受精鸡蛋卵黄中DNA和RNA的分布

通过对受精未孵育鸡蛋卵黄的不同部位加以考查 ,发现DNA和RNA在卵黄中的分布是广泛存在的 ;采用荧光试剂Hoechst332 5 8和RiboGreen对DNA和RNA进行定量分析 ,结果表明 :DNA在不同部位卵黄中的分布比较均匀 ,且主要存在于卵黄颗粒中 ,而RNA的含量在胚下表层卵黄、侧面和植物极中有较大差异 .

基于环境DNA的涠洲岛周围海域布氏鲸种群分布初探

鲸类作为海洋生态系统中的顶级捕食者,是维持海洋生态平衡和生态稳定的关键物种。广西涠洲岛布氏鲸(Ba-laenoptera edeni edeni)是中国近海唯一稳定出现的须鲸种群,但其栖息地分布现状尚不明确。由于布氏鲸活动能力强、分布范围广,目视监测难以进行稳定跟踪调查。基于此,结合环境DNA(Environmental DNA,eDNA)技术,监测了不同时期(2022年4月和2023年1月)涠洲岛布氏鲸栖息地的分布现状。研究发现,4月在布氏鲸的热点分布海域(涠洲岛—斜阳岛之间)目视和eDNA均发现布氏鲸存在(n=3),同时在涠洲岛西南海域也发现布氏鲸存在(n=2),其中有1个站位仅eDNA检测到;1月在布氏鲸的热点分布海域目视和eDNA均发现布氏鲸存在(n=1),涠洲岛东部海域仅eDNA检测到布氏鲸存在(n=1)。结果表明,eDNA技术相比目视具有更高的灵敏度,可用于验证布氏鲸的分布,同时发现涠洲岛东部和西南部海域是布氏鲸的潜在热点分布海域。该研究验证了eDNA技术在涠洲岛布氏鲸分布监测上的可行性,进一步明确了涠洲岛布氏鲸栖息地的分布现状,为其种群的高效监测和科学保护提供了基线信息。

2012年-2022年TBTV、TVDV、TBTVsatRNA和TVDVaRNA在云南主要烟区的发生与分布

烟草丛顶病(tobacco bushy top disease,TBTD)是一种由烟草丛顶病毒(tobacco bushy top virus,TBTV)及其卫星RNA(tobacco bushy top virus satellite RNA,TBTVsatRNA)和烟草扭脉病毒(tobacco vein distorting virus,TVDV)及其伴随RNA(tobacco vein distorting virus associated RNA,TVDVaRNA)共同侵染引起的危险性病害,曾在云南很多烟区造成严重损失。本研究对烟草丛顶病及其相关病原物在云南烟草上的发生情况进行了多年的调查研究,力图对烟草丛顶病及其相关病原物的发生与分布进行追踪和分析。结果表明,2012年-2022年,烟草丛顶病在云南各大烟区仅零星发生,2019年以来已很难发现。烟草丛顶病的相关病原物主要在曾经暴发流行过病害的楚雄、保山和大理发现,且TBTV、TVDV、TBTVsatRNA和TVDVaRNA在烟草上并不总是同时被检出,其中引起烟草丛顶病典型症状的TBTV+TVDV+TBTVsatRNA+TVDVaRNA检出率在5%以下,TVDV的检出率最高,达30.44%,TBTVsatRNA的检出率最低,为7.68%。TBTV、TVDV、TBTVsatRNA和TVDVaRNA不能同时感染同一烟株可能是当前烟草丛顶病很少发生的主要原因。

基于环境DNA方法探究巢湖两栖动物多样性及分布特征

两栖动物在食物链和生态系统中具有重要地位,有效评估和监测两栖动物多样性是保护生物多样性的重要环节。该研究于2023年5月在巢湖池塘、河流、农田、湿地4种生境各选取10个调查点位,使用环境DNA(Environmental DNA,eDNA)技术探究两栖动物多样性,旨在摸清两栖动物多样性本底数据,探索两栖动物生境偏好与影响分布格局的环境因素。结果表明:①巢湖40个调查点位共检测出两栖动物4科5属7种,泽陆蛙在优势度指数(Y=0.303)和条带数占比(33%)上均表现出一定的优势。②池塘和湿地生境的群落结构相较于河流和农田生境差异性较大,河流生境内的物种丰富度低于其他生境。③泽陆蛙(Fejervarya multistriata)在池塘、农田和湿地生境中都具有一定的优势度,镇海林蛙(Rana zhenhaiensis)偏好池塘生境。④广义加性模型结果表明物种丰富度与海拔、水深均呈显著负相关(P<0.05)。冗余分析表明水宽、水温和pH均显著影响两栖动物的分布格局(P<0.05)。研究显示,巢湖池塘、河流、农田、湿地4种生境间群落结构和优势种存在差异,两栖动物的多样性和分布格局受到多种环境因子的作用,证明了环境DNA可作为调查巢湖两栖动物的有效方法。

