DNA分子体外重组实验教学的两种优选方案

DNA分子体外重组技术是基因工程的核心技术之一。国内许多高校在开设这一技术的实验教学中都采用了TA克隆法这一比较落后的实验方法。为了使学生更好地掌握DNA分子体外重组技术,增强技术的实用性,有必要在实验教学内容上作出调整。姊妹PCR克隆法和平末端克隆法是2种简单、经济、重复性好的克隆方法,其中姊妹PCR克隆法不需对目的基因进行酶切处理,即能得到具有各种黏性末端的DNA分子,可直接定向克隆到经相应内切酶消化的载体中。这2种方法不仅能够满足实验教学的需要,也适用于科研工作中各类载体的构建。

应用体外DNA同源重组技术构建pcDNA3.1-NGF和pcDNA3.1-TrkA

目的:利用体外DNA同源重组的方法分别构建含神经生长因子(NGF)和神经生长因子受体(TrkA)基因的真核表达载体。方法:在引物5'加上一段与载体克隆位点两端碱基序列相同的序列,PCR扩增目的基因NGF和TrkA,线性载体片段和目的基因片段经T4 DNA聚合酶的外切产生互补的单链DNA,然后37℃退火实现体外同源重组,转化并鉴定;将重组质粒转染293A细胞,免疫印迹鉴定目的基因的表达情况。结果:成功构建真核载体pcDNA3.1-NGF和pcDNA3.1-TrkA,转染细胞后的表达产物相对分子质量分别是31×103和140×103。结论:与常规重组技术相比,体外DNA同源重组技术是一种高效的DNA重组方法,且不需考虑目的片段的限制性酶切位点。

外源DNA直接导入(DIED)法的大豆分子育种成效

本文以高产优质高蛋白大豆黑生 1 0 1品种的育成为例 ,介绍了我国创立的花粉管通道转移总 DNA的技术 ,并就该技术与现有体外重组 DNA技术进行对比 。

克隆新基因cDNA全长的策略和方法

克隆新基因及获得其 c DNA全长是现代生命科学中研究基因功能的重要前提。随着分子生物学技术的迅速发展 ,克隆新基因的技术也不断得到发展和完善 ,尤其是生物技术与信息技术的结合和应用 ,计算机克隆基因开始兴起。本文介绍几种近年常用的克隆新基因 c DNA全长的方法。

人白介素6cDNA的克隆及在CHO细胞中的表达

人白细胞介素6(IL-6)是一种关键的多功能的细胞因子,它对造血、免疫和急性期应答起重要作用。重组IL-6在辐射损伤,血小板减少、肝损伤、肿瘤及艾滋病的研究与治疗中具有重要意义和潜在的应用前景。本研究通过引物设计、转译优化及DNA体外重组等技术构建了pSV-IL-6重组质粒,在大肠杆菌中大量扩增、纯化后,利用磷酸钙共沉淀法转染中国仓鼠卵巢细胞二氢叶酸还原酶缺陷株(CHO-dhfr^+),经选择培养基培养2周后,挑出CHO-dhfr^+细胞克隆。

四种常见的蛋白质标签研究进展及展望

随着蛋白质融合技术的蓬勃发展,蛋白标签(proteintag)技术迅速兴起,其利用DNA体外重组技术(DNA in vitro recombination Technology),与目的蛋白融合,共同表达的一种多肽或者蛋白质。随着技术的不断发展,研究人员相继开发出了诸如TrxHis、Flag、MBP、GST等具有各种不同功能的蛋白标签,其对于目的蛋白的表达、检测、示踪和纯化等有着广泛的应用前景。本文将介绍TrxHis、Flag、GST、GFP四种常见蛋白质标签,并进行一定的总结与展望。

第一届中国国际口腔医学研讨会在上海召开

由中华口腔医学会、国际牙科研究协会及上海第二医科大学主办的第一届中国国际口腔医学研讨会,于1997年2月27日～3月1日在上海召开。国际牙科研究协会主席出席会议并讲话,中华口腔医学会副会长、上海第二医科大学口腔医学院名誉院长邱蔚六教授担任大会主席。来自美、德。