肾上腺嗜铬细胞瘤患者组织葡萄糖转运蛋白1和拓扑异构酶ⅡA表达与临床特征及预后的相关性分析

目的探讨葡萄糖转运蛋白1(GLUT1)和拓扑异构酶ⅡA(TOP2A)在肾上腺嗜铬细胞瘤(PPGL)患者组织中的表达与临床特征及预后的相关性。方法选取2014年3月至2020年6月于新疆维吾尔自治区人民医院行手术切除的120例PPGL组织作为实验组。另收集同期行手术切除的100例无功能肾上腺腺瘤的肾上腺组织作为对照组。采用免疫组织化学染色法检测组织中GLUT1和TOP2A表达情况。通过Cox回归分析PPGL患者预后的影响因素。结果实验组中GLUT1的低表达率和TOP2A的高表达率均高于对照组[51.7%(62/120)比14.0%(14/100)、52.5%(63/120)比19.0%(19/100)],差异均有统计学意义(χ^(2)=34.225、31.829,均P<0.001)。GLUT1、TOP2A表达水平与镜下组织浸润和Ki-67有关(均P<0.05)。预后良好组中GLUT1高表达和TOP2A低表达比例均高于预后不良组,差异均有统计学意义(均P<0.001)。单因素分析结果显示,患者镜下组织浸润、Ki-67、GLUT1、TOP2A均是影响预后的因素(均P<0.001)。Cox多因素回归分析显示TOP2A、镜下组织浸润及Ki-67均是导致PPGL患者预后不良的危险因素,GLUT1为保护因素(均P<0.001)。结论GLUT1在PPGL组织中呈低表达,TOP2A呈高表达,与患者预后不良有关。

水稻ⅡB型拓扑异构酶OsSpo11基因的cDNA克隆、表达谱分析及其可变剪接的检测

Spo11基因是减数分裂双链断裂(DSBs)与分裂重组的初始化基因,在基因组进化方面具有重要作用。通过改进的Nest-PCR方法,从水稻愈伤组织中克隆到了水稻DNA拓扑异构酶OsSpo11基因的cDNA片段。克隆测序与表达研究表明,OsSpo11基因是水稻ⅡB型拓扑异构酶A亚基基因,在水稻不同组织中具有低丰度表达、组织特异性、可诱导性以及前体RNA剪接的可变性等特点。可变剪接异构体的发现,使OsSpo11基因在DNA代谢、发育、遗传重组等过程中的生物学功能表现出一定的复杂性,其功能和生物学意义有待进一步研究。

海南哥纳香醇甲GHM-10对L1210细胞DNA分子结构及拓扑异构酶Ⅱ活性的影响

目的：研究海南哥纳香醇甲（ＧＨＭ１０）抑制癌细胞ＤＮＡ合成的作用机制。方法：用单细胞凝胶电泳法检测ＧＨＭ１０对Ｌ１２１０细胞ＤＮＡ分子的损伤，碱洗脱法测定ＧＨＭ１０对Ｌ１２１０细胞ＤＮＡ单链长度的影响，用ＧＨＭ１０对超螺旋ｐＵＣ１８ＤＮＡ的解旋能力测定它对ＤＮＡ拓扑异构酶ＩＩ活性的影响。结果：Ｌ１２１０细胞用ＧＨＭ１０（４～１０）μｇ·ｍｌ－１处理４５ｈ后，ＤＮＡ分子受损，表现为电泳后在荧光显微镜下可见彗星状拖尾。ＧＨＭ１０（４～２５）μｇ·ｍｌ－１处理Ｌ１２１０细胞５ｈ，可引起ＤＮＡ单链断裂。Ｌ１２１０细胞或从Ｌ１２１０细胞分离的蛋白质在用ＧＨＭ１０处理后，ＤＮＡ拓扑异构酶ＩＩ的活性均被抑制。结论：ＧＨＭ１０可引起Ｌ１２１０细胞ＤＮＡ分子损伤；无论在细胞内还是细胞外，ＧＨＭ１０可抑制拓扑异构酶ＩＩ的活性。

