利用逆转录聚合酶链反应及DNA印迹杂交技术检测乳腺癌腋窝淋巴结微转移

目的 评价检测原发性乳腺癌腋窝淋巴结微转移的方法。方法 用逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)和Southern杂交方法 ,检测腋窝淋巴结中CK 19基因表达。同时与免疫组织化学 (组化 )方法比较其检测敏感性。结果 RT PCR、Southern杂交及免疫组化方法的检测敏感性分别为 1∶5× 10 5、1∶10 6和 1∶5× 10 4 。 5 2例患者的 170枚常规病理检查阴性淋巴结检出微转移 35枚 ,占 2 0 6 %。其中 17例常规病理检查有转移病例的 33枚阴性淋巴结中 ,查出 2 1枚CK 19表达阳性 ;35例淋巴结常规病理检查无转移中有 11例查出微转移 (31 4% )。微转移与其他临床指标无相关性。结论 以CK 19为标志物 ,RT PCR并Southern杂交方法检测原发性乳腺癌淋巴结微转移灵敏、特异 ,可作为临床判断预后的参考指标。

琼脂糖凝胶直接杂交法

DNA印迹(Southern blot)杂交法是研究DNA分子结构,变异及其组成的一种分子生物学技术。自1975年闻世以来,在分子生物学,遗传学及分子病毒学等研究领域得到广泛应用,对这些学科的发展起了重要作用。由于该技术均需要首先将电泳后已变性的DNA从琼脂糖凝胶转移至支持膜上,因此,实验结果的好坏很大程度取决于吸印的效果。

人VEGF基因的克隆及卵巢癌中VEGF基因重排的检测

目的 探讨 VEGF高表达的卵巢癌中 VEGF基因结构有无异常 .方法 用 RT- PCR方法自胎盘中克隆 VEGFc DNA以作为杂交探针 ;收集临床卵巢癌手术切除标本 ,以正常卵巢组织为对照 ,从中提取基因组 DNA并进行 Southern印迹杂交 .结果 序列分析表明所获得基因正确 ,Southernblot分析 10 / 19呈现出大于 2 3 kb片段和 4.3 kb片段的异常片段 ,而不同于正常对照组织的大于 30 kb,6 .5 kb和 2 .5 kb.

红色毛癣菌的基因分型研究

目的探讨探针与DNA印迹杂交法对红色毛癣菌的基因分型并分析其基因型与来源地区的相关性。方法用溴化十六烷基三甲铵(CTAB)法提取DNA,以皮肤癣菌的特异性引物NS5犤5'-AACTTAAAGGAATTGACGGAAG-3'犦与ITS4犤5'-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3'犦为引物,以红色毛癣菌的标准菌株为模板,用PCR法扩增出其rDNA部分18S区、ITSⅠ区、5.8S区和ITSⅡ区为探针,用随机引物法将探针标记32P,用EcoRⅠ酶切基因组DNA,采用DNA印迹的标准流程将酶切的基因组DNA与探针杂交;显示的不同带型,以此作为红色毛癣菌基因分型的依据。结果所试49株红色毛癣菌(南京21株、大连26株、北京2株)分为20型(A-T型),其中A-C型占48.98%。南京株绝大多数为3条带,大连株大部分为4条带。结论用ITS区域探针与DNA印迹杂交法对红色毛癣菌基因组分型敏感性强、分辨力高;南京与大连两地区红色毛癣菌DNA分型具有明显差异。DNA分型对红色毛癣菌病的流行病学、临床疗效的判定以及指导用药均具有重要价值。