灭幼脲Ⅰ号对致倦库蚊DNA代谢的影响

本文运用生化测定、放射性同位素标记及显微放射自显影等技术方法研究了灭幼脲Ⅰ号对致倦库蚊DNA代射的影响。结果表明,灭幼脲Ⅰ号抑制了致倦库蚊的DNA合成,降低DNA含量。

变应性鼻炎鼻分泌物中细胞内DNA和RNA代谢的观测

本文介绍变应性鼻炎鼻分泌物中细胞内DNA和RNA代谢变化的观测方法。以鼻分泌物中的多种炎性细胞为实验标本 ,经细胞贴壁、0 .1%吖啶橙染色标记 ,37℃孵育 15min ;采用激光扫描共聚焦显微镜对细胞内DNA、RNA形态和含量进行观测。结果表明 :本方法应用于变应性鼻炎鼻分泌物细胞内DNA、RNA代谢的研究是切实可行的。

ConA诱导的人脐血基质细胞上清对脐血细胞DNA合成代谢的影响

目的探讨脐血综合利用途径.方法收集脐血基质细胞培养1～5周的上清,观测其对脐血细胞DNA合成代谢的影响.结果ConA诱导的人脐血基质细胞上清对脐血细胞DNA合成随培养时间变化而表现出抑制和刺激作用.结论该上清中至少含有两种以上生长因子.

生长抑制因子家族基因编码蛋白在DNA修复和细胞凋亡中的作用

多种内源性、外源性基因毒性闲子均可造成DNA损伤，并由此启动DNA修复过程、乃至引起应激诱导的成熟前衰老（stress—induced premature senescence．SIPS）和凋产在DNA损伤之初，细胞试图修复损伤的DNA，但是当DNA损伤程度严重，范围广泛或已经影响厂DNA代谢时，细胞将产生一系列生物渊控信号触发不同机制，共同抑制细胞增殖行促进细胞发生凋亡，防止异常的遗传倩息传递给予代细胞，以维持基因组的稳定．近来发现，

脑胶质瘤和正常脑组织中MGMT、LRP和TopoⅡα的表达及其意义

【目的】探讨脑胶质瘤和正常脑组织中三种耐药酶O6-甲基鸟嘌呤-DNA-甲基转移酶(MGMT)、肺癌耐药相关蛋白(LRP)、拓扑异构酶Ⅱα(TopoⅡα)的表达及其意义。【方法】利用两步法免疫组织化学技术检测MGMT、LRP、TopoⅡα三种耐药酶在脑胶质瘤和正常脑组织的表达。【结果】三种耐药酶在正常脑组织中几乎不表达;在脑胶质瘤中表达强度与患者的性别、年龄和肿瘤的大小无关(P>0.01),但与肿瘤的WHO分级明显相关(P<0.01)。WHO分级越高,表达越强。【结论】胶质瘤的发生与三种耐药酶的表达改变有关;联合测定多种耐药酶的表达对判定肿瘤的恶性程度与制定化疗方案有参考价值;纠正耐药蛋白的表达有可能成为胶质瘤基因治疗的新策略。

FOXP3和TGF-β_1在复发性流产患者绒毛组织中的表达

目的:探讨叉头蛋白(FOXP3)和转化生长因子β1(TGF-β1)在复发性流产(RSA)患者绒毛组织中的表达,以及FOXP3与TGF-β1表达是否存在相关性。方法:对20例RSA患者(RSA组)和20例正常妊娠要求人工流产患者(对照组),收集手术中新鲜绒毛组织,采用免疫组化SP法检测绒毛组织中FOXP3和TGF-β1的表达情况。结果:两组患者绒毛组织中均有FOXP3和TGF-β1表达,且均主要表达于合体滋养细胞胞浆中,RSA组表达均低于对照组(均P<0.01),RSA组FOXP3和TGF-β1的表达不存在明显直线相关关系。结论:绒毛组织中FOXP3和TGF-β1表达下降可能与RSA的发生有关。

