用于蔬菜残留耐药基因检测的DNA制备技术

目的建立用于蔬菜残留耐药基因(antibiotic resistance genes,ARGs)检测的DNA制备技术。方法以樱桃萝卜、香菜为研究对象,对商业试剂盒Power Water?DNA Isolation kit和Power Plant?Pro DNA Isolation kit中的具体步骤进行改良,不经细菌分离培养等过程,提取其可食用部分残留微生物基因组DNA。利用Nano Drop?微量紫外-可见光分光光度计,检测DNA的纯度和产量,并以DNA为模板,对16S rRNA、ARGs(sulⅠ、tet M、mef)进行PCR扩增,以验证本研究建立的DNA制备方法对于后续ARGs检测抑制物的去除情况。结果本研究所制备的DNA(n=5),OD260/OD280值均在1.7~1.9之间,浓度均为10ng/μL以上。经电泳检测后,目的基因的PCR扩增条带清晰,且经过序列分析比对证实,目的基因与以往文献报道的同源性均达到97%以上。结论本研究建立的DNA制备方法,无需细菌分离培养,简单、省时,所获得的DNA纯净,为后续蔬菜残留ARGs检测等研究提供技术支持。