人脾DNA拓扑异构酶Ⅰ的提纯及其性质的研究

经三个步骤从人脾提纯了拓扑酶Ⅰ。SDS-PAGE和等电聚焦均显示单一蛋白带。分子量77kD,pI7.3。新生霉素和香豆霉素A_1不抑制酶活性。本实验表明,反应最适K^(+)或Na^(+)浓度为180mmol/L。反应活性不要求Mg^(2+),但5mmol/L存在时,活性增加90％。在pH5.0～9.0均有活性,但在7.5～8.0时活性较大。30℃放置24小时或50℃处理30分钟活性基本丧失。最适反应温度为37℃。对-氯汞苯甲酸强烈抑制酶活性。

脂质体介导转化生长因子-β_1基因修饰骨髓间充质干细胞成软骨分化

目的 脂质体介导TGF β1目的基因转染骨髓间充质干细胞 (MSC) ,研究对MSC成软骨分化的特异性细胞外基质的影响。方法 以梯度离心结合换液法获得并纯化骨髓间充质干细胞 (MSCs) ,采用脂质体介导法将重组真核表达质粒pcDNA3 TGF β1转染MSCs,RT PCR和Westernblot鉴定后 ,对转染后骨髓间充质干细胞的Ⅱ型胶原 (ColⅡ )、纤维连接蛋白 (FN)的表达行RT PCR和Westernblot检测。结果 获得纯度较高的成年中国小型猪骨髓间充质干细胞 (MSCs) ;脂质体为介导将全长人TGF β1目的基因导入MSC ,经RT PCR和Westernblot鉴定转染成功 ,转染后的MSC较未转染MSC成软骨分化特异性细胞外基质ColⅡ、FNmRNA和蛋白表达明显增强。结论 以脂质体介导法可以将TGF β1目的基因转染骨髓间充质干细胞 。