基于自组织理论的生命本质观

基于自组织理论从构成生命系统的物质、能量和信息三大要素的视角对生命的诞生和演化历程进行了整体解析，形成了多视角、多元化的生命本质观。

白血病Smad4表达的初步分析

目的:探讨细胞浆信息传递介质Smad4在白血病细胞中的定位及表达。方法:分离白血病患者骨髓单个核细胞,镜下鉴定白血病细胞数量达90%以上,应用免疫组织化学技术检测白血病细胞中Smad4蛋白表达。结果:50例白血病患者中,7例急性淋巴细胞白血病(ALL)患者、10例急性非淋巴细胞白血病(AML)患者及1例慢性粒细胞白血病(CML)患者白血病细胞中无Smad4表达,其余患者白血病细胞中均表达Smad4。结论:Smad4蛋白主要表达于细胞核中,部分表达于胞浆中,在部分白血病细胞中无表达,Smad4基因或功能的改变可能与人类AML的发生有关。

膀胱癌中CHK1和RAD51的表达及临床意义

目的探讨细胞周期检测点激酶1(cell cycle checkpoint kinase 1,CHK1)及DNA双链断裂修复蛋白RAD51在膀胱癌中的表达及意义。方法采用免疫组织化学法检测104例膀胱癌组织和40例癌旁正常膀胱黏膜组织中CHK1及RAD51蛋白表达,并分析其与膀胱癌临床病理特征的关系。结果膀胱癌组织中CHK1及RAD51蛋白表达均高于癌旁正常膀胱黏膜组织(均P<0.05)。CHK1蛋白表达在膀胱癌的病理组织学分级、病理分期方面差异均有统计学意义(均P<0.05),而在性别、年龄、肿瘤直径、单发/多发以及初发/复发方面差异均无统计学意义(均P>0.05)。RAD51蛋白表达在膀胱癌的病理组织学分级方面差异有统计学意义(P<0.05),在病理分期、性别、年龄、肿瘤直径、单发/多发以及初发/复发方面差异均无统计学意义(均P>0.05)。膀胱癌组织中CHK1和RAD51蛋白表达呈正相关(r=0.223,P<0.05)。CHK1蛋白阴性表达组预后好于阳性表达组(P<0.05),而RAD51蛋白表达阴性组和阳性组预后比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 CHK1和RAD51蛋白在膀胱癌组织中呈高表达,二者在膀胱癌发生、发展中起重要作用,并与膀胱癌的病理组织学分级及预后密切相关。

胃癌及胃癌前病变中hTERT和P73蛋白的表达

目的:探讨hTERT、P73蛋白表达在胃癌的发生发展中的作用。方法:应用免疫组化S-P法检测40例胃癌、25例不典型增生、20例肠上皮化生及20例萎缩性胃炎中hTERT、P73蛋白的表达情况。结果:正常胃黏膜中hTERT、P73蛋白无表达;hTERT和P73蛋白在胃癌、不典型增生、肠上皮化生、萎缩性胃炎中分别有30、7、5、2例和27、5、3、1例阳性表达,胃癌组的表达显著高于不典型增生、肠上皮化生、萎缩性胃炎。结论:hTERT、P73蛋白在胃癌的发生、发展中可能起重要作用。

