甘蓝rDNA及C_0t-1 DNA荧光原位杂交及其核型分析

为了探索一种高效可靠的芸薹属植物核型分析方法,本文以甘蓝品种黑叶小平头为实验材料,从其基因组DNA中分离出C0t-1 DNA并用生物素标记作探针,对有丝分裂中期相染色体进行原位杂交,每对染色体上均显示出了特定的荧光原位杂交带型.将植物25S和5S rDNA分别用地高辛和生物素标记作探针,单色荧光原位杂交结果显示黑叶小平头2对染色体具有25S rDNA基因座,1对染色体具有5S rDNA基因座.生物素标记的C0t-1 DNA与地高辛标记的25S rDNA等量混合作探针,双色荧光原位杂交证实了C0t-1 DNA与25S rDNA二者具有一致的染色体位置特征,表明基于rDNA及C0t-1 DNA荧光原位杂交的核型分析技术,优于目前普遍采用的只基于rDNA荧光原位杂交的核型分析方法.结合已报道的rDNA染色体定位结果,及C0t-1 DNA荧光原位杂交带型与染色体形态,更准确地构建了甘蓝的核型.

原位杂交法检测非甲─非庚型肝炎患者肝组积中新型肝炎病毒DNA

目的证实在非甲-非庚型病毒性肝炎患者肝组织中一种新型肝炎病毒（transfusion－transmittedvirus，TTV）的存在．方法采用地高辛素标记TTVDNA探针以原位杂交技术对51例血清学病毒标记非甲-非戊型、免疫组化检测肝组织中HGVNSS阴性的病毒性肝炎患者石蜡包埋肝组织进行了检测．结果各型病毒性肝炎肝组织中TTV基因的总检出率为27．5％，其中急性轻型肝炎的检出率为30．8％（4／13），急性重型肝炎（1／8，12．5％），亚急性重型肝炎（3／7，42．9％），慢性肝炎（2／6，33．3％），活动性肝硬变（2／9，22．2％），慢性重型肝炎（1／4，25％），原发性肝癌（1／4，25％）TTVDNA表达于肝细胞核或胞浆内，以核型多见．在急性肝炎，TTV阳性细胞弥漫分布于肝小叶内，慢性肝炎于汇管区附近较为密集，而在肝硬变病例，阳性细胞在假小叶内多呈片簇状不规则分布结论在不明原因病毒性肝炎患者血清及肝组织中TTVDNA的检出表明TTV为一种新型的肝炎病毒，TTV为一种嗜肝性病毒。

双探针原位杂交法检测慢性肝病和肝细胞癌患者肝组织TTV DNA的感染状况

目的 探讨慢性肝病和肝细胞癌患者肝组织TTVDNA的感染状况。方法 采用PCR扩增法分别合成G1a、G2b两种亚型的双链TTVDNA探针。应用两型探针对 45例肝组织标本进行TTVDNA原位杂交检测 ,巢氏PCR法检测血清TTVDNA。结果 3 1例血清TTVDNA阳性患者的肝组织TTVDNA均为阳性 ( 10 0 % )。 14例血清TTVDNA阴性的患者肝组织中TTVDNA阳性者 7例 ( 5 0 % )。慢性肝病患者的肝组织中TTVDNA散在分布在汇管区周围的肝细胞核内 ,肝癌患者TTVDNA则集中分布在肝癌细胞核内及癌组织周围的肝细胞核内。结论 慢性肝病与肝癌患者肝组织中TTVDNA的感染状态存在一定差异。

同位素标记探针原位杂交与免疫组化法结合——在肝石蜡切片上同时检测HBV-DNA和HBsAg

原位分子杂交法是近年来发展较快的又一新技术,已被广泛地应用于检测细胞或组织切片中病毒基因和肿瘤基因.1984年Blum等首次报道了把原位杂交技术与免疫组织化学方法相结合应用~3H标记探针在肝石蜡切片上同时检测乙型肝炎病毒DNA(HBV-DNA)和乙型肝炎核心抗原(NBcAg).从而使在同一组织切片上观察病毒及其表达产物的定位和分布关系成为可能.目前尚未见到其它类似的报道.