HBV pgRNA联合cccDNA对慢性乙型肝炎患者抗病毒疗效的预测价值

目的探究乙型肝炎(HBV)前基因组RNA(pgRNA)联合共价闭合环状DNA(cccDNA)对慢性乙型肝炎(CHB)患者抗病毒疗效的预测价值。方法收集2019年8月至2022年8月期间于本院进行抗病毒治疗的96例CHB患者的临床资料,根据患者治疗48周后是否获得完全应答分为完全应答组(78例)及非完全应答组(15例)。检测患者不同时间HBV cccDNA和HBV pgRNA水平,Logistic回归分析影响CHB患者获得完全应答的因素,并应用受试者工作特征(ROC)曲线分析pgRNA与cccDNA联合检测在抗病毒疗效的预测价值。结果96例患者中78例抗病毒治疗后获得非完全应答;完全应答组治疗24、48周HBV pgRNA、HBV cccDNA水平均低于非完全应答组(P<0.05);Logistic回归分析显示,治疗24周HBV pgRNA、HBV cccDNA高水平及治疗前ALT低水平是影响CHB患者抗病毒治疗无效的独立危险因素(P<0.05);经ROC分析显示,HBV pgRNA预测CHB患者抗病毒疗效的AUC值为0.618,95%CI为0.513~0.716,HBV cccDNA预测的AUC值为0.667,95%CI为0.561~0.760,二者联合预测的AUC值为0.881,95%CI为0.799~0.938。结论HBV pgRNA与cccDNA在CHB患者抗病毒治疗中下调,且治疗24周HBV pgRNA联合cccDNA检测对CHB抗病毒疗效具有更高的预测价值。

RNA甲基化修饰调控DNA损伤修复过程及其在肿瘤耐药中的作用

DNA损伤修复是指纠正DNA两条单链间错配的碱基、清除DNA链上受损的碱基、恢复DNA正常结构的过程。细胞内存在多种机制来应对不同类型的DNA损伤,同源重组修复便是重要的修复机制之一。在同源重组修复过程中,RNA的合成发挥着重要作用,而RNA甲基化修饰作为一个普遍存在于真核细胞中的调控机制,也参与了这一复杂的修复过程。肿瘤发生过程中普遍存在RNA甲基化修饰失调导致的DNA损伤累积,从而引起肿瘤的恶性转化。此外,RNA甲基化修饰还可以影响放化疗后细胞对DNA损伤的修复能力,使肿瘤细胞的放化疗敏感性发生改变,进而影响治疗效果。本文综述了目前已知的不同类型RNA甲基化修饰在DNA损伤修复过程中的作用,并进一步分析RNA甲基化修饰介导的DNA损伤修复异常在肿瘤临床诊断、预后判断和作为治疗靶点等方面的应用前景。

基于环境DNA metabarcoding的舟山及其邻近海域鱼类空间分布格局的初步研究

为了解舟山及其邻近海域主要鱼类群落的种类组成,监测和保护其多样性,本研究于2019年5月在舟山及其邻近海域9个站位共采集了27个水样,采用环境DNA(environmental DNA,eDNA)metabarcoding技术确定了各站位鱼类群落组成和生物多样性。结果显示,舟山及其邻近海域共检出52种鱼类,隶属于18目37科49属,有4种鱼类仅注释到属级分类阶元。其中,鲈形目和鲭形目占比最高,分别为28.85%和15.38%,不同海域优势种存在较大差异。多样性(Shannon指数、Simpson指数和Pielou指数)表现趋势基本相同,均表现为舟山近海海域>长江河口海域>舟山外海海域。各鱼种eDNA在不同水层变化趋势大致可以分为3种,且多数鱼种序列丰度在水层间的变化趋势与其栖息水层偏好高度吻合。此外,通过与其他学者的研究结果进行比较分析,发现同一时间相同海域的eDNA metabarcoding研究结果差异较大,表明目前eDNA技术仍不能完全替代传统调查方法。未来可以将eDNA metabarcoding技术作为一种辅助手段应用于渔业资源监测,提高检测效率并减少对生态系统的干扰。本研究可为岛礁海域的鱼类群落调研提供新的思路和方法。

东北马鹿脾脏T、B淋巴细胞及真DNA和RNA分布规律的研究

用核酸的组织化学方法，对东北马鹿脾脏Ｔ、Ｂ淋巴细胞及其ＤＮＡ和ＲＮＡ的分布进行研究。结果表明：东北马鹿脾脏Ｂ－淋巴细胞主要分布在脾索中；Ｔ－淋巴细胞分布在脾小结外周、动脉周围淋巴鞘、边缘区和椭球内。ＤＮＡ存在于Ｔ、Ｂ淋巴细胞核内．ＲＮＡ存在于胞浆中。东北马鹿脾脏白髓不发达，脾小结未见生发中心。红髓发达，脾窦宽大。椭球数量较少，但体积较大。脾小梁丰富。