DNA拓扑异构酶Ⅱβ结合蛋白1(TopBP1)磷酸化功能位点推测及功能分析

为阐明DNA拓扑异构酶Ⅱβ结合蛋白1(TopBP1)参与DNA损伤修复应答的分子机制,本研究通过生物信息学分析,发现多个潜在的TopBP1磷酸化位点T860,S887,T1104及T1167,利用分子生物学手段从人cDNA文库中扩增并获得TopBP1克隆质粒,将上述磷酸化位点突变为丙氨酸,观察突变质粒转染细胞对DNA损伤修复的应答反应.结果显示,在粒子射线照射或化疗药物处理细胞后,第1104丙氨酸突变(T1104A)的TopBP1蛋白导致pRPA32-S33的磷酸化水平大幅降低,同时细胞周期检验点失活,严重阻滞了DNA应激反应,证实T1104是TopBP1参与DNA损伤修复的关键活性位点.

共刺激分子B7H3通过调控DNA拓扑异构酶Ⅱα的表达对乳腺癌多柔比星化疗的影响

目的探讨共刺激分子B7H3(costimulatory molecule B7H3,B7H3)通过调控DNA拓扑异构酶Ⅱα(DNA topoisom eraseⅡalpha,TOP2A)的表达对乳腺癌多柔比星化疗敏感性的影响。方法收集临床标本,采用免疫组织化学染色验证B7H3表达与多柔比星化疗敏感性的相关性。采用成簇规律间隔短回文重复/Cas9基因编辑技术敲除B7H3,通过蛋白质印迹法和流式细胞术验证敲除结果。采用半抑制浓度值分析、集落形成、蛋白质印迹法检测凋亡蛋白、荧光双染色检测凋亡细胞以及细胞周期测定等方法验证B7H3表达与多柔比星作用的敏感性。小干扰TOP2A及其过表达TOP2A回复实验检测细胞凋亡。构建小鼠皮下成瘤模型验证体内B7H3表达与多柔比星化疗的作用。结果高表达B7H3的肿瘤组织对多柔比星治疗更加敏感。成功构建B7H3敲除的乳腺癌细胞。B7H3高表达的乳腺癌细胞对多柔比星作用更敏感。B7H3通过激活核因子κB(nuclear factor-κB,NF-κB)途径促进TOP2A的表达,进而增加乳腺癌细胞对多柔比星作用的敏感性。小鼠体内实验证明,B7H3高表达可增加乳腺癌对多柔比星化疗的敏感性。结论B7H3通过激活NF-κB通路调控TOP2A的表达使乳腺癌对多柔比星化疗更敏感。

2种喜树碱类拓扑异构酶1抑制剂ADE信号的挖掘与分析

目的对2种喜树碱类拓扑异构酶1抑制剂伊立替康和托泊替康的药物不良事件(ADE)信号进行挖掘与分析,为临床安全用药提供参考。方法基于美国FDA不良事件报告系统(FAERS)数据库,提取2004年1月1日至2023年3月31日上述2种药物的ADE报告数据。对数据进行处理后,采用报告比值比法联合贝叶斯置信传播神经网络法进行信号挖掘,并进行分析。结果共筛选出相关ADE报告14738份,其中伊立替康11483份,托泊替康3255份。伊立替康的ADE报告性别以男性为主,托泊替康以女性为主;两药的使用患者年龄均主要集中于45~<75岁。共检测出847个信号,累及24个系统器官分类(SOC)。其中,伊立替康检测出565个信号,累及24个SOC,主要集中于胃肠系统疾病、全身性疾病及给药部位各种反应、血液及淋巴系统疾病等;报告频数最多的ADE为腹泻,信号强度最大的ADE为胆碱能综合征。托泊替康检测出282个信号,累及22个SOC,主要集中于全身性疾病及给药部位各种反应、各类检查、血液及淋巴系统疾病、胃肠系统疾病等;报告频数较多的ADE为死亡和贫血,信号强度最大的ADE为发热性骨髓再生障碍。伊立替康的转移性结肠直肠癌、外周感觉神经病、脂肪性肝炎等ADE和托泊替康的虹膜萎缩、视网膜变性、玻璃体积血等ADE均未在各自说明书中提及。结论伊立替康和托泊替康的ADE主要累及消化系统和血液系统,临床上应重点监测;伊立替康所引起的胆碱能综合征应引起关注。除此之外,使用伊立替康的患者还应关注转移性结肠直肠癌、外周感觉神经病、脂肪性肝炎、蛋白尿等ADE,使用托泊替康的患者应加强眼器官疾病的监测,以确保用药安全。

