谷胱甘肽合成抑制对人热激因子1结合DNA功能的影响

【目的】研究细胞内具抗氧化作用的谷胱甘肽合成受抑制对人热激因子1结合DNA功能的影响。【方法】用谷胱甘肽合成酶抑制剂丁硫堇处理培养中的HeLa细胞,降低细胞内的谷胱甘肽水平,通过非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳和Westernblot检测细胞谷胱甘肽缺乏时经热激处理后人热激因子1的氧化还原构象改变;通过凝胶电泳迁移率试验检测其与DNA结合的活性变化。【结果】丁硫堇处理后的HeLa细胞,经热激后出现一种在电泳中移动快速、结构致密、分子内二硫键交联的氧化型热激因子1;凝胶电泳迁移率试验结果显示热激因子1与DNA结合活性降低。【结论】谷胱甘肽在维持细胞的氧化还原状态中起重要作用,谷胱甘肽缺乏导致细胞内氧化型热激因子1蓄积,从而降低热激因子1与DNA结合的功能。

HBV相关慢加急性肝衰竭患者血清巨噬细胞移动抑制因子和游离DNA水平变化及其临床价值

目的:观察乙型肝炎病毒(HBV)相关慢加急性肝衰竭(ACLF)患者血清巨噬细胞移动抑制因子(MIF)、游离DNA(cf-DNA)水平变化,并分析MIF、cf-DNA在肝衰竭中的作用。方法:选取HBV相关ACLF患者60例(肝衰竭组),体检健康者30例(对照组),收集临床资料,试剂盒检测各组患者血清MIF、cf-DNA水平,Pearson相关或Spearman秩相关分析法分析MIF、cf-DNA与临床炎症指标的相关性。结果:与对照组相比,肝衰竭组患者血清MIF和cf-DNA水平升高(P<0.05)。血清MIF与cf-DNA(r=0.482)、降钙素原(PCT)(r=0.566)、超敏C反应蛋白(r=0.285)呈正相关(P<0.05);cf-DNA与PCT(r=0.526)、超敏C反应蛋白(r=0.336)呈正相关(P<0.05)。结论:HBV相关ACLF患者血清MIF、cf-DNA水平升高,MIF和cf-DNA在肝衰竭炎症过程中发挥重要作用。

重组人肝再生增强因子在体外能刺激HTC肝癌细胞DNA合成

在成功克隆人肝再生增强因子（hALR）CDNA的基础上，本研究将人ALR编码区cDNA亚克隆于真核瞬间表达质粒pCDNAⅠ，构建了真核表达质粒pCDNAⅠ－hALR，转染cos-7细胞后，表达产物生物活性检测表明：真核表达的hALR在体外能刺激HTC肝癌细胞增殖，这一体外活性的确定为重组人ALR的纯化提供了简洁、可靠的检测方法。

有机锗多酸衍生物对S_(180)肿瘤细胞DNA合成的抑制作用

目的 探讨有机锗多酸衍生物对S1 80 肿瘤细胞DNA合成的抑制作用。方法 用3H TdR掺入法检测有机锗多酸衍生物在体外对S1 80 肿瘤细胞DNA合成的抑制作用 ,观察不同剂量有机锗多酸衍生物对S1 80 实体瘤的抑制作用和对免疫器官的影响。结果 体外实验表明 ,有机锗多酸衍生物对S1 80 细胞的生长具有明显的抑制作用 ,而且浓度越高 ,抑制作用越强。体内实验也表明 ,有机锗多酸衍生物对S1 80 实体瘤的生长具有抑制作用 ,而且剂量越大 ,抑制作用越强。且有机锗多酸衍生物可防止荷瘤鼠脾脏重量的下降。结论 有机锗多酸衍生物可抑制肿瘤细胞生长 。

DNA甲基化抑制剂对肿瘤细胞中核糖核酸酶抑制因子表达下调的影响(英文)

背景与目的:人核糖核酸酶抑制因子(ribonucleaseinhibitor,RI)RI能有效抑制血管生成因子诱导的血管形成及某些可移植性实体瘤在动物体内的生长。然而,RI抗肿瘤的分子机制还未完全阐明。许多抑癌基因通过启动子区域异常的甲基化而使表达缺失,去甲基化抑制能使其表达恢复。为了进一步了解RI的功能以及探讨RI与肿瘤发生的关系,本实验拟研究甲基化抑制剂5-aza-2'-deoxycytidine(5-Aza-CdR)对肿瘤细胞中RI表达的影响。方法:用5-Aza-CdR作用人乳腺癌细胞系MCF-7、人胃癌细胞系BGC-823、人的前列腺癌细胞系DU-145和人结肠癌细胞系HT-29。通过RT-PCR,蛋白免疫印迹法(Westernblot),免疫荧光(immunofluorescence)和免疫细胞化学(immunocytochemistry)技术分析RI基因的表达。结果:与对照组比较,5-Aza-CdR能显著提高RI基因在MCF-7、BGC-823和DU-145细胞中的表达,RT-PCR检测结果分别为37.2%、46.0%和32.4%,Westernblot检测结果分别为26.4%、20.9%和24.4%(P<0.01);但对HT-29细胞没有明显的影响。结论:RI基因可能与胃癌、前列腺癌和乳腺癌的发生有关。

