乙型肝炎病毒相关性肾炎肾组织中HBVDNA的原位检测

目的 :检测HBVDNA在乙型肝炎病毒相关性肾炎肾组织中的分布 ,探讨乙型肝炎病毒相关肾炎的发病机制。方法 :应用针对HBV全基因组的DNA探针进行原位杂交及原位PCR研究 ,对 45例肾炎病人肾组织中的HBVDNA进行检测。结果 :肾组织HBV抗原阳性的 38例标本中 ,肾组织HBVDNA的检出率为 71% (2 7/38) ;其中 ,HBV相关肾炎HBVDNA的阳性率为 73% (19/2 6 ) ,IgA肾病及狼疮肾炎伴HBV抗原沉积病例HBVDNA的阳性率为 6 7% (8/12 )。原位杂交显示HBVDNA以肾小管上皮细胞胞浆分布为主 ;原位PCR方法可使阳性信号增强 ,并可见HBVDNA在部分肾小管细胞胞核、肾小球上皮细胞及系膜细胞的胞核和胞浆以及肾小球基底膜内均有分布。结论 :HBV在肾组织内存在感染及复制 ,其在乙型肝炎病毒相关性肾炎的发病机制中具有重要作用。

侵袭性骨肿瘤DNA含量流式细胞术测定及其临床意义

目的：探讨侵袭性骨肿瘤ＤＮＡ含量与肿瘤良恶性程度及预后的关系。方法：用流式细胞术对２０例经手术治疗取得的新鲜侵袭性骨肿瘤组织标本作ＤＮＡ含量测定，并与病人复发情况作相关分析。结果：二倍体及低ＤＩ、Ｓ％ 、ＰＩ的侵袭性骨肿瘤复发率低，异倍体及高ＤＩ、Ｓ％ 、ＰＩ者复发率高。结论：二倍体侵袭性骨肿瘤具有良性倾向，宜采用刮除加灭活及边缘切除等手术方式，而异倍体侵袭性骨肿瘤具有恶性倾向，宜采用肿瘤广泛切除甚至截肢等手术方式。

β－胡萝卜素对人大肠癌细胞株SW1116增殖和核DNA含量的影响

不同剂量（１０－５ｍｏｌ／Ｌ、１０－６ｍｏｌ／Ｌ和１０－７ｍｏｌ／Ｌ）β－胡萝卜素对体外人大肠癌细胞株ＳＷ１１１６增殖显示明显的抑制作用，癌细胞核ＤＮＡ含量明显减少、分布改变。此作用不仅由于β－胡萝卜素的ＶｉｔＡ活性，也由于其自身活性，其作用机制可能表现为抗氧化、抑制癌基因表达、损伤核结构等。

流式细胞光度术分析胃癌石蜡标本DNA含量及P53蛋白含量的测定

用免疫组织化学的方法检测了４９例胃癌组织和１０例胃良性病变组织Ｐ５３蛋白的含量，用流式细胞光度术检测了ＤＮＡ倍体和１０例免疫组化Ｐ５３蛋白表达阳性标本的Ｐ５３蛋白含量。结果提示，ＤＮＡ倍体和Ｐ５３蛋白表达与胃癌生物学行为有重要关系，ＦＣＭ定量基因表达产物及ＤＮＡ含量双参数分析预后，对临床有重要指导意义。

神经胶质瘤中9p21-22区微卫星DNA的杂合性缺失研究

目的 :用微卫星确定神经胶质瘤在 9p2 1 -2 2区是否发生基因丢失。方法 :采用聚合酶链反应 (PCR)方法及聚丙烯酰胺凝胶电泳及银染技术 ,对 2 9例神经胶质瘤标本进行杂合性缺失(L OH)及微卫星不稳定性 (MSI)检测。结果 :2 9例神经胶质瘤在所选 9p2 1 -2 2区的三个位点中未发现 L OH及 MSI改变。结论 :1 9p2 1 -2 2区除 p1 5、p1 6可能不存在神经胶质瘤的其它肿瘤抑制基因 ;2本研究结果提示

人衰老相关DNA片段的筛选及特征分析

目的 :探索衰老相关新基因。方法 :采用RAPD法筛选衰老相关的DNA片段 ,采用Southernblot分析基因状态 ,Northernblot分析mRNA水平。结果 :筛选出衰老特异的DNA片段 ,长 894bp ,命名为sad。将sad片段克隆、测序 ,查询GenBank ,确认为一种新的衰老相关序列 ,基因登录号为AQ32 410 4。Southernblot分析表明 ,sad基因可能是一种单拷贝基因 ;sad在衰老 2BS细胞中的Southernblot图谱不同于年轻细胞 ,而与人胃癌细胞系BGC 82 3类似。Northernblot分析显示 ,sad基因具有表达活性 ,其RNA长约 0 .5kb ,相对水平在各代龄的细胞间差异无显著性。结论 :sad是一种新的与衰老相关的DNA片段 ,sad基因可能为单拷贝基因 ,具有表达活性。

