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人乳头瘤病毒11型的DNA分子克隆
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作者 孙汶生 曹英林 +2 位作者 张利宁 李辉 高天祥 《首都医学院学报》 1989年第4期252-255,共4页
以E coli C300为受体菌,利用人乳头瘤病毒11型DNA与pBR322的重组质粒(pBR322-HPV11DNA),成功地进行了HPV11DNA的转化,经筛选获得61株重组子,随机对15株转化子以碱变性法及清亮裂解法抽提了pBR322-HPV11DNA的重组质粒,纯化后经BamHI酶切... 以E coli C300为受体菌,利用人乳头瘤病毒11型DNA与pBR322的重组质粒(pBR322-HPV11DNA),成功地进行了HPV11DNA的转化,经筛选获得61株重组子,随机对15株转化子以碱变性法及清亮裂解法抽提了pBR322-HPV11DNA的重组质粒,纯化后经BamHI酶切及琼脂糖凝胶电泳,以λDNA/HindⅢ作参考分子量测定,初步结果证实存在有分子量为5.5×10~6(约8.1kb)的HPV11DNA。这为HPV11DNA的分子扩增,基因探针的制备及HPV11型量鳞癌的研究提供了方便。 展开更多
关键词 人乳头瘤病毒 dna分子克隆 转化
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外切核酸酶Ⅲ介导的DNA分子克隆 被引量:1
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作者 谢昌传 梁耀极 洪丽欣 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期106-113,共8页
DNA克隆技术,作为最基本的现代分子生物学实验技术之一,已经成为生物医学研究领域的重要研究手段。传统的分子克隆方法需要经过限制性内切酶酶切和DNA连接酶连接的步骤,是否存在合适的酶切位点和DNA连接酶的效率成为影响克隆的重要限制... DNA克隆技术,作为最基本的现代分子生物学实验技术之一,已经成为生物医学研究领域的重要研究手段。传统的分子克隆方法需要经过限制性内切酶酶切和DNA连接酶连接的步骤,是否存在合适的酶切位点和DNA连接酶的效率成为影响克隆的重要限制因素。本文描述了一种由外切核酸酶Ⅲ介导的,以3'-5'外切核酸酶活性和细菌细胞内DNA修复机制为理论基础的DNA分子克隆方法,称为不依赖连接酶的分子克隆(ligation-independent cloning,LIC);证明了该方法的高效性和可靠性,并进一步对酶的用量、反应温度、反应时间、片段载体比例和量等多个参数进行了优化,建立了一种快速、简便和高效的DNA克隆方法。 展开更多
关键词 外切核酸酶Ⅲ 3'-5'核酸外切酶活性 dna分子克隆
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天麻DNA分子的克隆与鉴定及其生物信息学分析 被引量:3
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作者 陶钧 唐忠球 +6 位作者 王燕 刘兴旺 李晓文 李巍青 张建云 刘瑞兴 谭碧君 《长沙理工大学学报(自然科学版)》 CAS 2008年第1期98-103,共6页
运用随机扩增多态性DNA(RAPD)技术测定天麻DNA指纹图谱,从中选择需要的特异DNA片段.经过DNA回收、克隆与鉴定,获得目的DNA阳性克隆,通过DNA测序和生物信息学分析确定目的DNA的新颖性及其所含的生物信息.应用PCR技术研究了该DNA序列在天... 运用随机扩增多态性DNA(RAPD)技术测定天麻DNA指纹图谱,从中选择需要的特异DNA片段.经过DNA回收、克隆与鉴定,获得目的DNA阳性克隆,通过DNA测序和生物信息学分析确定目的DNA的新颖性及其所含的生物信息.应用PCR技术研究了该DNA序列在天麻种群中的分布.结果表明,该DNA序列是新发现的,而且含有丰富的生物学信息,值得进一步研究.本研究成果为天麻基因组DNA的开发与利用提供了科学依据,可应用于天麻种群的遗传分类,对其他经济植物包括药用植物的相关研究具有借鉴意义. 展开更多
关键词 生物信息学分析 dna分子克隆 dna指纹图谱 天麻 特异dna序列
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基于重组PCR法构建人骨保护素N端的酵母表达载体 被引量:1
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作者 李晓霞 朱志峰 +3 位作者 王宝利 戴芳 郭刚 张镜宇 《天津医药》 CAS 北大核心 2006年第11期753-755,共3页
目的:构建骨保护素(OPG)N端片段的酵母表达载体。方法:OPGN端D1-D4域仅由2个外显子编码。以人基因组DNA为模板,PCR分别扩增外显子2和外显子3,并使外显子2的3′引物和外显子3的5′引物具有相互重叠的一段序列。以2种PCR产物混合物为模板... 目的:构建骨保护素(OPG)N端片段的酵母表达载体。方法:OPGN端D1-D4域仅由2个外显子编码。以人基因组DNA为模板,PCR分别扩增外显子2和外显子3,并使外显子2的3′引物和外显子3的5′引物具有相互重叠的一段序列。以2种PCR产物混合物为模板,采用重组PCR扩增OPGN端编码序列,拟插入酵母分泌型表达载体pPIC9K。为使未来分泌表达产物具有完全正确的N末端,再次采用重组PCR策略,将pPIC9K信号肽裂解位点前的一段序列(含单一限制酶位点BamHⅠ)与OPGN端编码序列拼接在一起,从BamHⅠ和EcoRⅠ位点插入pPIC9K。结果:得到了OPGN端酵母表达载体,测序证实插入序列正确。结论:重组载体的获得为基因工程研制具有生物活性的OPGN端片段奠定了基础。 展开更多
关键词 破骨细胞 成骨细胞 聚合酶链反应 克隆 分子dna 重组
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Construction of the Plasmid Reference Molecule for Detection of Transgenic Soybean MON89788 被引量:4
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作者 李飞武 邵改革 +7 位作者 邢珍娟 李葱葱 夏蔚 张明 Fei-wu Gai-ge Zhen-juan Cong-cong 《Agricultural Science & Technology》 CAS 2010年第5期55-58,86,共5页
