅｒ双脱氧链终止法测定其核苷酸顺序表明，所克隆的ＮＧＦｃＤＮＡ片断，长３６３ｂｐ，包含了成熟神经生长因子的全部编码。该重组质粒可分别用于制备ＮＧＦｃＤＮＡ探针和ＲＮＡ探针，是研究ＮＧＦ基因结构及表达调控等方面的重要工具。

人肝细胞生长因子β链基因的克隆及表达载体的构建

目的 构建重组人肝细胞生长因子 β(rhHGF β)的克隆表达体系。以期进一步研究HGF基因的表达调控及HGF的生物学、医学作用。方法 从人胎肝组织中提取总RNA ,运用RT PCR技术 ,对HGF β基因转录前加工修饰 ,与载体重组 ,构建rhHGF β的克隆。并对克隆进行限制性内切酶酶切图谱分析 ,对重组体中插入的外源基因进行序列分析。 结果 获得了rhHGF β完整的cDNA序列 ,重组体克隆的酶切结果与设计一致。 结论 首次成功地构建了人肝细胞生长因子 β(rhHGF β)的克隆表达体系。

广西眼镜蛇神经生长因子的克隆及序列分析

目的:扩增广西眼镜蛇神经生长因子(NGF)的全长基因并进行序列分析。方法:应用聚合酶链反应技术,以广西眼镜蛇cDNA为模板,扩增出编码NGF的全长基因,并克隆至pMD18-T载体中进行基因测序。结果:所得序列与Genbank提供的序列(M61180)对比显示,广西眼镜蛇prepro-NGF与Naja kaouthia(monocled cobra)、Bungarus multicinctus、mouse、人的NGF同源性分别为99%、91%、66%、68%,将不同氨基酸相同的化学性质计算在内,同源性更高。结论:成功地获得了广西眼镜蛇NGF的全长基因,且序列与已知序列高度一致。

人神经营养素-3全长基因克隆及序列分析

目的 :扩增人神经营养素 3(humanneurotrophin 3,hNT 3)全长基因并进行序列分析。 方法 :应用聚合酶链反应技术 ,以一个健康成人基因组DNA为模板 ,扩增出编码hNT 3的全长基因 ,并克隆至pMD18 T载体中进行基因测序。结果 :所得序列与Genbank提供的序列 (M 6 1180 )对比显示 ,除hNT 3中第 5 5 5位碱基由C→T外 ,余序列同已知序列完全一致 ,改变的碱基并不影响基因编码的氨基酸序列。结论 :成功地获得了hNT 3的全长基因 ,且序列与已知序列高度一致。