脑脊液DNA倍体定量分析在脑转移性恶性肿瘤诊断中的应用

目的通过联合应用液基细胞学检查与DNA倍体定量分析,探讨脑脊液DNA倍体定量分析在脑转移性恶性肿瘤中的应用价值。方法收集临床送检的93例脑脊液标本,经过制片及染色处理后,分别进行液基细胞学检查和DNA倍体定量分析。结果在93例脑脊液标本中,47例发现转移性肿瘤细胞,46例未发现转移性肿瘤细胞。液基细胞学检查的敏感度为70.2%,特异度为84.7%,准确度为77.4%;DNA倍体定量分析的敏感度为97.8%,特异度为100%,准确度为98.9%。结论DNA倍体定量分析在脑脊液检测中敏感度、特异度均高于液基细胞学,两者联合检测可显著提高脑转移性恶性肿瘤的诊断准确率。

脱落细胞DNA定量分析技术动态监测口腔扁平苔藓伴上皮异常增生病情及光动力治疗1例

口腔扁平苔藓是一种临床上常见的慢性炎性口腔黏膜病,具有癌变风险,临床上应积极干预并随访监测。光动力治疗具有微创、有效、选择性好以及可重复性高等优势,在治疗口腔扁平苔藓中已显现出良好疗效,但其疗效评估方法仍然存在局限性。脱落细胞DNA定量分析技术是一种无创辅助检查手段,可用于口腔潜在恶性疾患癌变及口腔癌的早筛早诊。本文报道1例采用脱落细胞DNA定量分析技术动态监测口腔扁平苔藓癌变风险及光动力治疗疗效的诊疗过程,以期为建立口腔扁平苔藓伴上皮异常增生的精准微创诊疗体系提供参考。

HBV DNA与乙肝五项定量在不同年龄段乙肝病毒感染患者病情进展中的意义

目的探讨乙肝病毒(HBV)DNA与乙肝五项定量[包括乙肝表面抗原(HBsAg)、乙肝表面抗体(HBsAb)、乙肝e抗原(HBeAg)、乙肝e抗体(HBeAb)、乙肝核心抗体(HBcAb)]在HBV感染进程中各个阶段的差异,从而为慢性乙型肝炎、乙肝肝硬化、肝癌不同阶段的诊治提供参考依据。方法选择2020年1月至2021年12月收治的295例HBV感染患者为研究对象,根据年龄将其分为青年组(≤45岁,105例)、中年组(46~59岁,128例)和老年组(≥60岁,62例)。比较三组慢性乙型肝炎、乙肝肝硬化、肝癌患者的HBV DNA及乙肝五项定量。结果三组慢性乙型肝炎、乙肝肝硬化和肝癌患者的年龄比较,差异无统计学意义(P>0.05)。青年组和中年组中,慢性乙型肝炎、乙肝肝硬化和肝癌患者的HBV DNA、HBsAg、HBeAg水平比较,差异具有统计学意义(P<0.05);慢性乙型肝炎患者的HBV DNA、HBsAg、HBeAg水平明显高于乙肝肝硬化和肝癌患者(P<0.05)。老年组中,慢性乙型肝炎、乙肝肝硬化和肝癌患者的HBV DNA、HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论青中年患者中,随着慢性乙型肝炎向乙肝肝硬化、肝癌的病程进展,HBV DNA、HBsAg、HBeAg水平均呈现下降趋势,监测相关指标趋势对于提示疾病发展具有一定意义。