荧光原位杂交法在活性污泥硝化细菌检测中的应用

采用荧光原位杂交(FISH)法对活性污泥样品中的硝化细菌进行了检测研究。与传统方法相比,FISH法具有快速便捷的特点,可原位检测出活性污泥菌胶团上的硝化细菌的分布情况,结合稀释的方法,可对环境样品中的硝化细菌进行定量分析。此法既可定性,又可对环境中的硝化细菌进行直接计数,为研究硝化细菌类群的空间和数量分布提供有效的检测工具。

原位杂交法检测太行山猕猴食管癌的人乳头瘤病毒

乳头瘤病毒(简称PV)是一组DNA致瘤病毒,可感染人和高等动物的鳞状上皮,引起疣状增生性病变。运用分子生物学技术,目前已发现人类许多器官发生人乳头瘤病毒(简称HPV)感染。周健等用分子杂交技术证实了人食管是HPV感染的多发部位之一,并在食管癌高发区的人食管癌标本中检测到HPV。最近,在食管癌高发区太行山生长的太行山猕猴发现两例自发性食管癌。猕猴的食管癌是否也与HPV感染有关,国内外尚未见报道。我们用人乳头瘤病毒探针对这两例太行山猕猴自发食管鳞状细胞癌标本进行了检测。

化学发光法在DNA杂交分析中的应用

化学发光法在ＤＮＡ杂交分析中的应用袁津玮，周宜开（武汉同济医科大学环境医学系武汉４３００３０）用于检测特异ＤＮＡ和ＲＮＡ序列的核酸杂交分析技术，作为分子生物学的最基本技术之一，已广泛应用在生命科学，尤其是医学的各个领域。传统的核酸分子杂交采用的是放射...

生物素标记DNA探针在菌落原位杂交试验中的效果观察

本文报告用生物素标记4.3kbDNA探针,以菌落原位杂交法检测15株产肠毒家金葡菌和4株阴性对照菌的情况,并与斑点杂交结果进行比较。结果显示菌落原位杂交法检出产毒金葡菌的阳性率是100%,与斑点杂交法阳性的符合率是92.9%。SEC_1DNA探针与4株阴性对照菌杂交均呈阴性。

EB荧光分析法测定肿瘤细胞DNA交联及增殖活性

应用ＥＢ荧光分析法测定体外培养人宫颈癌细胞株（ＨｅＬａ）、人白血病细胞株（ＨＬ－６０），增殖性和非增殖性人外周血淋巴细胞（ＰＢＬ）的ＤＮＡ含量及其交联度（ＤＮＡｃｒｏｓｓ－ｌｉｎｋ），并据此研究不同增殖状态细胞与其ＤＮＡ百分交联度（ｃｔ％）的相互关系．结果显示，ＨｅＬａ细胞、ＨＬ－６０细胞、增殖性和非增殖性ＰＢＬ的ＤＮＡｃｔ％分别为３６．５、２２．５、２０．２和０，表明不同增殖速度或周期的细胞具有不同的ＤＮＡ交联反应，而非增殖性细胞或Ｇｏ期细胞不产生ＤＮＡ交联反应．

花粉管通道法转柱头外露棉DNA及转化体RAPD分析

提取"异9-3"柱头外露棉总基因组DNA,通过花粉管通道法经微量注射导入抗虫棉707 1的胚囊内,D1代田间筛选到柱头外露的转化植株.遗传分析结果表明转化株柱头外露性状由一对隐性基因控制.50个随机引物进行PCR扩增,33个引物扩增出的DNA在供体、受体和转化体之间呈现出多态性,其中引物S462(TCGGCACGCA)在供体和转化体之间出现相同产物而受体没有出现扩增产物,该引物有可能作为柱头外露系的分子标记.RAPD分析结果表明转化体与受体有较多相同基因位点,而与供体相同基因位点较少.转化体还有供体和受体都不具有的基因位点,这可能是外源DNA导入时引起碱基突变所致.

