应用组织芯片探讨宫颈癌前病变及宫颈癌中DNA拓扑异构酶Ⅱα的表达及其临床意义

目的：探讨DNA拓扑异构酶Ⅱα（TopoⅡα）蛋白在宫颈癌前病变及宫颈癌中的表达及其在宫颈癌发生发展中的作用。方法选取2007-2008年在山西省肿瘤医院行宫颈病变诊治的患者，其中包括慢性宫颈炎，低级别和高级别宫颈上皮内瘤变（CIN）和宫颈浸润性鳞癌（SCC）的患者分别21、33、30、73例，制作组织芯片，应用免疫组织化学法（SP）检测宫颈组织中TopoⅡα蛋白的表达情况。结果结果TopoⅡα蛋白在慢性宫颈炎上皮组织、CINⅠ、CINⅡ～Ⅲ、SCC中的表达率分别是5％，12％，90％，97％，表达率逐渐增加，高级别CIN和浸润性鳞癌的表达显著高于低级别CIN和正常宫颈组织，差异有统计学意义；而高级别CIN与浸润性癌之间、低级别CIN与正常宫颈上皮之间的表达差异均无统计学意义。结论 TopoⅡα蛋白表达随着宫颈癌前病变的严重程度的加重而增加，因此T o poⅡα蛋白可能参与了宫颈上皮的异常增生和恶性转变。

骆驼蓬种子提取物及其β咔保啉生物碱对DNA拓扑异构酶Ⅱ活性的抑制作用

目的探讨去氢骆驼蓬碱、骆驼蓬碱、骆驼蓬总碱及哈尔满碱(止咳药用植物)对DNA拓扑异构酶Ⅱ活性的抑制作用。方法从体外培养的Q3肝癌细胞中,提取分离DNA拓扑异构酶Ⅱ;以阿霉素为阳性对照,用琼脂糖凝胶电泳法检测药物对DNA拓扑异构酶Ⅱ的作用。结果骆驼蓬总碱、去氢骆驼蓬碱、骆驼蓬碱及哈尔满碱对DNA拓扑异构酶Ⅱ活性均有一定的抑制作用。结论对DNA拓扑异构酶Ⅱ活性的抑制作用是骆驼蓬总碱、去氢骆驼蓬碱、骆驼蓬碱等生物碱抗癌作用和细胞毒作用的机制之一。

毛叶茶和龙井茶提取物的抗瘤作用以及对DNA拓扑异构酶Ⅱ的抑制作用

作者用噻唑蓝(MTT)法研究了毛叶茶提取物(毛茶C)和龙井茶提取物(龙井A)对人宫颈癌HeLa细胞、鼻咽低分化鳞癌CNE_2细胞和胃低分化粘液腺癌MGC—803细胞的细胞毒作用。毛茶C对上述3种细胞株的半数抑制浓度(IC_(50))分别为495.6μg/ml、243.4μg/ml、268.6μg/ml;而龙茶A分别为421.1μg/ml、311.4和274.6μg/ml。体内抑瘤试验表明,毛茶C在2.5—10mg//kg剂量范围内,对小鼠艾氏腹水癌实体型(ESC)有明显抑制作用,抑瘤率为17.8％—48.3％;对小鼠网织细胞肉瘤(L_2)的抑瘤率为28.3％—54.5％;龙茶A在2.5—10mg/kg剂量范围内对艾氏实体瘤ESC的抑制率为31.5％—49.4％;对L_2的抑瘤率为35.8％—50％。而二种茶叶提取物对小鼠肉瘤S—180仅有边缘的抗瘤活性。用琼脂糖凝胶电泳方法则得毛茶C和龙茶A在1—50μg/ml浓度范围内,对DNA拓扑异构酶Ⅱ的抑制率分别为75—100％,抑酶作用有明显的量效关系。在50μg/ml浓度均可抑制全部酶活性,推测DNA拓扑异构酶Ⅱ可能是这两种茶叶提取物的靶酶。

钌(Ⅱ)多吡啶配合物与DNA相互作用研究

DNA是遗传信息的携带者和基因表达的物质基础,金属配合物与DNA的相互作用研究已受到广泛关注,成为生物无机化学的重要研究内容之一。本文简要评述了钌(Ⅱ)多吡啶配合物在DNA识别、断裂及拓扑异构酶抑制方面的研究情况。

