依纽小单孢菌接合转移体系的构建

以依纽小单孢菌HP变种基因组DNA为模板,扩增位于西索米星3',4'-双脱羟基酶基因sisI上下游序列的两端同源交换臂,在两臂之间添加抗性筛选标记ermE基因,并在该基因上游加入组成型强启动子ermE*,以强化筛选标记。将该外源DNA序列插入到质粒pKC1139,构建重组质粒pFD57。转化大肠杆菌ET12567后,经接合转移导入依纽小单孢菌中,经抗性筛选得到两株阳性菌株,命名为HP-I-1和HP-I-2。经PCR验证和测序,结果表明,重组质粒已整合到染色体DNA上。依纽小单孢菌接合转移体系的构建达到了预期目的,并实现了对该体系的优化。