木脂素-1通过抑制DNA拓扑异构酶Ⅰ诱导胃癌细胞凋亡的机制研究

目的探究牛蒡子衍生物木脂素-1(Mzs-1)体外抗肿瘤活性,初步分析其诱导胃癌细胞凋亡相关机制,为临床提供参考依据。方法采用CCK-8法测定Mzs-1对人胃癌细胞株SGC-7901增殖抑制情况,计算其半数抑制浓度(IC50),并观察Mzs-1对SGC-7901细胞凋亡及细胞周期的影响,分析Mzs-1对DNA拓扑异构酶Ⅰ(TopoⅠ)活性、SGC-7901细胞TopoⅠ蛋白表达的影响。结果 Mzs-1能抑制人胃癌细胞株SGC-7901增殖活性,且存在时间-浓度依赖性(P<0.05);不同浓度Mzs-1处理SGC-7901细胞48 h后,各组早期凋亡细胞比率差异有统计学意义(P<0.05);不同浓度Mzs-1作用于SGC-7901细胞48 h后,各组处于G2/M期细胞比例差异有统计学意义(P<0.05);Mzs-1处理SGC-7901细胞48 h后,各组TopoⅠ蛋白相对表达量差异有统计学意义(P<0.05);Mzs-1能抑制SGC-7901细胞中TopoⅠ活性、下调TopoⅠ蛋白表达,且存在浓度依赖性。结论 Mzs-1具有抗人胃癌细胞株SGC-7901增殖作用,并通过阻滞SGC-7901细胞周期于G2/M期而诱导其细胞株凋亡,作用机制可能与Mzs-1抑制SGC-7901细胞内TopoⅠ活性、下调TopoⅠ蛋白表达有关。

拓扑异构酶1及其喜树碱类抑制剂的临床研究进展

DNA拓扑异构酶1(Top 1)是一种重要的核酶,在DNA复制、转录、重组、修复、染色质组装和染色体分离等细胞代谢过程中,控制和修饰DNA拓扑结构。而且,Top1在多种肿瘤细胞中均过度表达。Top 1作为抗肿瘤药物靶点的确认,促进了新型抗肿瘤药物的发展。目前,研究最多的Top 1抑制剂主要是喜树碱类,已有3个喜树碱类药物上市(拓扑替康、伊立替康和贝洛替康)。本文对Top 1结构和功能的最新研究结果及其喜树碱类抑制剂的近期临床研究进展进行综述。

螺旋藻提取物对DNA拓扑异构酶活性的抑制及对DNA的直接影响

探讨螺旋藻提取物对DNA拓扑异构酶活性的影响以及对DNA的直接作用。方法 :TOPOI介导的负超螺旋 pBR322解旋反应检测对TOPOI酶活力的影响 ;TOPOII介导的kDNA去连环作用检测对TOPOII活力的影响 ;采用负超螺旋pBR322和kDNA检测对DNA的直接作用。结果 :螺旋藻提取物的水溶性成分和DMSO可溶性成分在浓度分别为3 2μg/ml和80μg/ml时,能完全抑制TOPOI介导的负超螺旋 pBR322解旋反应;两者对TOPOII介导的kDNA去连环作用完全抑制的浓度分别为16μg/ml和2000μg/ml。此外 ,螺旋藻提取物水溶性成分在高浓度时可直接引起DNA的双链断裂。结论 :TOPO酶 ,主要是TOPOI 。