喉癌微血管密度与细胞DNA含量参数的定量研究

目的 :探讨喉癌微血管密度 (MVD)及细胞 DNA含量参数与患者预后的关系。方法 :采用F8特异性抗体和 SABC法测量 31例手术切除的喉癌组织的 MVD,用图像细胞分析术测量癌细胞的核面积峰值及 S期细胞数。结果 :MVD及 DNA含量在喉癌的组织学分级及分型中无显著性差异 (P>0 .0 5 ) ,MVD在 2年后的淋巴结转移组 (1 0 .2 3± 0 .78)与无淋巴结转移组 (6 .38± 0 .33)两者之间有显著性差异 (P<0 .0 5 ) ,核面积峰值和 S期细胞百分率在 2年后的淋巴结转移组 (6 1 .0 3± 0 .2 8) μm2 及 (38.1 1± 0 .37) %与无淋巴结转移组 (4 0 .97± 0 .41 ) μm2 及 (2 2 .97± 0 .2 9) %分别比较均有显著性差异 (P<0 .0 5 )。结论 :喉癌间质内的 MVD及喉癌细胞核的

幼儿HBsAg携带者外周血单个核细胞中HBV-DNA及HB抗原的检测

本文对9例HBsAg阳性母亲所生,并于0、1、6月龄时接种乙肝疫苗免疫失败而形成HBV持续感染的小儿,进行外周血单个核细胞(PBMC)中有无HBV感染的研究.应用未标记酶抗酶免疫复合物法(PAP)检测HBsAg和HBcAg,原位核酸杂交检测HBV-DNA;10例抗HBs阳性幼儿作为对照.结果:9例血清HBsAg阳性幼儿的PBMC中有4例HBV-DNA阳性.其中3例HBsAg同时阳性.另有1例HBsAg阳性,但未测到HBV-DNA.HBc Ag均阴性.HBV-DNA分布于胞浆中,阳性细胞数约占细胞总数的1～2%.对照组PBMC中HBV-DNA、HBsAg和HBcAg均阴性.上述结果表明,HBV已感染PBMC,并在其内表达S抗原.

子宫颈上皮内瘤变、子宫颈癌与尖锐湿疣的细胞核DNA含量及图像分析

目的：探讨宫颈上皮内瘤变、癌及尖锐湿疣细胞核ＤＮＡ含量及核面积等的变化规律。方法：应用计算机图像分析系统经Ｆｅｕｌｇｅｎ染色的组织切片对正常宫颈鳞状上皮、尖锐湿疣、不同程度宫颈上皮内瘤变与子宫颈癌共４０例，进行细胞核ＤＮＡ含量、核面积与倍体直方图检测。结果：显示核ＤＮＡ含量、核面积及超５倍体（５ｃ）细胞等在上述各病变依次增加，统计学分析有显著性差异；但核面积增大与核ＤＮＡ含量增加并不完全呈正相关，不同病变的细胞核ＤＮＡ倍体分布直方图图形不同。结论：细胞核ＤＮＡ含量及图像分析能以量化的方式形象地显示宫颈鳞状上皮癌变过程的变化规律，对病理诊断及临床工作有重要参考价值。尖锐湿疣属良性增生性病变。

多聚酶链反应检测细菌DNA对大鼠空、回肠吻合口瘘的早期诊断价值

目的探讨PCR检测大鼠外周血及腹水中细菌DNA对空肠-空肠、回肠-回肠吻合口瘘的早期诊断价值。方法健康Wistar雌性大鼠50只,随机分成5组,每组10只:A组为假手术组;B组为空肠-空肠吻合组;C组为空肠吻合口瘘组;D组为回肠-回肠吻合组;E组为回肠吻合口瘘组。采集手术前后外周血及术后腹水,抽提DNA,比较lacZ基因和16SrRNA基因的PCR阳性率,并观察各组的病理学情况。结果(1)C,E组术后外周血lacZ基因PCR阳性率与B,D组无显著性差异(P>0.05);C,E组术后外周血16SrRNA基因PCR阳性率显著高于B,D组(P<0.05)。(2)C,E组腹水lacZ基因和16SrRNA基因PCR阳性率均显著高于B,D组(P<0.05)。(3)C,E组腹水lacZ基因阳性率显著高于外周血(P<0.05);C,E组腹水16SrRNA基因阳性率与外周血无显著性差异(P>0.05)。结论(1)PCR检测术后外周血16SrRNA基因对空、回肠吻合口瘘的早期诊断有一定意义;(2)检测术后腹水lacZ基因和16SrRNA基因对空肠-空肠、回肠-回肠吻合口瘘的早期诊断也有一定意义。