DNA倍体定量分析结合P16蛋白在宫颈癌筛查中的意义

目的:探讨DNA定量分析结合P16蛋白免疫组化染色在宫颈筛查中的意义。方法:选取2020年3月~2021年3月淮安市肿瘤医院门诊及住院检查病例4334例为研究对象,对宫颈细胞学DNA定量分析提示异常者,在知情同意情况下,进行阴道镜下宫颈活检、组织学病理检查及P16蛋白染色检查,比较分析DNA倍体定量分析提示异常者与其组织学病理之间的关系,以及P16蛋白表达与病理组织学之间的关系,以评价衡量DNA定量分析结合P16染色在宫颈癌筛查中的意义。结果:4334例中369例查出倍体异常,369例倍体异常中202例建议阴道镜活检,发现150例为CIN1级以上,同时对活检202例进行P16蛋白染色发现随着病变级别增高,P16表达百分比也随之上升,通过χ2检验发现P16蛋白在宫颈上皮内瘤变中表达有明显统计学意义(P<0.05)。结论:DNA倍体定量分析在宫颈癌筛查中有一定意义,同时结合P16蛋白免疫组化染色及宫颈活检,对发现早期宫颈病变有意义。

实时荧光定量聚合酶链式反应检测石蜡样本结核DNA时有关切片量的控制及优化

目的:探索实时荧光定量检测石蜡样本组织结核DNA时满足实验和诊断需要的切片量。方法:收集2022年11月—2023年5月病理科就诊患者的结核DNA检测标本。分析不同大小的石蜡样本组织在不同切片厚度和不同切片数量影响下的样品DNA浓度和纯度,以及聚合酶链式反应(PCR)结果和抗酸的符合率。结果:通过实时荧光定量PCR检测216例病理诊断疑似为结核患者的石蜡样本,发现规范前DNA浓度波动范围为2.25~1373.00 ng/μL,纯度波动范围为1.10~2.20;规范后DNA浓度波动范围为6.20~1380.00 ng/μL,纯度波动范围为1.80~2.27。结论:实时荧光定量PCR检测石蜡样本结核DNA时,严格规定的切片厚度、切片数量有利于确保样本DNA的浓度和纯度,确保实验的有效性,提升结核DNA检测结果和抗酸染色结果的一致性,对结核病理诊断有重要价值。

化学发光法与乙肝病毒DNA荧光定量在乙肝检测中的应用价值

目的:明确化学发光法(CLIA)、乙肝病毒DNA荧光定量技术在乙肝检测中的价值。方法:选取285例乙肝患者和280例肝硬化患者为检测对象,分别对样本进行CLIA、乙肝病毒DNA荧光定量分析,统计相关检测数据。结果:乙肝组HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb水平均明显低于肝硬化组(P<0.05),HBV-DNA水平明显高于肝硬化组,随着HBV-DNA水平上升,乙肝患者的肝功能指标均有不同程度提高(P<0.05)。经Pearson相关性分析,HBV-DNA和HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb均为负相关(t=-0.876、-0.956、-0.974、-0.922、-0.981)。结论:CILA、乙肝病毒DNA荧光定量检测技术在乙肝检测中都有一定价值,两者之间为负相关,可为乙肝诊断、预后评估提供参考信息。

DNA倍体定量分析、HPV E6/E7 mRNA检测及HPV筛查在宫颈病变诊断中的价值

目的比较分析宫颈病变筛查中人乳头瘤病毒(human papilloma virus,HPV)DNA基因分型检测、DNA倍体定量分析、HPV E6/E7 mRNA检测的价值。方法选取宫颈病变筛查者258例作为研究对象,均接受HPV DNA基因分型检测、HPV E6/E7 mRNA、DNA倍体定量分析及宫颈组织病理检查,对比DNA倍体定量分析、HPV E6/E7 mRNA检测、HPV DNA基因分型检测与宫颈组织病理检查结果,统计分析DNA倍体定量分析、HPV E6/E7 mRNA检测、HPV DNA基因分型检测的价值。以宫颈组织病理检查为金标准。结果DNA倍体定量分析的灵敏性为70.00%(42/60),特异性为77.27%(153/198),准确性为75.58%(195/258),阳性预测值为48.28%(42/87),阴性预测值为89.47%(153/171)。HPV E6/E7 mRNA检测的灵敏性为86.67%(52/60),特异性为59.60%(118/198),准确性为65.89%(170/258),阳性预测值为39.39%(52/132),阴性预测值为93.65%(118/126)。HPV DNA基因分型检测的灵敏性为95.00%(57/60),特异性为39.39%(78/198),准确性为52.33%(135/258),阳性预测值为32.20%(57/177),阴性预测值为96.30%(78/81)。HPV DNA基因分型检测的灵敏性、阴性预测值均高于DNA倍体定量分析、HPV E6/E7 mRNA检测,特异性、准确性、阳性预测值均低于DNA倍体定量分析、HPV E6/E7 mRNA检测(P<0.05),HPV E6/E7 mRNA检测的灵敏性、阴性预测值均高于DNA倍体定量分析,特异性、准确性、阳性预测值均低于DNA倍体定量分析(P<0.05)。结论宫颈病变筛查中HPV DNA基因分型检测的价值高于DNA倍体定量分析及HPV E6/E7 mRNA检测,值得应用。