“观察DNA和RNA在细胞中的分布”实验的改进研究

本文对＂观察DNA和RNA在细胞中的分布＂实验提出了改进方法：人的口腔上皮细胞可直接染色观察,若要烘干必须用低温,不需用HC l进行水解;洋葱鳞片叶内表皮细胞应先用质量分数为4%的HC l溶液水解,然后用质量分数为1%的NaHCO3溶液清洗。通过改进,染色现象明显。

HBeAg阳性及阴性乙肝患者血清HBV RNA与HBV DNA和转氨酶水平变化的相关性分析

目的 探讨乙型肝炎(简称乙肝)E抗原(HBeAg)阳性乙肝患者血清与HBeAg阴性乙肝患者血清乙肝病毒(HBV) RNA、HBV DNA及转氨酶水平的相关性分析及其在乙肝诊断中的临床意义。方法 选取2022年11月至2023年4月该院门诊及住院部乙肝患者共108例,按照HBeAg状态分为HBeAg阳性组(25例)和HBeAg阴性组(83例),分析两组患者HBV RNA、HBV DNA、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)检测结果,用SPSS26.0软件对数据进行处理,对HBV RNA、HBV DNA及ALT、AST进行相关性分析。结果 HBeAg阳性组HBV RNA、HBV DNA、ALT、AST表达水平明显高于HBeAg阴性组(P<0.05)。相关性分析发现,HBV RNA表达与HBV DNA表达水平呈正相关(P<0.05),与ALT和AST无相关性(P>0.05)。结论 HBeAg阳性乙肝患者与HBeAg阴性乙肝患者的HBV RNA、HBV DNA和转氨酶表达水平存在明显差异,HBV RNA可作为常规检测项目在临床中推广。

三维显示视皮层长时增强过程中DNA/RNA分布的定量分析

激光扫描共聚焦显微镜可对数百 μm厚的组织切片进行共聚焦扫描 ,获得连续的共聚焦平面图像系列 ,通过计算机三维重建算法得到相应组织的立体图像。本文使用 15- 2 0天龄幼年大鼠视皮层脑片的标本 ,在通氧状态下 ,用荧光探针AO染色脑片 ,激光扫描共聚焦显微镜对全脑片不同层面进行共聚焦断层扫描 ,沿纵轴每 2 0 μm扫一次 ,共扫描 16次。再利用总值方式的投影算法对其三维重建 ,得到幼年大鼠视皮层脑片的DNA/RNA分布的立体图像。

LncRNA NORAD通过miR-513b-5p/GREM1轴调节颅内动脉瘤血管平滑肌细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的作用机制

目的:探讨长链非编码RNA DNA损伤诱导的非编码RNA(LncRNA NORAD)通过miR-513b-5p/GREM1轴调节颅内动脉瘤血管平滑肌细胞(VSMC)增殖、迁移、侵袭和凋亡的机制。方法:采用实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)法检测人颅内动脉瘤组织和正常组织中LncRNA NORAD、miR-513b-5p及GREM1表达。体外分离培养人VSMC,随机分为对照组、LncRNA NORAD siRNA组、miR-513b-5p mimics组、共转染(LncRNA NORAD siRNA+miR-513b-5p inhibitor)组、共转染阴性对照(LncRNA NORAD siRNA阴性对照+miR-513b-5p inhibitor阴性对照)组,分组转染后,采用实时荧光定量PCR法检测各组细胞LncRNA NORAD、miR-513b-5p及GREM1 mRNA表达;采用细胞计数试剂盒(CCK-8)和免疫荧光染色检测各组细胞增殖情况;采用Hoechst 33342染色和免疫荧光染色检测各组细胞凋亡情况;采用细胞划痕实验和Transwell实验检测各组细胞迁移、侵袭情况;采用免疫印记实验检测各组细胞上皮间充质转化(EMT)标志蛋白神经钙黏素(N-cadherin)、E-钙黏素(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)表达;采用双荧光素酶报告实验分析VSMC中LncRNA NORAD对miR-513b-5p、miR-513b-5p对GREM1的靶向调控。结果:与正常组织比较,颅内动脉瘤组织LncRNA NORAD、GREM1 mRNA表达明显升高(P<0.05),miR-513b-5p表达明显降低(P<0.05)。与对照组比较,LncRNA NORAD siRNA组、miR-513b-5p mimics组细胞GREM1 mRNA表达、增殖率、Ki67阳性率、迁移率、侵袭数及N-cadherin、Vimentin蛋白表达降低(P<0.05),miR-513b-5p表达、凋亡率及Bax/Bcl-2、E-cadherin蛋白表达升高(P<0.05);共转染阴性对照组各指标差异无统计学意义(P>0.05)。与LncRNA NORAD siRNA组比较,共转染组细胞GREM1 mRNA表达、增殖率、Ki67阳性率、迁移率、侵袭数及N-cadherin、Vimentin蛋白表达升高(P<0.05),miR-513b-5p表达、凋亡率及Bax/Bcl-2、E-cadherin蛋白表达降低(P<0.05)。结论:敲低LncRNA NORAD可通过上调miR-513b-5p表达而降低GREM1表达,从而抑制VSMC增殖与侵袭迁移,并促使其凋亡。