Santamarin的抗肿瘤活性及对DNA拓扑异构酶的影响

目的研究Santamarin的体内外抗肿瘤活性及对DNA拓扑异构酶（TOPO）活性的影响。方法以7株人肿瘤细胞株为模型，采用改良MTT法检测Santamarin对肿瘤细胞增殖的影响；以小鼠移植性肉瘤S180和小鼠移植性肝癌H22为模型，检测Santamarin对在体肿瘤生长的影响；以pBR322DNA为底物，采用琼脂糖凝胶电泳检测Santamarin对TOPO介导的pBR322DNA解旋反应的影响，以及对pBR322DNA是否具有直接断裂作用。结果Santamarin对7株人肿瘤细胞株的半数抑制浓度（IC50）在0．99～3．61mg·L^-1之间；Santamarin30、90和270mg·kg^-1剂量对S180生长的抑制率分别为51．44％、63．60％和56．37％；对H22生长的抑制率分别为40．77％、39．47％和46．73％。Santamarin在2g·L^-1时完全抑制TOPOⅠ、Ⅱ的活性，但对DNA无直接断裂作用。结论Santamarin具有较为明显的体内外抗肿瘤活性，对DNATOPO活性的抑制可能是其作用机制之一。

原花青素对MNNG致DNA损伤及拓扑异构酶Ⅱ的影响

目的 观察原花青素对DNA损伤的保护作用及对黑色素瘤细胞中拓扑异构酶的影响 ,探讨原花青素癌化学预防的作用机制。方法 单细胞电泳法检测羟自由基对L92 9细胞DNA损伤的尾迹 ,用 [H3]TdR参入细胞DNA中进行标记 ,测定上清液中的放射强度来判定MNNG对DNA损伤 ;从黑色素瘤肿瘤细胞中提取拓扑异构酶 ,用琼脂糖凝胶电泳测定活性。结果 原花青素可以减轻DNA损伤尾迹及MNNG对DNA的损伤。但对黑色素瘤肿瘤细胞中拓扑异构酶无抑制作用。结论 原花青素对羟自由基及致癌剂MNNG引起的细胞DNA损伤有一定的保护作用。

灵芝提取物对DNA拓扑异构酶的抑制作用及诱导K562细胞凋亡

目的 :研究中华灵芝宝的抗肿瘤作用机理。方法 :DNA超螺旋解旋法检测中华灵芝宝对拓扑异构酶Ⅰ、Ⅱ (TOPOⅠ、Ⅱ )活性的影响 ;琼脂糖凝胶电泳检测其对DNA的直接打断作用及诱导K5 6 2细胞凋亡的能力。结果 :中华灵芝宝能抑制TOPOⅠ、Ⅱ的活性 ,促进DNA的解旋、断裂 ;同时还能直接打断质粒和大分子DNA ;作用于K5 6 2细胞后电泳显示有凋亡细胞特有的“梯状”条带。结论 :中华灵芝宝能同时抑制TOPOⅠ、Ⅱ活性 ,直接打断质粒和大分子DNA ,并能诱导K5 6 2细胞凋亡。

骆驼蓬种子提取物及其β咔保啉生物碱对DNA拓扑异构酶Ⅱ活性的抑制作用

目的探讨去氢骆驼蓬碱、骆驼蓬碱、骆驼蓬总碱及哈尔满碱(止咳药用植物)对DNA拓扑异构酶Ⅱ活性的抑制作用。方法从体外培养的Q3肝癌细胞中,提取分离DNA拓扑异构酶Ⅱ;以阿霉素为阳性对照,用琼脂糖凝胶电泳法检测药物对DNA拓扑异构酶Ⅱ的作用。结果骆驼蓬总碱、去氢骆驼蓬碱、骆驼蓬碱及哈尔满碱对DNA拓扑异构酶Ⅱ活性均有一定的抑制作用。结论对DNA拓扑异构酶Ⅱ活性的抑制作用是骆驼蓬总碱、去氢骆驼蓬碱、骆驼蓬碱等生物碱抗癌作用和细胞毒作用的机制之一。