乙型肝炎病毒DNA实时荧光定量研究进展

乙型肝炎是由乙型肝炎病毒感染所引起的急慢性传染性疾病,病原体是一种DNA病毒,所以乙型肝炎病毒DNA定量的检测是乙肝的核酸检测,也是一种量化的检测方式。病毒DNA定量的高低和体内病毒含量的多少呈正相关,同时也可反映乙肝的传染性强弱,病毒DNA定量越高,病毒复制越活跃,传染性越强。乙型肝炎病毒DNA定量的检测一般采用PCR(实时荧光定量)的方法,不同的疾病状态下,病毒定量的水平高低不相同,本文通过综述实时荧光定量检测乙肝病毒的情况,并了解后续诊断与预后。

印片细胞DNA定量分析联合冰冻切片在术中快速诊断中的应用

目的研究印片细胞DNA定量分析联合冰冻切片在术中快速诊断中的应用价值。方法选取2018年1月—2022年1月平度市第三人民医院术中需行快速病理诊断的标本98例作为研究对象,对术中取材的标本进行印片细胞DNA定量分析、冰冻切片处理及联合检测,以常规石蜡切片的诊断结果作为金标准。结果石蜡切片诊断显示,98例组织标本中共有40例恶性病变,58例良性病变;与常规石蜡切片结果比较,冰冻切片的敏感度为95%以及特异性为89.66%;DNA定量分析的敏感度为75%以及特异性为93.10%;两种方法联合检测敏感度为82.5%以及特异性为96.55%。三种检测方法的误诊率分别为10.34%、6.90%和3.45%。结论印片细胞DNA定量分析联合冰冻切片检测的误诊率较低,因此,联合冰冻切片可提高术中快速诊断的准确性,为临床医师制订充分的手术决策和精准医疗提供强有力的依据。

乙肝病毒DNA定量检测与免疫学标志物检测的比较研究

对比分析乙肝病毒DNA(HBV-DNA)定量检测与免疫学标志物检测的检测效果。采用随机数字表法从贵州省惠水县人民医院2021年5月—2022年4月收治的乙肝患者中抽取120例进行研究,患者均接受HBV-DNA定量检测和免疫学标志物检测,根据检测结果将患者分为其他模型组(40例)、小三阳组(40例)、大三阳组(40例)。结果显示,HBV-DNA定量检测:大三阳组高于小三阳组、其他模型组,小三阳组高于其他模型组,组间数据差异具有统计学意义(P<0.05);HBV-DNA检测与免疫学标志物检测阳性率对比:HBV-DNA阳性标本中,HBsAg检出率为96.55%(56/58),HBeAg检出率为48.28%(28/58)。研究发现,临床诊断乙肝病毒(hepatitis B virus,HBV)感染时可采用HBV-DNA定量检测与免疫学标志物检测,这两种检测方式联合检测对于乙肝患者的临床诊治和预后诊断具有重要的参考价值。