以DNA拓扑异构酶Ⅱ为靶点的一种抗癌药筛选的新方法

借鉴文献方法,我们以小鼠L_(1210)白血病细胞为村料,提取DNA拓扑异构酶Ⅱ,鉴别了其生物学特性,并观察了十多种已知及未知的抗癌药物对其活性的影响,初步建立了以DNA拓扑异构酶Ⅱ为靶点的新抗癌药筛选方法。实验表明DNA拓扑异构酶Ⅱ对DNA链切割反应是可逆的,并且高浓度的氯化钠对其活性有抑制作用。许多药物能促进拓扑酶Ⅱ引起的DNA链断裂如ADM、DNR、Vp16及ACM—B等,而另一些药物如萜类化合物BC_1、BC_4等则能抑制链断裂反应。

甘薯叶黄酮对Ⅱ型糖尿病模型小鼠的降糖及DNA损伤修复作用

【目的】探讨甘薯叶黄酮(FIBL)的降糖作用及其对糖尿病DNA损伤的修复作用。【方法】采用高糖高脂日粮和链脲佐菌素(STZ)建立Ⅱ型糖尿病(NIDDM)小鼠动物模型,然后将其分为模型对照组(DC)、FIBL低剂量组(FTL)、FIBL高剂量组(FTH)和罗格列酮组(RT组),另取正常小鼠作为正常对照组(NC)。其中,正常对照组、模型对照组小鼠每天灌胃0.2mL dH2O,FIBL低剂量和高剂量组小鼠每天分别灌胃75和150mg/kg的FIBL,RT组每天灌胃3mg/kg罗格列酮,连续灌胃28d。对小鼠一般情况进行观察,并于灌胃0(灌胃前),7,14,21,28d尾静脉采血检测血糖;29d时,断头采血检测血脂,并分离淋巴细胞,采用单细胞凝胶电泳技术(SCGE)检测DNA损伤情况。【结果】动物模型建模成功后,Ⅱ型糖尿病(NIDDM)小鼠存在多饮、多尿、多食,及一定程度的胰岛素抵抗等情况。FIBL治疗结果显示,FIBL能控制NIDDM小鼠体质量的增长;能有效降低NIDDM小鼠的血糖、血脂水平;对NID-DM小鼠的DNA损伤具有修复作用。【结论】甘薯叶黄酮能改善高血糖症状及脂质代谢紊乱状况;可以治疗和延缓NIDDM并发症的发生。

基于DNA拓扑异构酶Ⅱ基因部分序列的侧耳属系统发育分析

对侧耳属(Pleurotus)14个种的14个菌株,亚侧耳属(Hohenbuehelia)1个种和离褶伞属(Lyophyllum)1个种的DNA拓扑异构酶II(EC5.99.1.3)部分序列进行扩增分析。以灰盖鬼伞(Coprinus cinereus)、新型隐球酵母(Cryptococcus neoformans)和玉米黑粉菌(Puccinia polysora)等担子菌为外群,采用最大距离法、最大简约法和最大似然法构建侧耳属的系统发育树。结果表明:作为外群的3个物种独立于所有供试材料;侧耳属菌株作为一大类与供试的离褶伞属和亚侧耳属分开。侧耳属14个种又可细分成6支:可能为侧耳属起源最早的P.flabellatus、P.salmoneostramineus和P.djamor组成一组;P.tuberregium和P.pulmonarius均自成一组;P.abalonus和P.cystidiosus均产生束梗孢,聚为同组;P.eryngiivar.eryngii、P.eryngiivar.ferulae和P.nebrodensis为一组;另一组由P.ostreatus、P.columbinus、P.cornucopiae和P.citrinopileatus组成。按照侧耳属物种菌丝类型的不同,构建的系统发育树将该属14个种进行系群划分,单、二系菌丝分属于各个不同的分支中,说明单、二系菌丝均为多系起源,与用28S rDNA序列进行系统分析的结果一致。

乳腺癌组织DNA TOPOⅡα、p53的表达与化疗耐药的关系

目的 检测DNA拓扑异构酶Ⅱα(TOPOⅡα)、p53在乳腺癌组织的表达 ,并探讨其与化疗耐药的关系。方法 采用免疫组化S P法检测 91例未经抗肿瘤治疗的原发乳腺癌和 1 8例术后经化疗复治的乳腺癌组织中TOPOⅡα、p53蛋白的表达。结果 TOPOⅡα在原发乳腺癌中阳性率为42 % ,阳性率与肿瘤类型、组织学分级、肿瘤大小、临床分期有关 (P <0 0 5 ,其中组织分级P <0 0 1 ) ;术后经化疗复治乳腺癌中阳性率为 1 7% ,与原发癌相比显著降低 (P <0 0 5) ;突变型p53在原发乳腺癌与化疗复治乳腺癌阳性率差异无显著性 (P >0 0 5) ;p53蛋白表达与TOPOⅡα无相关性 (P >0 0 5)。结论 TOPOⅡα表达可作为反映肿瘤增殖和恶性度的指标。TOPOⅡα参与化疗耐药性形成。