利用DNA指纹技术进行玉米自交系类群划分新方法——遗传背景分析法

对52个待测玉米自交系和15个对照自交系进行DNA指纹分析,计算待测玉米自交系与各类群对照自交系之间的遗传距离,不用聚类分析方法,直接根据遗传距离进行类群划分,结果表明,与传统的聚类分析方法相比,遗传背景分析方法是十分有效的玉米自交系类群划分新方法,将52个玉米自交系主要分为5大类群,即瑞德群,黄改群,P群,旅大红骨群和兰卡斯特群,未发现新的优势类群,除了自交系黄C以外,其他所有玉米自交系的类群划分结果与系谱来源相吻合,并指出黄C属于瑞德群。

应用免疫组化法和原位杂交检测犬ADV

西班牙学者Quiroga等通过病理学、免疫组化法和DNA原位杂交试验对2个猪场的7只死亡犬(临床上表现为多涎、呕吐、骚痒、抑郁、昏迷)进行伪狂犬病(AD)检测。结果在其脑干尤其是接近第四脑室呈现出非化脓性脑炎的显著病理学变化。ADV抗原和ADV核酸的存在情况与组织病理学损伤相一致,在严重损伤部位可检测少量的ADV抗原和ADV核酸。

流式细胞仪BrdU/DNA双参数分析法测定急性白血病细胞周期及其临床意义

研究白血病细胞的增殖动力学,探讨其与临床的关系。采用流式细胞仪（FCM）BrdU/DNA双参数分析法测定39例急性白血病骨髓细胞周期的各时相细胞比例及S期细胞的时限（Ts）,其中ANLL26例,ALL13例;初治31例,复发8例（ANLL、ALL各4例）。结果显示,急性白血病骨髓细胞S期比例显著低于正常,初治及复发白血病患者骨髓S期细胞比例之间相差不显著;复发白血病患者骨髓细胞的Ts比初治白血病患者及正常骨髓细胞的Ts都短。提示白血病细胞处于较正常低增殖状态;Ts时限短提示白血病细胞再生迅速,与急性白血病复发关系密切;Ts时限短为白血病预后不良因素之一。

沉香DNA提取方法及种质资源聚类分析研究

目的:分别建立适用于提取不同类型沉香样品(叶片、干燥枝条、药材)DNA的方法,通过ITS2序列对沉香药材进行种质资源聚类分析。方法:根据沉香叶片、干燥枝条、药材的组织差异,分别采用试剂盒法和优化的CTAB法提取DNA;利用紫外分光光度仪、琼脂糖凝胶电泳、PCR扩增及ITS2序列测定来检测DNA的纯度、浓度及可用性,以比较不同DNA提取方法的效率;将样品测序结果与从Gen Bank下载的沉香属(Aquilaria spp.)、拟沉香属(Gyrinops spp.),及沉香药材常见混伪品的ITS2序列,进行聚类分析。结果:优化的CTAB法提取得到的DNA纯度比试剂盒法稍低,但浓度更高。两种方法所提沉香总DNA进行ITS2序列的PCR扩增成功率和测序成功率均为100%。ITS2序列能准确鉴别出4个沉香混伪品和2个拟沉香物种,且15个沉香样品ITS2序列与Aquilaria subintegra(泰国)、Aquilaria sinensis(中国)、Aquilaria crassna(柬埔寨、泰国)三个沉香物种均100%相似。结论:本研究中的两种DNA提取方法均可用于沉香DNA条形码研究;优化CTAB法比试剂盒法更适用于药材DNA的提取,该方法为有关中药材DNA的提取提供了参考;ITS2序列可为沉香种质资源的鉴定和系统发育分析提供必要的实验依据。

