大鼠大脑中动脉阻塞后DNA单链断裂损伤的实验研究

目的观察大鼠永久性大脑中动脉阻塞(pMCAO)后,相应区域DNA断裂损伤情况,探讨DNA单链损伤在pMCAO所致脑组织损伤中的意义。方法采用常规HE组织染色明确大鼠pMCAO模型成功与否及其损伤范围,采用DNA聚合酶-1Klenow片段原位杂交方法检测pMCAO不同时间点DNA单链断裂损伤情况。结果损伤区域单链DNA断裂的Klenow阳性细胞在pMCAO后6h即有表达(P<0.01),在24h时达到高峰(P<0.01),72h时有所下降(P<0.01)。结论单链DNA断裂损伤在pMCAO后6h即可出现,并逐渐积累,成为缺血半暗带内细胞损伤发展过程的重要环节,并可能预示半暗带损伤范围的不断扩大。

荧光探针氨氯吡咪对DNA双链中单链断裂损伤的识别研究

将氨氯吡咪选择性地嵌入ds-DNA中单链断裂损伤所形成的缺口位点,并通过氢键与缺口位点处的碱基结合从而导致氨氯吡咪荧光猝灭,据此建立了荧光检测DNA单链断裂损伤的新方法.氨氯吡咪荧光的猝灭程度与缺口位点处碱基类型相关,当缺口位点处的碱基为T碱基时,荧光猝灭程度最大.荧光滴定实验表明氨氯吡咪和存在缺口位点的ds-DNA是1∶1结合,结合常数为105mol/L数量级.在正常ds-DNA和存在单链断裂损伤的ds-DNA的溶液中加入氨氯吡咪,在紫外灯照射下通过目视法即可分辨出二者荧光强度的不同.