DNA倍体定量分析、HPV检测和液基细胞学在宫颈癌筛查中的应用价值

目的探究DNA倍体定量分析、人乳头瘤病毒(HPV)检测和液基细胞学(TCT)在筛查宫颈癌中的应用价值。方法选取120例宫颈癌筛查患者,予DNA倍体定量分析、HPV检测、TCT检测,以病理学检测为诊断金标准,计算并分析各检测方式的诊断效能。结果DNA倍体定量分析、HPV检测、TCT检测阳性率分别为68.33%、71.67%、72.50%,联合检测阳性率为70.83%。联合检测敏感度、诊断符合率高于DNA倍体定量分析、HPV检测、TCT检测(P<0.05)。联合检测诊断效能高于DNA倍体定量分析、HPV检测、TCT检测(P<0.05)。结论DNA倍体定量分析、HPV检测和TCT检测均能有效筛查宫颈癌,但联合检测诊断效能更高,可实现宫颈癌早发现早治疗,降低宫颈癌发病率和病死率,值得临床推广与应用。

化学发光法与乙肝病毒DNA荧光定量在乙肝检测中的应用价值

探究化学发光法与乙肝病毒DNA荧光定量在乙肝检测中的应用价值。方法 从我院2022.5-2023.5收治的乙肝患者中随机选取其中的100例作为本次实验的研究对象,所有被确诊乙肝患者均需要抽血进行化学发光法检测、乙肝病毒DNA荧光定量检测,分别在每一次检查后记录相关检测结果并对其进行回顾性分析。结果 相较于单用化学发光法组检测结果而言,化学发光法与乙肝病毒DNA荧光定量联合组下HBcAb阳性率较高(66.00%对70.005),HBeAg阳性率相同(42.00%对42.00%,但两者无统计学意义(P>0.05);HBeAb、HBsAb以及HBsAg阳性率较高(30.00%对44.00%、12.00%对24.00%、50.00%对64.00%)(P<0.05)。结论 两种检测方法均能够有较高的准确性,但是若是将化学发光法与乙肝病毒DNA荧光定量联合检测,其准确率可提升,更有利于动态检测机体乙肝情况。

荧光定量(PCR)用于乙肝病毒DNA检测的诊断价值

分析荧光定量(PCR)应用于乙肝病毒DNA(HBV-DNA)检测与乙肝病毒标志物(乙肝两对半)化学发光法检测的诊断价值。方法 回顾性分析100例2023年3月至2023年8月我院就诊的乙型肝炎患者HBV-DNA和乙肝两对半结果。乙肝两对半定性检测(血清乙型肝炎病毒标志物)采用磁微粒化学发光法。HBV-DNA则采用荧光定量PCR检测;对两种检测结果进行分析。结果 1(+)、3(+)、5(+)模式(HBsAg、HBeAg、HBcAb同时阳性,即“大三阳”)、1(+)、4(+)、5(+)模式(HBsAg、HBeAb、HBcAb同时阳性,即“小三阳”)分别为30例、39例,占比分别为30.0%、39%。将HBV-DNA表达水平>1*102copies/ml判断为阳性;HBV-DNA定量检测结果显示,全部100例患者中,HBV-DNA检测阳性的患者共有56例,阳性率为56.0%(56/100)。在HBV-DNA阳性率方面,和其他模式相比较,3(+)模式及1(+)、3(+)、5(+)模式均更高(P<0.05),分别为100.0%与96.67%;而在HBV-DNA水平方面,和其他模式相比较,1(+)、3(+)、5(+)模式则更高(P<0.05)。结论 联合HBV-DNA定量检测与乙肝两对半定性检测,能为乙型肝炎的早期诊断及临床用药提供参考。

单粒蔬菜种子DNA快速提取方法的建立

利用磁珠法对甘蓝、白菜、芥菜、洋葱、黄瓜、番茄、辣椒等7种形状、大小不同的蔬菜单粒种子和幼苗进行DNA提取,采用内参基因Actin进行实时荧光定量PCR评价DNA质量,利用KASP(kompetitive allele specific PCR)标记检验DNA质量是否达到KASP检测要求。结果显示,单粒种子磁珠法提取的各蔬菜DNA平均Ct值均处于19~24范围内。KASP检测进一步证实种子提取DNA的质量达到KASP标记分型的要求。综上所述,本研究建立了一种简单、经济、实用性强的单粒种子DNA提取方法,该方法对不同大小的蔬菜种子具有较好的稳定性,且大幅缩短了获得基因型数据的时间。

