RNA干扰DNA修复蛋白Ku80对乳腺癌基因HER2表达的影响

目的 构建特异性沉默Ku80基因的真核表达栽体,检测其对乳腺癌基因HER2表达的影响.方法 设计2条表达短发夹RNA的互补DNA序列,分别克隆至真核表达载体pGCsi-U6/Neo/DsRed构建shRNA-Ku80,转化大肠埃希菌DH5α菌株扩增后,提取质粒测序分析,以相同的方法构建并鉴定Ku80基因的真核表达载体pEGFP-N1-Ku80;将2种shRNA-Ku80分别与pEGFP-N1-Ku80共转染HEK293细胞株,通过流式细胞仪检测荧光强度筛选高效敲减靶点,并在基因和蛋白水平观察抑制Ku80对乳腺癌基因HER2表达的影响.结果 成功构建Ku80特异性shRNA表达载体,shR-NA-Ku80对靶点Ku80敲减效率达到59.50％,抑制Ku80表达使乳腺癌基因HER2在基因和蛋白水平明显降低.结论 成功构建shRNA-Ku80载体,在体外可有效抑制Ku80的表达,使癌基因HER2的表达明显下调,提示Ku80有望成为乳腺癌治疗的基因靶点.

乳腺癌组织中DNA修复蛋白Ku80的表达及其生物学意义

目的探讨乳腺癌组织中Ku80蛋白的表达及其生物学意义。方法选取武汉中核中核中同蓝博医学检验实验室2010年1月至2019年12月确诊的80例原发性乳腺癌患者的手术切除标本,采用免疫组织化学分析原发性乳腺癌组织Ku80的表达与细胞增殖相关活性蛋白(Ki67)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、人表皮生长因子受体2(HER2)、P53的相关性;培养人乳腺癌细胞BT-474,分为siRNA-Ku80组、siRNA-阴性对照组和空白对照组,应用Western Blot、Transwell法和MTT法分别检测各组Ki67、MMP-2、P53和HER2水平、细胞侵袭能力和增殖情况。结果乳腺癌组织中Ku80与HER-2、Ki67和MMP-2的表达呈正相关(P<0.05),与P53的表达无明显相关性(P>0.05);Western Blot结果显示siRNA-Ku80组乳腺癌细胞HER2,Ki67和MMP-2蛋白的表达下降,与对照组和空白对照组差异有统计学意义(P<0.05),P53蛋白的表达水平无明显变化(P>0.05);Transwell结果显示siRNA-Ku80组侵袭细胞计数明显减少,与对照组和空白对照组差异有统计学意义(P<0.05);MTT结果显示siRNA-Ku80对乳腺癌细胞BT-474生长有抑制作用,在24h、48h和72h的抑制率分别为9.83%、39.71%和51.20%,与空白组和siRNA对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论乳腺癌组织中Ku80的表达与HER-2、Ki67和MMP-2的表达呈正相关;RNA干扰抑制Ku80后,乳腺癌细胞HER-2、Ki67和MMP-2的表达减少,乳腺癌细胞的增殖力和侵袭力降低;提示Ku80的异常表达可能与乳腺癌发生相关。

KU蛋白在泌尿系肿瘤中的作用研究进展

KU蛋白是日本学者于1981年首次在结缔组织病中发现并命名,广泛存在于人类、哺乳类动物、酵母、细菌等生物体内的一种蛋白质。KU蛋白由KU70和KU80两个亚基组成。研究发现KU蛋白参与DNA损伤修复、基因转录调控、DNA复制、端粒维持调控等多种细胞功能活动,与人类恶性肿瘤的发生、发展、治疗、预后密切相关。本文就KU蛋白的结构及主要参与的细胞功能(DNA损伤修复),以及KU蛋白在泌尿系肿瘤中的作用研究进展进行综述,有利于进一步了解泌尿系肿瘤相应的发生、发展机制,进而为泌尿系肿瘤的治疗提供新的途径。