以重组人DNA拓扑异构酶Ⅰ为靶位从天然产物及其衍生物中筛选抗肿瘤化合物

为了在体外以人DNA拓扑异构酶Ⅰ(hTopoⅠ)为靶位进行抗肿瘤化合物的快速筛选,首次使用毕赤酵母表达了hTopoⅠ。在微量反应体系中,测定了化合物抑制hTopoⅠ松驰活性的能力,并用MTT实验验证筛选到的hTopoⅠ抑制剂的抗肿瘤活性。从74个结构新颖的天然产物及人工合成的黄酮类衍生物中筛到6个hTopoⅠ抑制剂,有4个化合物抑制肿瘤细胞生长的能力较强。

Albaconol的抗肿瘤活性及对DNA拓扑异构酶Ⅱ的影响

目的 研究地花菌提取物Albaconol的体内外抗肿瘤活性及对DNA拓扑异构酶Ⅱ (TOPOⅡ )活性的影响。方法 以人白血病细胞株K5 6 2、人乳腺癌细胞株Bcap 37、人胃腺癌细胞株BGC 82 3和人非小细胞肺癌细胞株A5 4 9为模型 ,采用MTT法测试Albaconol对肿瘤细胞增殖的影响 ;以小鼠移植性肉瘤S180 和小鼠移植性肝癌H2 2 为模型 ,检测Al baconol静脉给药对肿瘤生长的影响 ;以 pBR32 2DNA为底物 ,采用琼脂糖凝胶电泳法测定Albaconol对肿瘤细胞DNATOPOⅡ活性的影响。结果 Albaconol对K5 6 2、Bcap 37、BGC 82 3、A5 4 9的半数抑制浓度 (IC50 )分别为 (2 4 2±1 77)、(1 88± 1 4 1)、(1 0 4± 0 6 4 )、(1 18± 1 10 )mg·L-1;Albaconol0 87、1 73、3 4 6mg·kg-1剂量组对S180 生长的抑制百分率 (抑瘤率 )分别为 2 8 2 %、4 3 2 %、4 7 4 % ;对H2 2 的抑瘤率分别为 15 6 %、2 2 4 %、37 8% ;Albaconol能明显影响DNATOPOⅡ的活性 ,表现为促进其介导的DNA解旋或断裂 ,并抑制其介导的DNA再连接反应。结论 Alba conol具有较强的体内、外抗肿瘤活性 ,DNATOPOⅡ是其抗肿瘤作用的细胞内靶点之一。

DNA拓扑异构酶与抗肿瘤

DNA拓扑异构酶是真核细胞和原核细胞中的基本酶,广泛分布于细胞核内,在复制、转录、翻译、重组及染色体单体分离等过程中控制、维持和修饰DNA拓扑结构。研究发现,拓扑异构酶在肿瘤组织中高表达,许多抗肿瘤药物的作用机制与抑制拓扑异构酶有关。

人DNA拓扑异构酶Ⅰ在毕赤酵母中的表达及发酵条件优化

为了在体外以人DNA拓扑异构酶Ⅰ (hTopoⅠ )为靶位进行抗肿瘤化合物的快速筛选 ,用RT PCR法从Hela细胞中克隆了hTopoⅠ基因ORF并在毕赤酵母中首次成功表达 ,表达产物可分泌到发酵上清 ,易于制备。蛋白酶A缺陷的重组酵母 (SMD hTopoI)分泌重组酶的能力比具有蛋白酶A活性的重组酵母 (X3 3 hTopoI和KM hTopoI)更高。通过发酵条件的优化 ,使用BMMY(pH 7 2 5) ,于 2 0℃ ,每隔 2 4h补加 0 5% (V V)的甲醇和 3 % (V V)的营养液 ,SMD hTopoⅠ诱导 72h后可表达最高的酶活力 (43 0 0 0u mL) ,发酵上清中hTopoⅠ可达 11mg L ,约占总蛋白的 10 %。SDS PAGE和Westernblot分析显示 ,表达的hTopoⅠ为 91kD蛋白 。