DNA拓扑异构酶Ⅱ与细胞增殖

细胞增殖的核心事件是DNA复制与细胞分裂 ,DNA拓扑异构酶Ⅱ在该过程中起重要作用。由于传统细胞增殖标记物的局限 ,DNA拓扑异构酶Ⅱ作为细胞增殖标记物的意义正逐渐被人们所关注。作者就近年来人们对DNA拓扑异构酶Ⅱ的认识及其作为细胞增殖标记物的价值进行如下综述。

海南粗榧新碱衍生物HH07A对肿瘤细胞内DNA拓扑异构酶Ⅱ和蛋白激酶C活性的影响

ＨＨ０７Ａ５．５μｍｏｌＬ－１作用Ｌ１２１０细胞２４ｈ后，可使细胞的ＤＮＡ拓扑异构酶Ⅱ活性下降；在无细胞系统，ＨＨ０７Ａ０．５５ｍｍｏｌＬ－１也能直接促进ＤＮＡ拓扑异构酶Ⅱ引起的ＤＮＡ链断裂．经ＨＨ０７Ａ（Ｌ１２１０细胞５．５μｍｏｌＬ－１，ＨＬ－６０细胞８．２５μｍｏｌＬ－１）作用２４ｈ后，Ｌ１２１０及ＨＬ－６０细胞的胞浆蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）活性升高，胞膜ＰＫＣ活性下降，而全细胞ＰＫＣ活性变化不大．在无细胞系统中，ＨＨ０７Ａ１．１ｍｍｏｌＬ－１能明显抑制ＰＫＣ的活性．

DNA拓扑异构酶Ⅱα的表达与颅咽管瘤预后的关系

目的检测颅咽管瘤组织中DNA拓扑异构酶Ⅱα(DNATopoⅡα)的表达情况,分析其表达与肿瘤复发的关系,探讨其是否可作为判定颅咽管瘤预后的一个有效指标。方法设计前瞻性队列研究方案,采用免疫组化方法和图像分析技术测定63例颅咽管瘤组织切片中DNA拓扑异构酶Ⅱα的表达水平,评价颅咽管瘤釉质上皮瘤与鳞状乳头瘤病理亚型、复发组与非复发组、原发组与复发组之间肿瘤细胞的增殖能力。结果32例釉质上皮瘤14例复发,31例鳞状乳头瘤6例复发;釉质上皮瘤与鳞状乳头瘤病理亚型之间以及复发组与非复发组肿瘤之间DNA拓扑异构酶Ⅱα的表达水平有显著性差异(P<0.05),而原发组与复发组肿瘤之间DNA拓扑异构酶Ⅱα的表达水平无统计学差异(P>0.05)。结论颅咽管瘤的病理亚型以及DNA拓扑异构酶Ⅱα的表达水平与肿瘤的预后和复发有关,可作为预测肿瘤复发危险性的一个参考指标;DNA拓扑异构酶Ⅱα的表达水平在原发组和复发组肿瘤之间无显著性差异,提示肿瘤在复发过程中瘤细胞的增殖活性无明显变化。

竹叶防风中的香豆素类及其抑制DNA拓朴异构酶Ⅱ的作用

首次从竹叶防风(Seseli mairei Wolff)的根中分得7种香豆素类成分,经光谱分析和化学方法鉴定它们的结构为:异爱得尔庭(isoedultin)、前胡亭(peucendin)、哥伦比亚内酯(columbianadin)、5-甲氧基补骨脂素(5-methoxypsoralen)、补骨脂素(psoralen)、乙酰伞形花内酯(ace-tylumbelliferone)和表迪可醇(3’-epidecursinol)。其中哥伦比亚内酯、5-甲氧基补骨脂素、补骨脂素和乙酰伞形花内酯在剂量10μm时显示一定的抑制DNA拓朴异构酶Ⅱ的作用。