Wortmannin对视网膜缺血再灌注后HIF-1α表达的影响

目的:探讨磷酰肌醇-3激酶(phosphatidylinositol-3 kinase,PI3K)途径在大鼠视网膜缺血再灌注后对低氧诱导因子(HIF-1α)表达的影响。方法:将磷酰肌醇-3激酶(PI3K)特异抑制剂Wortmannin(WT)注入大鼠玻璃体内,抑制PI3K活性为A组,玻璃体内注射等量林格液作为B组,空白对照组为C组,采用前房灌注生理盐水升高大鼠眼压到110mm Hg(1 kPa=7.5 mm Hg)持续1 h的方法制作实验性视网膜缺血再灌注损伤模型,于再灌注后0、2、6、8、12、24、48 h取材,行免疫组织化学法染色观察HIF-1α在视网膜细胞的阳性表达;并应用RT-PCR来检测HIF-1αmRNA的表达。结果:视网膜缺血再灌注6、8、12、24、48 h,视网膜神经节细胞层及内核层细胞出现HIF-1α阳性表达且表达逐渐增加,12 h达到高峰,然后逐渐降低,预先玻璃体内注射PI-3K特异抑制剂Wortmannin(WT)的大鼠视网膜HIF-1α表达明显减弱,亦在12 h达到高峰,然后逐渐降低。结论:缺血再灌注后大鼠视网膜HIF-1α的表达是经过PI3K途径来实现,阻断PI3K途径,可以明显减少HIF-1α的表达,但从实验结果来看PI3K途径被阻断后并没有完全阻断HIF-1α的表达,由此猜测HIF-1α的表达可能存在多种途径。

野生型p16基因对人瘢痕疙瘩成纤维细胞生长及代谢影响的实验研究

目的 探讨野生型 p16基因对人瘢痕疙瘩成纤维细胞 (keloidfibroblasts,KFb)生长增殖及DNA合成代谢的影响。 方法 构建含p16cDNA片段的真核表达载体 pcDNA3 p16 ,采用脂质体介导的基因转染法 ,将其导入体外培养的KFb中 ,并用G4 18筛选阳性克隆。随后对已转染及未转染的KFb进行免疫细胞化学染色 ,观察p16蛋白的表达 ,并通过绘制细胞生长曲线及采用氚标记胸腺嘧啶脱氧核苷 (3 H TdR)掺入法 ,比较转染前后细胞在生长增殖及DNA合成代谢方面的变化。结果 经酶切鉴定证实 ,pcDNA3 p16构建成功。已转染的KFb经G4 18筛选 ,出现阳性克隆 ,并有 p16蛋白表达 ;与正常KFb比较 ,其生长增殖速度明显减缓 ,DNA合成代谢能力明显减弱 (P <0 .0 5 )。 结论 p16基因对KFb的生长增殖及DNA合成代谢有明显的抑制作用。

金属硫蛋白和DNA修复酶在胃癌、结直肠癌中表达的临床意义

目的观察金属硫蛋白（MT）和DNA修复酶（MGMT）在胃、结直肠癌中的表达临床意义和它们的相关性。方法采用S—P免疫组织化学方法，检测了143例胃、结直肠癌中MT和MGMT的表达状况。结果MT在胃和结直肠癌中的总阳性率为58．74％（84／143），在胃腺癌中阳性率为48．48％（32／66）；在结直肠癌中阳性率为67．53％（52／77）。MGMT在胃和结直肠癌中的总阳性率为51．05％（73／143），在胃癌和结直肠癌中阳性率分别为43．94％（29／66）和57．14％（44／77）。且MT与MGMT在胃癌和结直肠癌中呈正相关（r=0．35，0．23，P〈0．05）。结论MT和MGMT在消化管癌中有较高表达，检测癌瘤中MT和MGMT对制守化疗方案有指导意义。

胃癌细胞周期G1/S转换期基因表达谱的分析

目的检测胃癌细胞在DNA合成前期/DNA合成期(G1/S)交界点基因表达谱的变化,探讨胃癌细胞由G1期进入S期相关基因的调控作用。方法应用胸腺嘧啶核苷(thymidine)-偌考达唑(nocodazole)及双胸腺嘧啶核苷(doublethymidine)法分别阻断胃癌细胞株(MKN45)于DNA合成后期/有丝分裂期(G2/M)及G1/S交接点释放后收集标本,应用cDNA微阵列基因芯片检测细胞周期中G1早期、G1末期、S早期及S晚期的基因表达谱,专业软件进行聚类分析。结果检测到4个时间点均可信的2001个基因,其中959个基因出现上调或下调。147个基因在G1末期出现上调,其功能涉及DNA代谢、转录与翻译、翻译后修饰、泛素化、信号转导等,这些过程在不同环节上影响细胞周期。结论多基因参与胃癌细胞周期G1期至S期的转换,且为其转换所必需,部分参与以上过程的基因与胃癌过度增殖有关。