紫草素对DNA拓扑异构酶Ⅰ活性的抑制作用和诱导人白血病K562细胞的凋亡(英文)

目的 :研究紫草素对DNA拓扑异构酶I催化活性和K5 6 2白血病细胞凋亡的影响。方法 :从K5 6 2白血病细胞提取拓扑异构酶I,通过DNA解螺旋试验评价该药对拓扑异构酶I催化活性的抑制作用。用MTT法测定了该药对K5 6 2白血病细胞增殖的抑制作用。应用流式细胞术和琼脂糖凝胶电泳观察了该药对细胞凋亡的诱导作用。结果 :紫草素可显著抑制拓扑异构酶I的解螺旋活性 (IC50 =75 0 μmol/L)。该药能显著抑制K5 6 2的细胞增殖 ,并随剂量增大而抑制作用增强。紫草素 0 3～ 3μmol/L对K5 6 2细胞作用 2 4h后 ,其凋亡率为 2 0 %～ 70 %。琼脂糖凝胶电泳出现典型的DNA“lad der”。结论 :紫草素显著抑制拓扑异构酶I的催化活性 ,并能诱导K5 6

氯化两面针碱的抗肝癌活性及对DNA拓扑异构酶的影响

目的研究氯化两面针碱对肝癌HepG2裸小鼠移植瘤的抗肿瘤作用及对DNA拓扑异构酶(TOPO)活性的影响。方法建立人肝癌裸鼠皮下移植瘤模型,观察氯化两面针碱的肿瘤抑制作用。以pBR322DNA为底物,采用琼脂糖凝胶电泳检测氯化两面针碱对TOPO介导的pBR322 DNA解旋反应的影响,以及对pBR322 DNA是否具有直接断裂作用。结果氯化两面针碱2.5、5和10mg·kg-1剂量对肝癌HepG2的抑制率分别为12.06%、35.63%和60.91%,氯化两面针碱在6.25μmol·L-1时可完全抑制TopoI的催化活性,在25μmol·L-1时完全抑制TopoⅡ的催化活性。结论氯化两面针碱具有较为明显的抗肝癌活性,对DNA TOPO活性的抑制可能是其作用机制之一。

半边旗有效化合物对肺癌细胞DNA拓扑异构酶、TPK及c-myc基因的影响

研究半边旗有效化合物6F和A对肺癌细胞DNA拓扑异构酶(TOPO)Ⅰ和Ⅱ活性的影响;化合物A对细胞胞浆和胞膜酪氨酸蛋白激酶(TPK)活性及癌基因c -myc蛋白表达的影响。方法 :通过电泳法测定化合物6F和A对肺癌细胞DNA拓扑异构酶(TOPO)Ⅰ、Ⅱ活性的影响;用液体闪烁计数法测定化合物A对酪氨酸蛋白激酶(TPK)活性的影响;流式细胞仪间接荧光检测法测定化合物A对c -myc基因蛋白表达的影响。结果 :化合物6F和A可抑制细胞DNA拓扑异构酶Ⅰ、Ⅱ的活性,1 0mg/L的6F和A即开始抑制TOPOⅠ的活性,随浓度升高抑制作用增强 ;0 01mg/L的6F和10 0mg/L的A对TOPOⅡ的活性有强烈的抑制作用;化合物A对细胞中胞膜TPK活性有一定的抑制作用,但对胞浆TPK的活性几乎没有影响;化合物A对c -myc基因的蛋白表达有抑制作用。结论 :DNA拓扑异构酶是化合物6F和A抑制细胞生长的靶点之一,化合物A对TPK活性有一定的抑制作用,对c