细胞DNA倍体定量分析联合薄层液基细胞学在非妇科细胞学中的诊断价值

目的:采用薄层液基细胞学检查和细胞DNA倍体定量分析对非妇科脱落细胞学标本进行检测,比较两种诊断方法的差异。方法:将临床送检的285份非妇科脱落细胞标本制成薄层液基细胞学和细胞DNA倍体定量分析玻片各1张,对比两种检查方法阳性检出率的差异。结果:薄层液基细胞学检查确诊4例,可疑4例,阴性277例,阳性率为2.807%(8/285);细胞DNA倍体定量分析方法确诊3例,可疑2例,阴性280例,阳性率为1.754%(5/285),两种检测方法阳性率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:薄层液基细胞学检查和细胞DNA倍体定量分析在非妇科细胞学诊断中具有同样的诊断价值,但是依据目前相关研究结果,细胞DNA倍体定量分析更值得临床应用。

藜麦FLS基因家族的鉴定、表达及DNA变异分析

【目的】黄酮醇合成酶(FLS)是石竹目植物中多酚类次生代谢的关键酶,为探究FLS基因在藜麦生长发育中的功能,对FLS基因家族进行鉴定和表达分析。【方法】利用生物信息学分析网站,鉴定出CqFLS家族成员,分析其基因结构、蛋白的理化性质、二级结构、三级结构、启动子顺式元件以及系统进化关系等,并通过基因克隆、构建表达载体的方法分析其蛋白表达情况。【结果】共鉴定出3个CqFLSs基因,不均匀分布在2条染色体上,CqFLSs启动子区域包含水杨酸、脱落酸、茉莉酸甲酯和干旱诱导等元件;CqFLS2.1g发现多处InDel和SNP变异,在ch0128871893、28871125、28872881处编码核苷酸删除,且均注释为上游效应,未检测到移码突变;FLS家族系统进化树分析可知,与其他两个基因相比,CqFLS2.1g与CqFLS1.1g、CqFLS3.10g处于不同分支,表达水平也存在差异,CqFLS2.1g可能发生分化;同时,基因表达分析表明,3个CqFLSs基因在青白1号籽粒中整体表达量高于青黑1号和贡扎4号。对克隆出的CqFLS1.1g用0.3 mmol/L的IPTG诱导,在20℃和37℃的条件下均可成功表达。【结论】CqFLS1.1g在花的形成以及籽粒发育过程中发挥作用,而CqFLS2.1g则主要参与藜麦籽粒的形成,CqFLS的表达具有组织特异性,在藜麦生长发育过程中发挥重要的作用。

样品保存温度和时长对环境DNA鱼类监测的影响

环境DNA技术作为最具潜力的生物监测手段正逐渐应用于生物多样性调查。水样采集和前处理对环境DNA生物监测至关重要。通过实验室水箱实验分析4种温度梯度下(4、15、25和35℃)7种常见鱼类环境DNA随时间的降解规律,探究保存温度和时长等前处理条件对环境DNA鱼类监测的影响,并在25℃下测定了野外环境中鱼类环境DNA的降解速率。结果表明:整体上,温度越高,鱼类环境DNA降解越快。水箱实验中,除4℃外,各鱼类环境DNA在采集后24 h内降解超过90%,计算半衰期在0.91~5.80 h之间。野外环境样品中,鱼类环境DNA含量更低、降解更快,总鱼类环境DNA计算半衰期仅为0.15 h。环境DNA宏条形码比定量PCR检测灵敏度高,在水样采集第13天后仍能检出大量鱼类信息,但定量PCR在水样采集第2天就无有效检出。宏条形码检出各鱼类相对丰度在水样采集前5天内基本保持稳定。综上,采用定量PCR方法开展鱼类监测时,建议采样后4 h内完成过滤;采用宏条形码方法时,建议24 h内完成样品过滤,以最大程度降低环境DNA降解对监测结果的影响。