[Objective] The aim was to construct a plasmid reference molecule (PRM) for detection of transgenic soybean MON89788. [Method] the lectin gene sequence,3'-junction and 5'-junction sequence between host plant D... [Objective] The aim was to construct a plasmid reference molecule (PRM) for detection of transgenic soybean MON89788. [Method] the lectin gene sequence,3'-junction and 5'-junction sequence between host plant DNA integrated DNA of MON89788 soybean were amplified independently,and the three fragments were cloned into the cloning vector pMD18-T in order through molecular manipulation method to construct pMD-LM3M5,the applicability of the constructed novel PRM was tested. [Result] Sequencing confirmation result showed that the PRM was 3 700 bp in length,containing 1 029 bp of recombined DNA fragment. The limits of qualitative detection of the PRM were 10 copies. [Conclusion] The PRM constructed in this study was suitable for the identification of MON89788 event. 展开更多
关键词 Genetically modified organisms Plasmid reference molecule MON89788 soybean Event-specific detection
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Molecular Cloning of Diapause Hormone Analog in Helicoverpa assulta
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作者 赵静雅 张天翼 +1 位作者 徐卫华 康乐 《Zoological Research》 CAS CSCD 北大核心 2002年第5期367-371,共5页
Diapause hormone (DH) is a neurohormone which is secreted from suboesophageal ganglion and responsible for induction of embryonic diapause in Bombyx mori.Here,using bioassay,we present evidence that Has-SGNPⅠ,which c... Diapause hormone (DH) is a neurohormone which is secreted from suboesophageal ganglion and responsible for induction of embryonic diapause in Bombyx mori.Here,using bioassay,we present evidence that Has-SGNPⅠ,which clearly exhibited diapause egg inducing activity as does Bom-DH,is likely to be DH.We reported the molecular characterization of the Helicoverpa assulta diapause hormone analog by polymerase chain reaction.A 665?bp fragment containing the entire DH-like gene was isolated and characterized.DH-like gene comprised two exons interspersed by a single intron,and the consensus sequence for splicing junction is identified at the exon/intron boundary.The result shows that DH-like gene is localized in the genome of Helicoverpa assulta. 展开更多
关键词 Helicoverpa assulta Diapause hormone Gene cloning dna sequencing
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Cloning of Omp1 Gene from Chlamydia trachomatis F Genotype
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作者 齐蔓莉 刘全中 +2 位作者 缴稳苓 田敬群 陈锦英 《Chinese Journal of Sexually Transmitted Infections》 2002年第2期25-28,共4页
Objective: To directionally clone the ompl gene fromChlamydia trachomatis (Ct) F genotype onto a plasmid vectorfor constructing a rudimentary DNA vaccine. Methods: The complete ompl gene from genomic DNA of CtF genoty... Objective: To directionally clone the ompl gene fromChlamydia trachomatis (Ct) F genotype onto a plasmid vectorfor constructing a rudimentary DNA vaccine. Methods: The complete ompl gene from genomic DNA of CtF genotype wild species was amplified with primers designedby computer. The recombinant gene was obtained byrestriction enzyme cutting, linking the gene with the plasmidvector in vitro, transforming the recombinant gene intobacteria, and extracting the DNA from the bacteria. Results: DNA extracted from the bacteria was composed ofthe ompl gene and plasmid, which is identified by threemethods of singular restrictive enzyme cutting, doublerestrictive enzyme cutting and PCR. Conclusion: Cloning of the ompl gene from the Ct Fgenotype means that a rudimentary DNA vaccine wassuccessfully constructed. 展开更多
关键词 Chlamydia trachomatis F genotype main outer membrane protein omp1 gene CLONE dna vaccine
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