活性氧引起的DNA合成抑制与小麦的抗旱性

用不同浓度的 PEG60 0 0对两个抗旱性不同的小麦品种进行干旱胁迫 ,抗旱品种的DNA合成抑制程度明显低于干旱敏感品种 ,单独增加 3种主要活性氧 · O- 2 、HO· 、H2 O2 之一 ,结果亦然 ,其中以 HO· 抑制 DNA合成作用最强。加入活性氧清除剂 VC或 DMSO可部分抵消干旱胁迫或单独增加活性氧引起的 DNA合成抑制。结果表明小麦的抗旱性与干旱胁迫后 DNA合成水平具有密切联系。

麦冬对甲基磺酸甲酯诱发的小鼠精子非程序DNA合成的抑制作用

目的 :观察中草药麦冬对雄性小鼠生殖细胞遗传物质损伤的防护作用。方法 :采用雄性小鼠生殖细胞非程序 DNA合成实验。结果 :麦冬各剂量组诱导的非程序 DNA合成与正常对照组比较差异无显著性 ( P>0 .0 5 ) ;6.8～ 1 3.6g· kg-1剂量 ,麦冬对甲基磺酸甲酯所诱导的非程序 DNA合成有明显抑制作用 ( P<0 .0 1 ) ,并且随着麦冬浓度的增加 ,其抑制作用逐渐增强 ,超过一定剂量 ,其抑制作用不再增强。结论

DNA结合抑制因子-1在子宫内膜异位症中的表达及其与微血管密度的关系

目的检测DNA结合抑制因子-1(Id-1)在子宫内膜异位症(EMs)中的表达及其与血管生成的关系,探讨其在EMs发病机制中的作用。方法采用实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测EMs在位内膜(60例)、异位内膜(60例)及正常子宫内膜(30例)中Id-1 mRNA的表达水平,同时应用免疫组化SP法对CD34标记阳性的血管进行微血管密度(MVD)测定,分析两者的相关性。结果 EMs在位内膜Id-1 mRNA相对表达量和MVD值明显高于正常子宫内膜,但低于EMs异位内膜,而且随着临床期别增加EMs在位及异位内膜Id-1表达水平和MVD值均增加,差异有统计学意义(P<0.01)。正常子宫内膜、EMs在位及异位内膜的增殖期和分泌期比较,Id-1 mRNA表达水平和MVD值均差异无统计学意义(P>0.05)。EMs在位和异位内膜Id-1mRNA表达水平和MVD值呈明显正相关性(r=0.879,P=0.000;r=0.829,P=0.000)。结论 Id-1在EMs在位和异位内膜中存在过度表达,且与血管生成密切相关,推测Id-1可能通过促血管生成途径参与EMs的发病机制。

饮水与肝癌——DNA合成抑制试验检测水质的诱变或致癌作用

江苏省启东市是我国肝癌高发区之一。自1972年以来,不同作者、不同时间进行多次调查。均发现肝癌发病率高低与饮水类型有关。概括的说,即饮地面水,如宅沟水、泯沟水及河水居民的肝癌发病率显著高于饮井水者。本文应用DNA合成抑制试验(DSI)来检测宅沟水、井水及自来水中的诱变或致癌作用。