DNA定量分析法在恶性胸腔积液诊断中的应用价值

目的探讨细胞DNA定量分析法在恶性胸腔积液诊断中的应用价值。方法将324例胸腔积液标本分别制成6张薄层细胞涂片,3张用于巴氏染色行脱落细胞学检查,3张用于经Feulgen染色行细胞DNA定量分析。结果脱落细胞学检测良、恶性胸腔积液的敏感性为61.27%,特异性为94.51%,准确率为79.94%;细胞DNA定量分析检测良、恶性胸腔积液的敏感性为95.07%,特异性为100%,准确率为97.84%。两种方法准确率比较差异有统计学意义(P=0.027)。结论细胞DNA定量分析可进一步认证脱落细胞学检查结果并弥补其不足,二者联合应用可鉴别胸腔积液的性质。

比较全血DNA提取法适用单核苷酸多态性分析

目的比较两种提取冰冻全血基因组DNA的方法,即分离白细胞法和裂解红细胞法所获得基因组DNA的质量。方法分别测定所获DNA的效率和纯度,同时,笔者用PCR/SNP敏感性分子开关技术,对两种方法获得的模板DNA进行单核苷酸多态性(single-nucleotidepolymorphism,SNP)分析。结果结果显示分离白细胞法DNA产量与纯度均高,裂解红细胞法获得的DNA产量、纯度相对较低;PCR/SNP敏感性分子开关检测表明:分离白细胞法和裂解红细胞法制备的DNA模板,均可在体外进行有效的PCR扩增,但分离白细胞法获得的目的DNA带特异性凸显,而裂解红细胞法获得的目的带特异性相对较差。结论预先分离纯化白细胞是从冰冻全血中获得较高纯度DNA和有效提高DNA产量的重要操作步骤。

DNA定量分析法联合癌胚抗原测定在良恶性胸水鉴别诊断中的应用

目的探讨细胞DNA定量分析法在恶性胸水诊断中的应用价值。方法 324例胸腔积液患者抽取胸水,巴氏染色行脱落细胞学检查,Feulgen染色行细胞DNA定量分析;同时进行胸水和血清癌胚抗原(CEA)测定。结果脱落细胞学检测良恶性胸水的敏感性61.27%,特异性94.5%,准确率79.94%;细胞DNA定量分析检测良恶性胸水的敏感性为95.07%,特异性为100%,准确率为97.84%;胸水CEA检测良恶性胸水的敏感性为66.9%,特异性为92.3%,准确率为81.17%;血清CEA检测良恶性胸水的敏感性为50%,特异性为84.62%,准确率为69.44%。结论脱落细胞学联合细胞DNA定量分析及CEA检测可提高良恶性胸水鉴别诊断的准确性。

快速检测DNA链断裂的DNA解螺旋荧光分析法

快速检测ＤＮＡ链断裂的ＤＮＡ解螺旋荧光分析法杨业鹏，徐厚恩，南新升ＤＮＡ损伤作用的检测是致突变／致癌物短期筛选试验的重要内容之一。即往对ＤＮＡ链断裂的检测大多采用碱性蔗糖梯度的离心、碱性洗脱和ＤＮＡ解螺旋层析分析等方法，因操作繁琐，在实际应用中受到一...

细胞DNA定量分析法在浆膜腔积液鉴别诊断中的应用

目的探讨细胞DNA定量分析法在良恶性浆膜腔积液鉴别诊断中的应用价值。方法将297例份浆膜腔积液(胸水、腹水、心包积液)分别制成4张薄层细胞涂片,2张做巴氏染色、行常规细胞学检查,2张经Feulgen染色、行细胞DNA定量分析。结果297例份标本,常规细胞学检查发现138例(44.5%)异常,DNA定量分析发现131例(44.1%)异常;常规细胞学检查诊断为癌及可疑癌细胞的84例中均出现DNA异倍体,常规细胞学检查发现异型细胞的54中47例(87%)出现DNA异倍体。结论细胞DNA定量分析可进一步认证常规细胞学检查结果并弥补其不足,二者联合应用可鉴别浆膜腔积液的性质。