更昔洛韦眼用凝胶联合干扰素治疗单纯疱疹病毒性角膜炎疗效观察

单纯疱疹病毒性角膜炎（HRK）是目前最为严重的常见角膜性疾病，其发患者群不断增加，并呈逐年上升的趋势。目前对单纯疱疹病毒性角膜炎的治疗主要以化学合成的核苷类抗病毒药物为主，通过干扰病毒DNA代谢达到抑制病毒复制目的，但往往疗程长且效果多不理想。笔者采用更昔洛韦眼用凝胶联合干扰素的治疗HRK，效果显著，现报告如下。

KRAS、FCGR、CYP3A5与CYP1A1检测对转移性结直肠癌化学靶向药物临床疗效预测作用的研究

目的研究鼠类肉瘤病毒癌基因同源基因（KRAS）、FCG受体（FCGR）、细胞色素P450—3A5（CYP3A5）、CYP1A1基因与转移性结直肠癌（mCRC）患者化疗疗效的动态关系，探讨其对临床疗效的预测作用。方法收集采用西妥昔单抗（C225）联合卡培他滨联合奥沙利铂（CapeOx）化疗，且治疗前实施KRAS基因检测所证实的KRAS野生型结直肠癌患者12例，对每例病例实施FCGR、CYP3A5、CYP1A1基因的突变检测，运用免疫组织化学染色法（sP）检测第10号染色体缺失的磷酸酶张力蛋白同源物基因（PTEN）在结直肠癌组织与对应的癌旁组织中的表达情况，分析FCGR、CYF3A5、CYP1A1突变和PTEN表达与生存期的关系。结果12例KRAS野生型患者中，检测到FCGR的突变率为16．7％，CYPA5的突变率为25％，CYPIAI的突变率为16．7％。PTEN主要在细胞核内表达，呈黄褐色；在癌旁组织内完全表达，表达率为100％；在病灶组织内的表达率为41．7％；PTEN在病灶组织中表达降低或缺失。KRAS、FCGR、CYP3A5、CYP1A1均为野生型的患者对C225联合CapeOx化疗的有效（CR＋PR）反应率为80％，但存在FCGR、CYP3A5、CYP1A1突变患者的有效（CR＋PR）反应率分别为0、33．6％以及50．0％（P〈0．05）。PTEN表达阳性的患者有效（CR＋PR）反应率为50％，明显高于PTEN表达阴性的患者（有效反应率37．5％，P〈0．05）。KRA^FCGR／CYP3AS／CYP1A1野生型患者无进展生存期、总生存期分别为15．56、25．03个月，明显大于FCGR、CYP3A5、CYP1A1突变患者无进展生存期、总生存期的8．12、19．21个月（均P〈0．05）。PTEN阳性表达患者无进展生存期、总生存期分别为9．13、24．25个月，明显大于PTEN阴性表达患者无进展生存期、总生存期的7．87、18．74个月（均P〈0．05）。结论FCGR、CYP3A5、CYP1A1突变和PTEN表达的缺失明显影响C225联合CapeOx化疗的临床治疗效果及生存期，可用于mCRC临床疗效及预后的预测。

结肠癌中P73和Survivin的表达及临床意义

目的 探讨P73和Survivin在结肠癌中的表达及临床意义.方法 应用免疫组化方法检测46例结肠癌组织、12例正常结肠黏膜组织中P73及Survivin的表达.结果 结肠癌与正常结肠黏膜组织中P73阳性表达率分别为67.4%和8.3%,二者阳性率表达比较差异有统计学意义（χ2=13.42,P＜0.01）;淋巴结转移灶组的P73阳性率明显高于结肠癌原发灶组（P＜0.01）,P73表达与结肠癌的Dukes分期有关（χ2=8.01,P＜0.01）.P73与Survivin在结肠癌中的表达呈正相关（rs=0.487,P＜0.01）.结论 P73与Survivin在结肠癌中的表达密切相关,其参与了结肠癌的发生及发展,可作为判断其转移及预后的参考指标.