DNA损伤修复相关通路的合成致死靶点研究及其在卵巢癌中的应用和前景

DNA损伤引发细胞启动一系列DNA损伤应答(DNA damage response,DDR),包括DNA损伤修复、细胞周期检查点激活、细胞周期阻滞、各种细胞内信号转导途径的活化和细胞凋亡等。DNA损伤修复(DNA damage repair)是细胞维持基因组稳定性的重要机制,于2015年获得诺贝尔化学奖。DNA损伤修复途径主要包括:碱基切除修复(base-excision repair,BER)、核苷酸切除修复(nucleotide excision repair,NER)、错配修复(mismatch repair,MMR)、同源重组(homologous recombination,HR)和非同源末端连接(non-homologous end joining,NHEJ)等,分别在DNA单链断裂(single-strand break,SSB)或双链断裂(double-strand break,DSB)等损伤修复中发挥重要作用。DNA损伤修复缺陷与肿瘤发生发展密切相关,同时也是肿瘤治疗的重要靶点。DNA损伤修复通路的多聚ADP核糖聚合酶(poly-ADP-ribose polymerase,PARP)与乳腺癌易感基因BRCA 1/2等存在合成致死(synthetic lethality)作用,使PARP抑制剂(PARP inhibitor,PARPi)成为第一个也是目前唯一上市的肿瘤治疗合成致死靶药。PARPi在卵巢癌及多种实体瘤治疗中疗效良好,使DNA损伤修复及相关DDR通路的合成致死靶药研发成为热点,其他在研靶点主要包括:共济失调毛细血管扩张突变蛋白(ataxia telangiectasia-mutated protein,ATM)、共济失调毛细血管扩张与RAD3相关蛋白(ataxia telangiectasia and Rad3 related protein,ATR)、DNA依赖性蛋白质激酶催化亚单位(DNA-dependent protein kinase catalytic subunit,DNA-PKcs)、细胞周期检测点激酶1(checkpoint kinase1,CHK1)、细胞周期检测点激酶2(checkpoint kinase 2,CHK2)、阻止有丝分裂的蛋白质激酶WEE1等。PARPi与其他DDR靶药、抗血管生成药物及免疫检查点抑制剂的联用,有可能成为克服PARPi耐药、提高疗效的有效手段和发展前景。本文针对DNA损伤修复及相关DDR通路的关键分子和潜在肿瘤治疗靶点进行综述,阐述了DNA损伤修复相关通路的合成致死靶点研究及在卵巢癌的应用和前景,为基础研究及临床应用提供指导。

DNA抑制因子4作为急性淋巴细胞白血病临床复发前报告因子的可行性初探

本研究探讨以DNA抑制因子4作为急性淋巴细胞白血病(ALL)复发前报告因子的可行性。以骨髓持续完全缓解6-8个月的ALL患者为研究对象,应用甲基化特异性聚合酶链反应(MS-PCR)对经诱导缓解和巩固强化后持续完全缓解的32例ALL患者进行DNA抑制因子4启动子区甲基化状况分析,并随诊3个月以上。结果发现,32例完全缓解的ALL患者中20例(62.5%)DNA抑制因子4呈甲基化。12例DNA抑制因子4呈非甲基化的患者中只有1例3个月内复发,复发率8.33%,20例DNA抑制因子4呈甲基化状态的患者中10例3个月内复发,复发率50%。DNA抑制因子4甲基化与ALL患者初诊时是否具有高危因素并不完全相关。结论:DNA抑制因子4可作为ALL患者临床复发前的报告因子。

DNA合成抑制实验检测烹调油烟对人羊膜成纤维细胞WISH的致突变性研究

目的与方法 :本文应用DNA合成抑制 (DSI)实验对居民家庭烹调油烟进行了致突变性研究。结果 :实验结果表明 ,不同浓度的烹调油烟凝聚物均可见到DNA合成抑制 ,具有明显的剂量—效应关系。结论 :实验证实 。

肝细胞DNA刺激合成因子治疗慢性病毒性肝炎的疗效观察

用改良Labrecque法从乳猪肝中抽提一种生物活性物质。治疗慢性病毒性肝炎273例.结果显示此物质能明显降低转氨酶,退黄疸,升(?)白蛋白,改善A/G比值。检测其中20例慢性活动性肝炎治疗前后肿瘤坏死因子TNF水平,发现慢活肝病人TNF水平明显升高,治疗后基本降至正常水平。

苯乙酸对胶质瘤细胞C_6DNA合成的抑制作用

目的：观察诱导分化剂苯乙酸对胶质瘤细胞Ｃ６的诱导分化作用，并在分子水平上探讨其作用机理。方法：细胞计数和〔３Ｈ〕－ＴｄＲ掺入法检测细胞增殖，流式细胞术分析细胞周期。结果：苯乙酸对细胞增殖存在剂量（２５ｍｍｏｌ／Ｌ，５０ｍｍｏｌ／Ｌ）依赖性抑制；免疫细胞化学检测ＣＰＭ值降低，肿瘤细胞ＤＮＡ合成减少；细胞周期分析Ｇ０／Ｇ１期所占比例下降，Ｓ期相对升高。结论：苯乙酸可阻抑细胞增殖周期，使细胞周期增殖循环中止于Ｓ期中ＤＮＡ合成准备期Ｓ０期，ＤＮＡ合成减少，抑制细胞增殖。