单纯疱疹病毒Ⅱ型抗原优势表位与乙肝核心蛋白融合DNA疫苗的构建

提取HSV-2333株的DNA作为模板,用PCR方法扩增编码HSV-2糖蛋白D抗原优势表位的基因(gDt)和乙肝核心蛋白(HbcAg)的基因序列(HBc),再用重叠PCR方法将gDt插入到HBc编码Hb-cAg刺突部的第81和82位的氨基酸的基因之间,获得融合基因gDt-HBc,将gDt-HBc插入真核表达质粒pcDNA3.1中,构建出真核表达质粒gDt-HBc-pcDNA3.1,转化DH5a感受态细胞后,通过菌落PCR和双酶切鉴定后进行测序鉴定,测序结果与预期结果完全一致,成功构建单纯疱疹病毒Ⅱ型抗原优势表位与乙肝核心蛋白融合DNA疫苗,为下一步的评价工作奠定了基础。

DNA免疫法制备猪圆环病毒Ⅱ型ORF3抗体

为了制备猪圆环病毒Ⅱ型(PCV2)开放阅读框3(ORF3)蛋白的抗体,并为ORF3功能研究奠定基础,用PCR方法扩增PCV2ORF3基因,对其PCR产物用EcoRI与XhoI进行酶切,并对真核表达载体pCDNA3.1(+)进行同样酶切,连接2种目的酶切产物后转化E.coliDH5a感受态,菌落PCR和序列测定结果显示成功构建出重组质粒pCDNA3.1-PCV2ORF3。将该重组质粒接种BALB/c小鼠,用间接免疫荧光(IFA)检测小鼠血清PCV2ORF3抗体的特异性及其效价。IFA结果证实经PCV2ORF3重组质粒接种所制备的小鼠血清是PCV2ORF3的特异性抗体,小鼠血清PCV2ORF3抗体效价在经过4次接种后均达到1:25以上,抗体检测结果表明成功制备了具有较高效价的PCV2ORF3抗体。研究结果提示:可以通过质粒DNA免疫方法来快速、简便地制备PCV2ORF3抗体,为PCV2ORF3抗体制备提供了一种新的有效途径。

芦笋提取物对DNA拓扑异构酶Ⅱ活性作用的研究

通过体外ＤＮＡ拓扑异构酶Ⅱ介导ＤＮＡ裂解实验观察了芦笋提取物对该酶活性的影响。从小鼠白血病Ｌ１２１０细胞中提取ＤＮＡ拓扑异构酶Ⅱ，以ｐＢＲ（３２２）ＤＮＡ为底物，将１μｇＤＮＡ与０．２Ｕ拓扑异构酶Ⅱ温孵，当分别加入芦笋提取物２２０、２２、２．２μｇ／ｍｌ３个终浓度时，裂解能力可提高到原来的５倍，说明该药的直接作用靶点是ＤＮＡ拓扑异构酶Ⅱ，而不是直接裂解ＤＮＡ。

消化道恶性肿瘤组织中P糖蛋白、DNA拓扑异构酶Ⅱ及谷胱甘肽转移酶π亚型的表达

目的:检测P糖蛋白(P-gp)、DNA拓扑异构酶Ⅱ(TopoⅡ)和谷胱甘肽转移酶π亚型(GsTπ)在消化道恶性肿瘤组织中的表达,并初步探讨其临床意义。方法:用免疫组化法检测P-gp、TopoⅡ和GSTπ在47例消化道恶性肿瘤(食管癌15例,胃癌12例,结直肠癌15例,肝癌4例,胆囊癌1例)组织中的表达,并对其与病理参数的关系进行了研究。结果:(1)在食管癌、胃癌及结直肠癌组织中,P-gp表达阳性率分别为0、16.7％和66.7％;TopoⅡ表达阳性率分别为86.7％、91.7％和100％;GSTⅡ表达阳性率分别为20.0％、25.0％和48.9％。(3)P-gp和GSTπ表达有明显相关性(r=0.979,P<0.05)。(2)P-gp和GSTπ表达的阳性率在胃癌肠型与弥漫型、高和中分化型腺癌与低分化型腺癌之间均无统计学差异(P>0.05);而结直肠癌高分化型腺癌组织中P-gp的表达阳性率显著高于中分化型腺癌(P<0.05)。结论:P-gp、TopoⅡ与GSTπ在食管癌和胃癌的多药耐药表型中的作用有限;结直肠癌的耐药表型与P-gp表达密切相关。