DNA提取方法对实时荧光定量PCR检测花生过敏原Ara h 2基因的比较研究

食物过敏是一个世界性的公共卫生问题,其中花生过敏最为严重。基于DNA的分子生物学检测方法目前已广泛应用于花生过敏原检测,样品DNA的提取质量会显著影响检测的灵敏度及准确率。本研究比较了5种DNA提取方法,包括十六烷基三甲基溴化铵(cetyl trimethyl ammonium bromide,CTAB)法、柱式法及3种基于磁珠纯化技术的DNA快速提取法,对生花生、煮花生、炸花生、烤花生、花生酥和花生酱6种不同加工方式的花生基质样品进行DNA提取,考察了不同方法获得的DNA浓度、纯度指标,并采用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)对花生过敏原Ara h 2基因进行了检测分析。结果表明,月桂酰肌氨酸钠(Sodium Lauroyl Sarcosine)磁珠法的适用性广、提取率高,对于6种花生基质提取的DNA均能高效检出花生过敏原Ara h 2基因;对于花生质量分数为0.05%~1.00%的小麦粉二元混合物,SLS磁珠法的DNA提取率总体优于CTAB法,并且能有效提取出与花生共用1条生产线的燕麦片中污染的花生DNA,证实SLS磁珠法提取的实际样品DNA能够满足花生过敏原检测目的。本研究为花生及其制品DNA提取方法提供了参考,特别是磁珠类方法,高效快速,提取质量能够保障后续基于DNA的花生过敏原分子生物学方法检测结果的准确性。

D17Z1探针点杂交DNA定量研究

本研究化学合成了高等灵长类特异性α卫星寡核苷酸片段(D17Z1),经辣根过氧化物酶标记、分子杂交、化学发光法检测,建立了高等灵长类特异性DNA精确定量的方法。制备了DNA浓度梯度标准对照。对人类DNA,猴、猪、牛、羊、鸡、兔、鱼、小鼠等常见动物DNA及JM109大肠杆菌、λDNA、Ф174DNA等微生物DNA进行了定量分析。结果表明,应用该方法对人类DNA定量不受非高等灵长类动物DNA与微生物DNA的影响,可实现组分定量;灵敏度测试,可对0.12ng的人类DNA进行定量,适用于法医DNA检验定量分析。

AI细胞形态学联合DNA定量分析鉴别良恶性胸腹水的探讨

目的探讨通过人工智能(AI)细胞学联合DNA定量分析(DNA-ICM)辅助诊断系统在良恶性胸腹水鉴别中的诊断价值。方法用液基细胞学(LCT)、DNA-ICM、AI、AI联合DNA-ICM系统对360例胸腹水标本进行良恶性鉴别,比较几种检测方法的敏感度、特异性、准确度、Kappa值、约登指数及曲线下面积。结果通过AI联合DNA-ICM检测良恶性胸腹水的敏感度、特异性、准确度分别为95.23%、94.12%、94.44%,高于其他三种单独检测方法,差异均具有统计学意义(P<0.05)。LCT、DNA-ICM、AI检测的Kappa值分别为0.646、0.642、0.586,约登指数分别为0.693、0.687、0.676,AUC分别为0.846、0.843、0.838;通过AI联合DNA-ICM的Kappa值为0.869,约登指数为0.893,AUC为0.947,均高于三种单独检测方法。结论三种单独检测方法中LCT的可靠性、真实性、诊断价值最高,可为临床鉴别良恶性胸腹水的常用方法。通过AI联合DNA-ICM辅助诊断系统阅片,在鉴别良恶性胸腹水的诊断效能比三种单独检测方法好,可作为临床鉴别良恶性胸腹水的可靠方法。