外周血淋巴细胞DNA修复能力的检测

利用传统的非程序DNA合成法(UDS)检测用紫外线损伤淋巴细胞后^(a)HTdR掺入细胞的量,以反映DNA之修复能力(DNAR)的大小。利用此法测定21名健康人、29例癌症病人、19名口服抗衰中药枸杞子老年人的DNAR。结果显示,癌症病人的DNAR明显降低,口服枸杞子能增强老年人的DNAR,反映出UDS—^(a)H法能较敏感地测出细胞的DNAR状况,以及外界因素,如中药枸杞子对DNAR的有益影响。

宫颈粘膜癌变过程中DNA含量、Ag—NOR及核形态变化的定量分析

对54例宫颈鳞状上皮不典型坛生、原位癌、鳞癌Ⅰ级、Ⅱ级、Ⅲ级进行核仁组成区相关嗜糖蛋白（Ag-NOR）计数,同时利用图像分析技术对其中的25例进行DNA含量的原位定量及核浆比测定,结果8C及8C以上细胞群的出现是判断肿瘤恶性程度的重要指标。Ag-NOR计数及核浆比与细胞DNA含量变化呈正相关,随病理分级逐级增高,并在判断肿瘤恶性程度上有一定意义。

光动力疗法对肛管内尖锐湿疣患者HPV DNA载量的影响

目的:明确光动力疗法(PDT)对肛管内尖锐湿疣(ACW)患者HPV DNA载量的影响。方法:33例ACW患者在PDT治疗前后经实时荧光定量PCR方法检测HPV 6/11 DNA拷贝数。在末次治疗后第1周评估疗效,在第4和第8周评估复发率。结果:治疗结束后第1周,疣体清除率为97.26%。第4周和第8周复发率分别为12.33%和21.09%。治疗前HPV DNA基线均值为(6.66±0.65)log10拷贝,治疗第1次后为(5.56±0.78)log10拷贝,治疗第2次后为(4.47±0.74)log10拷贝,治疗第3次后为(3.36±0.73)log10拷贝。治疗前后4组数据经方差分析显示差异有统计学意义(F=753.61,P<0.01)。采用配对t检验对PDT治疗前后各组数据进行两两比较显示差异均有统计学意义(P<0.01)。结论:随着PDT治疗次数增加,HPV DNA拷贝数随之降低,表明PDT可明显降低ACW患者HPV 6/11DNA载量。

银川地区HBsAg阳性人群中HBV-DNA的分布

以非放射性(Dig—HBV—DNA 探针)分子杂交技术,检测了银川地区405例 HBsag携带人群中的 HBV—DNA。阳性率为34.81%(男性40.32%高于女性30.14%,P<0.05),且随年龄的增长而极急速地下降(P<0.005),回汉民族间无明显差异。HBsAg 的滴度与HBV—DNA 的检出率呈正相关(γ_s=0.999,P<0.01)HBsAg 的滴度至≥1:256时,HBV—DNA 的检出率可高达100%。作者等认为;以 HBsAg 的定量滴度来判定其传染性有一定的参考价值;滴度在1:64～1:128时需加强治疗管理,≥1:256时应视为病毒复制的标志,并具有较强的传染性。

早期胃癌淋巴结微小转移的临床病理学及生物学特征研究

目的:研究早期胃癌淋巴结微小转移的临床病理学及生物学特征,探讨微小转移的诊断、治疗及其预后,阐明早期胃癌淋巴结转移发生、发展机理。方法:以11例有微小淋巴结转移者作为微小转移组,以46例有淋巴结转移者作为对照组。应用免疫组织化学染色检测ssDNA、bcl-2、p53、c-myc、E-cadherin、Ki-67和CD34。将各组的肿瘤灶亚分类为表层部、浸润部和淋巴结部,对各病例的各部位、各个指标进行统计学分析。结果:微小转移组中表层部的ssDNA阳性率高于对照组、浸润部和淋巴结部,bcl-2的阳性率高于浸润部和淋巴结部,c-myc阳性率高于对照组;其淋巴结部的E-cadherin阳性率和微血管面积比低于对照组;其表层部和淋巴结部的Ki-67阳性率低于对照组。微小转移组中淋巴结等于或小于4mm者占27.3%。结论:ssDNA、E-cadherin和Ki-67低表达的早期胃癌癌细胞恶性程度较高,黏附力较低,但增殖能力较弱,部分处于静止状态;而微血管增加是转移灶形成和发展的基础。