P13K／Akt—Nrf2信号通路调节大鼠气道上皮细胞γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶表达的研究

目的观察香烟烟雾提取物（CSE）通过磷酯酰肌醇-3-激酶（PBK）／Akt—Nrf2（Nuclearfactor—E2relatedfactor）信号通路对大鼠气道上皮细胞γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶（γ-GCS）的影响。方法用浓度为10％的CSE对体外原代培养的大鼠气道上皮细胞进行不同时间处理及使用P13K特异抑制剂LY294002进行干预。观察CSE在不同的时间及使用LY294002干预后对Nrt2的核转位及γ-GCS的影响，用细胞免疫化学、流式术、免疫荧光及Westernblot方法检测Nrf2、p-Akt及γ-GCS的表达水平；用逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）方法检测γ-GCSmRNA的表达水平；检测还原型谷胱甘肽（GSH）的含量及γ-GCS的活性。结果暴露CSE后1h，GSH含量明显低于对照组，在暴露CSE后3h和6h，GSH含量明显增高。Nrf2蛋白质在对照组主要表达在胞浆，其蛋白质表达增强，而在CSE1h、CSE3h和CSE6h组主要在胞核中表达，其蛋白质表达增强。p-Akt蛋白质在暴露CSE后1h增强，3h最强，6h减弱。p-Akt阳性细胞百分比变化趋势与其蛋白质变化趋势相同。γ—GCSmRNA和蛋白质在CSE1h、CSE3h、CSE6h组表达逐渐增强。γ—GCS活性在CSE1h、CSE3h、CSE6h组逐渐增强。预先使用LY292002，p-Akt阳性细胞百分比及蛋白质表达明显弱于CSE3h组，Nrf2胞浆蛋白质表达增强，胞核表达减弱，吖-GCSmRNA、蛋白质和活性及GSH含量均明显低于CSE3h组。相关性分析显示Nri2与γ-GCS、γ-GCS活性呈正相关（r=0．81，0．77，P〈0．05），p-AM与γ-GCS、γ-GCS活性、GSH及Nrf2呈正相关（r=0．373，0．44，0．63，0．56，P〈0．05）。结论P13K／Akt信号通路可能参与Nrf2核转位及其对抗氧化基因γ-GCS的调控。

YB-1蛋白在非小细胞肺癌中的表达及意义

目的:探讨YB-1蛋白在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达及其临床意义。方法:采用免疫组织化学法检测49例NSCLC患者肺癌组织标本中YB-1蛋白的表达情况并与癌旁组织比较。结果:49例NSCLC中YB-1蛋白在细胞核中的阳性率为49%,且与病理类型、临床分期及有无淋巴结转移呈相关性,而与分化程度、性别及年龄无相关性;YB-1蛋白在正常肺组织中无表达。结论:YB-1蛋白的检测有利于对NSCLC患者的诊断、局部淋巴结转移和预后情况作出客观判断。

SMAD2／3蛋白在沙鼠脑缺血再灌注及氟桂利嗪干预后脑内表达的研究

目的研究smad2／3在沙鼠脑缺血再灌注脑内表达及氟桂利嗪干预后对其表达的影响。方法35只沙鼠随机分假手术组、缺血再灌注组和氟桂利嗪治疗组3组，采用夹闭双侧颈总动脉制作沙鼠脑缺血再灌注模型，于缺血10min再灌注1d、3d、7d各时间点处死动物，用免疫组化方法检测各组沙鼠脑内smad2／3的表达情况。结果假手术组沙鼠脑内smad2／3弱阳性表达，而缺血再灌注1d、3d、7d后沙鼠脑内呈阳性或强阳性表达，两者比较差异有统计学意义（P〈0．01）；氟桂利嗪治疗组smad2／3的表达低于缺血再灌注组，2组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。结论沙鼠脑内有smad2／3表达，脑缺血再灌注后，脑内smad2／3表达上调；氟桂利嗪干预后，其表达下调。