肝细胞生长因子刺激大鼠离体肝细胞DNA合成的剂量-与时间-效应

本工作采用３ＨＴｄＲ掺入ＤＮＡ法观察重组人肝细胞生长因子（ｒｈＨＧＦ）刺激大鼠离体肝细胞ＤＮＡ合成的剂量与时间效应。实验结果表明：ｒｈＨＧＦ是最强的促肝细胞分裂剂，在一定剂量范围内，ｒｈＨＧＦ与肝细胞ＤＮＡ合成有明显的量效关系。１ｎｇ／ｍｌｒｈＨＧＦ即可引起３ＨＴｄＲ掺入显著增加（Ｐ＜０．０１），随剂量增加，刺激ＤＮＡ合成的效应也随之增强；１０ｎｇ／ｍｌ时３ＨＴｄＲ掺入量最大，较对照组高７倍（Ｐ＜０．００１），剂量再增加即出现抑制效应；ｒｈＨＧＦ刺激肝细胞ＤＮＡ合成存在时间效应关系，表现为ｒｈＨＧＦ作用２４ｈ，ＤＮＡ合成量明显高于对照组（Ｐ＜０．０１），４８ｈ作用达最高（Ｐ＜０．００１），随后开始下降，至９６ｈ下降到相当于２４ｈ的水平。

胃癌高发区饮水对整体动物 DNA 合成抑制及其致癌性研究

为探讨赞皇县胃癌高发区居民饮水与胃癌发生的关系，用整体动物ＤＮＡ合成抑制实验与流行病学调查相结合的方法进行研究。结果发现胃癌高发区饮水浓缩物对ＤＮＡ合成有明显抑制作用，并有明显的剂量－效应关系；饮水污染越严重，该水对ＤＮＡ合成抑制作用越强，饮此水的居民胃癌死亡率也越高；饮水中可能含有的致突致癌物质，既有ＤＮＡ损伤剂，又有ＤＮＡ合成代谢抑制剂，提示饮水可能与当地居民胃癌高发有密切关系。

表皮生长因子对人牙髓细胞DNA合成及细胞周期的影响

目的研究表皮生长因子(EGF)对体外培养的人牙髓细胞(HDPCs)DNA合成及细胞周期的影响.方法将培养的第5代HDPCs分成EGF(1ng/ml)实验组和对照组,分别以含5%FBS的DMEM培养48h;常规消化、固定细胞,调整细胞密度为2.0×106/ml,经DNA荧光染色后用流式细胞仪(FCM)测定DNA分子含量.结果与对照组相比,EGF实验组HDPCs的DNA合成前期细胞比例(G1%)明显降低,而DNA合成期细胞比例(S%)及细胞增殖指数PrI值(S+G2M)%均显著增高.结论EGF具有促进HDPCs的DNA合成和分裂增殖的作用,可能主要是通过促使处于G1期的细胞进入S期来实现的;提示EGF在牙髓组织的损伤修复过程中起着重要作用.

角质细胞生长因子(KGF)对人卵泡颗粒细胞内Ca^(2+)浓度和DNA合成的影响

目的:探讨角质细胞生长因子(KGF)对人卵巢颗粒细胞内Ca^(2+) 浓度及DNA 合成的影响。方法:从体外受精-胚胎移植取卵时的卵泡液中分离出颗粒细胞(n=20),体外培养,采用3H-TdR 及黏附式细胞仪检测在KGF诱导下颗粒细胞内的Ca^(2+)浓度和DNA合成的变化。结果:加入KGF后,颗粒细胞内的Ca^(2+)浓度和DNA合成显著增加(P<0.01)。结论:KGF可以促进人卵泡颗粒细胞内Ca^(2+)浓度升高和DNA合成增多。

DNA甲基化转移酶抑制剂与胸苷酸合成酶抑制剂体外联合用药的抗肿瘤增效作用

通过在体外分别对DNA甲基化转移酶(DNAmethyltransferase,DNMT)抑制剂5-氮杂胞苷(5-azacytidine,5-aza-C)和新型胸苷酸合成酶抑制剂盐酸洛拉曲克(nolatrexeddihydrochloride,Nolatrexed)联合用药于人大肠癌细胞LoVo和人肝癌细胞Hep3B的相互作用性质的观察,探讨DNMT抑制剂和胸苷酸合成酶抑制剂联合用药的可能性.使用MTT法测定二者单独用药或联合用药的抗肿瘤活性,用抑制浓度的分数之和(sumoffractionalinhibitoryconcentration,SFIC)值及等效剂量分析方法(isobologram)评价联合用药的作用性质.结果显示,联合用药时其SFIC值均小于或等于1,由此得到的等效剂量曲线图形表现为凹形.可见,5-aza-C和Nolatrexed体外联合用药抗肿瘤相互作用性质为明显的增效作用,DNMT抑制剂和胸苷酸合成酶抑制剂联合用药达到抗肿瘤增效作用是可行的.