核形态测量对判断小肝癌预后和复发的意义

作者应用ＭＩＰＳ－１型自动图像分析仪，检测２５例小肝癌细胞核形态学参数及ＤＮＡ含量。结果发现，随着小肝癌细胞分化程度的减低（Ｅｄｍｏｎｄｓｏｎ分级Ⅰ～Ⅲ级），肿瘤细胞核面积、最大直径、积分光密度呈增高趋势，术后复发率逐渐增高（０％、３８．９％、８０％）。复发组肝癌细胞核周长、核最大直径、核积分光密度及ＤＮＡ指数均明显高于未复发组，分别为２５．８４±２．０７比２４．０５±２．７８，８．３８±０．８７比７．７３±０．８１，７．９７±１．８１比５．６５±２．０１，３．０６±１．１１比２．０１±０．５２（Ｐ＜０．０５～０．００５）。结果表明，细胞核增大程度是反映肝癌细胞分化度与恶性度的有效指标。Ｅｄｍｏｎｄｓｏｎ分级对判定肝癌细胞分化程度及预后具有临床实际意义，但核形态参数与ＤＮＡ指数比较，后者在判定分化程度及复发、预后方面更具明显优势。

采用聚合酶链反应检测肺结核病患者中的结核杆菌

目的：建立一种快速、敏感及特异的早期诊断肺结核病方法。方法：采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术，检测了６４例肺结核患者的外周血与痰标本结核杆菌ＤＮＡ。结果：外周血结核杆菌ＤＮＡ的阳性率为６７．２％（４３／６４）；痰标本的阳性率为２９．６％（１９／６４）（Ｐ＜０．０５）。结论：用ＰＣＲ技术诊断肺结核病。

结直肠癌病人粪便及组织中Ki－ras基因突变的研究

作者采用ＰＣＲ－ＲＦＬＰ方法研究了中国人结直肠癌ｒａｓ基国突变的背景，并在病人粪便ＤＮＡ中检测该突变基因。３５例癌组织中发现Ｋｉ－ｒａｓ１２位密码子突变１１例（３１．４％），６１位密码子１例（２．９％），没有发现西方结直肠癌中较为常见的１３位密码子突变。１８例病人粪便ＤＮＡ中６例有突变ｒａｓ基因，并与癌肿组织的检测结果完全吻合。作者认为从粪便ＤＮＡ检测ｒａｓ基因突变，对早期发现结直肠肿瘤具有实际应用前景。

血清和肝组织内HBV复制状态与肝脏病变活动性关系的研究

经病理确诊的47例乙型肝炎患者血清中HBV DNA、HBeAg的检出率在各型肝炎之间无显著性差异(P>0.05)。肝组织HBsAg检出率为76.6％,其形态呈包涵体型、弥漫型和膜型为主分布者分别是36.1％、55.6％和8.3％。HBsAg呈弥漫型分布者各类型肝炎之间无显著性差异(P>0.05),提示肝细胞内HBsAg的表达仅反映HBV复制,而与肝组织病变无关。肝组织HBcAg检出率为27.7％,其形态呈核型和浆型分布者分别占38.5％和61.5％,浆型主要见于炎症明显的肝细胞内,而核型刚见于病变较轻的肝细胞中,反映了HBcAg的表达与肝组织活动性病变有关。

基于RAPD技术对新疆地区罗布麻遗传多样性的研究

以精河县艾比湖湿地自然保护区、巩留县、新源县高潮牧场、尉犁东河滩乡、阿勒泰市阿苇滩镇、阿勒泰市阿拉哈克乡6个地区的罗布麻硅胶干燥叶片为材料,采用Tiangen试剂盒提取罗布麻基因组DNA,得到满足RAPD分析的罗布麻基因组DNA。通过RAPD技术分别扩增出6个地区罗布麻遗传多样性条带,巩留县、精河县艾比湖湿地自然保护区、尉犁东河滩乡、新源县高潮牧场、阿勒泰市阿拉哈克乡、阿勒泰市阿苇滩镇罗布麻居群分别扩增出90、80、77、70、51、43个多态性位点。