维生素C对低硒高镉饲料饲养大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞DNA的影响

目的探讨维生素C对低硒高镉饲料饲养大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞(AT-Ⅱ)的影响。方法将72只Wistar大鼠随机分为8组(每组9只):普通饲料对照组(C1组),实验构成饲料对照组(C2组),低硒+高镉组(第1组),低硒+高镉+维生素C组(第2组),适量硒+高镉组(第3组),适量硒+高镉+维生素C组(第4组),高硒+高镉组(第5组),高硒+高镉+维生素C组(第6组)。采用单细胞凝胶电泳技术分别观察各组动物饲养14周后AT-Ⅱ细胞DNA的改变。结果大鼠AT-Ⅱ细胞DNA损伤率分别为:C1组9.00%,C2组9.20%,第1组34.20%,第2组18.60%,第3组19.00%,第4组14.40%,第5组13.80%,第6组9.40%。第6组大鼠AT-Ⅱ细胞DNA损伤率与C1组和C2组无显著差异(P均>0.05)。第4组和第5组AT-Ⅱ细胞DNA损伤程度较轻。第2组和第3组大鼠AT-Ⅱ细胞的DNA损伤较重。第1组大鼠肺细胞的DNA损伤最为严重(P<0.01)。结论低硒并高镉可在一定程度上改变AT-Ⅱ细胞的DNA生物学特性,维生素C可以对抗低硒并高镉对AT-Ⅱ细胞所致的这种变化。

动物组织及细胞DNA拓扑异构酶Ⅱ提取及解结活性的比较研究

本文用改进的方法从一些动物组织中抽提了DNA拓扑异构酶Ⅱ,并用电镜、电泳方法对该酶解结活性进行了鉴定。酶活力测定结果表明该酶在不同组织中分布不尽相同,增殖较旺盛的组织具有相对较高的酶活性。pH值、温度、一些激动剂、抑制剂及组织的状态均对酶活力有影响。

DNA拓扑异构酶Ⅱ在食管癌的表达及意义

目的:观察DNA拓扑异构酶Ⅱ(TOPOⅡ)在食管癌的表达,初步探讨其临床生物学意义。方法:应用S-P免疫组织化学方法检测原发性食管癌103例,其中鳞状细胞癌100例,腺癌3例和癌周正常黏膜组织32例TOPOⅡ的表达。结果:TOPOⅡ在食管癌的表达明显高于癌周组织,癌周鳞状上皮基细胞可见少数核阳性表达。鳞状细胞癌高于腺癌的表达。食管鳞状细胞癌的分化程度与TOPOⅡ的表达呈正相关。结论:TOPOⅡ在食管癌周的表达早于食管癌分生过程中的细胞形态变化,可能成为食管癌发生的早期标志物。TOPOⅡ食管癌表达低,符合其比食管鳞状细胞预后差,对放疗、化疗不敏感的事实。TOPOⅡ在高中分化食管鳞状细胞癌的表达低分化者,提示食管癌高分化者对拓扑异构酶抑制剂化疗药敏感、预后好。

铜绿假单胞菌环丙沙星耐药株Ⅱ类拓扑异构酶基因突变的研究

用PCR方法 ,扩增 2 6株临床分离铜绿假单胞菌环丙沙星耐药株、4株环丙沙星敏感菌株和PA0 1菌株的Ⅱ类拓扑异构酶 gyrA、gyrB、parC和 parE基因的喹诺酮类药物耐药决定区 (QRDR)基因片断 ;并对铜绿假单胞菌II类拓扑异构酶基因突变与耐药性关系进行研究。结果表明 90 %以上的铜绿假单胞菌耐药株表现出Ⅱ类拓扑异构酶基因突变 (2 6株中有 2 4株 )。突变主要发生在 gyrA基因 (2 2株 )和 parC基因 (14株 )上 ,其中 gyrA基因的第 83位氨基酸密码子表现出高频突变 (2 2株中有 2 1株 ,ACC→ATC ,占 90 % ) ,parC基因第 80位氨基酸密码子也表现出较高的突变率 (14株中有 12株 ,TCG→TTG ,占 60 % ) ,4株耐药株的 gyrB和 3株耐药株的 parE基因发生单点突变 ,2株耐药株II类拓扑异构酶基因未检测到突变。用二倍稀释法 ,测定部分喹诺酮和 β 内酰胺类药物对耐药突变株的体外抗菌活性。表明铜绿假单胞菌Ⅱ类拓扑异构酶基因突变株对诺氟沙星、左氧氟沙星、哌拉西林、头孢他啶和亚胺培南表现出不同的敏感性。试验所用 2 4株突变株对诺氟沙星呈现 10 0 %的耐药 ;对左氧氟沙星 65 %的耐药 ;40 %的菌株对哌拉西林表现出耐药 ;3 0 %的菌株对头孢他啶耐药 ;75