“观察DNA和RNA在细胞中的分布”实验的改进

对＂观察DNA和RNA在细胞中的分布＂实验从染液配方、材料选择和实验步骤三个方面进行了改进,既能使学生熟练掌握完整实验步骤,又能降低操作难度,提高学生实验成功率,保证实验效果。

子宫内膜癌组织中dMMR蛋白和miRNA Let-7表达水平及临床价值的研究

目的探讨子宫内膜癌(endometrial carcinoma,EC)中微小RNA Let-7(miRNA Let-7)表达水平与DNA错配修复(DNA mismatch repair,dMMR)蛋白表达缺失的关系及意义。方法选取2016年5月~2022年12月在江苏省连云港市妇幼保健院行根治性手术切除的子宫内膜癌患者74例,分别用免疫组织化学法检测dMMR蛋白(包括MLH1,PMS2,MSH2,MSH6)的表达、实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miRNA Let-7的相对表达量,按照dMMR蛋白表达情况,将EC患者分为表达完整组(n=43)和表达缺失组(n=31),采用Logistic多因素回归分析与dMMR蛋白缺失相关的危险因素、绘制受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线评估相关因素的预测价值。结果74例EC病例中,miRNA Let-7的表达水平在肌层浸润<1/2组显著高于肌层浸润≥1/2组,差异具有统计学意义(t=1.79,P=0.04);dMMR蛋白表达的缺失率为41.89%,且年龄<55岁组和miRNA Let-7低表达组(<0.715)患者中的dMMR蛋白缺失率高于≥55岁组和miRNA Let-7高表达组(≥0.715),差异具有统计学意义(χ2=3.92,4.50,均P<0.05);Logistic多因素回归分析结果显示miRNA Let-7表达水平是发生dMMR表达缺失的独立危险因素(P=0.012);Spearman相关分析表明,miRNA Let-7的表达水平与dMMR蛋白缺失呈明显负相关(r=-0.247,P=0.034);ROC曲线分析结果显示,miRNA Let-7表达水平对于预测EC患者中发生dMMR蛋白的缺失具有一定的价值,其AUC为0.737,最佳临界值为0.77,敏感度和特异度分别为0.651,0.806。结论子宫内膜癌患者中miRNA Let-7的表达水平与dMMR蛋白缺失具有相关性,也是发生dMMR蛋白缺失的危险因素,有望为预测dMMR的表达缺失提供帮助。

DNA损伤激活的长链非编码RNA促进多发性骨髓瘤细胞增殖及耐药研究

目的:探讨DNA损伤激活的长链非编码RNA(NORAD)对多发性骨髓瘤(MM)细胞增殖及对硼替佐米(BTZ)化疗耐药性的影响。方法:应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测健康人和骨髓瘤患者、不同MM细胞系中NORAD表达差异,并分析其与MM患者生存率关系;运用慢病毒转染技术,干扰细胞系中NORAD的表达,检测其表达差异;定量PCR(qPCR)检测骨髓瘤细胞系中人类非编码RNA-144a-3p(hsa-miR-144a-3p)的表达;采用双荧光酶素报告验证NORAD和hsa-miR-144a-3p的结合;通过RNA结合蛋白免疫沉淀(RIP)实验进一步验证LncRNA和miRNA的结合;细胞计数试剂8(CCK8)法检测各细胞处理后细胞活性。细胞克隆试验检测细胞增殖能力。结果:MM患者细胞系中NORAD常高表达,提示预后差,生存期短;敲除NORAD基因后,MM耐药细胞系对BTZ药物敏感性增加。MM患者hsa-miR-144a-3p高表达,在骨髓瘤细胞系中加用miR-144a-3p类似物时细胞增殖能力下降;NORAD低表达可显著抑制细胞增殖,细胞对药物敏感性增强。细胞克隆形成实验也证实NORAD低表达可抑制癌细胞增殖。结论:NORAD高表达可增强MM对BTZ化疗耐药性,NORAD可直接与hsa-miR-144a-3p结合,上调其在MM细胞中的表达,进一步调控癌细胞增殖,同时调控患者对BTZ药物敏感性。

乌苏里貉脾脏T、B淋巴细胞及其DNA和RNA分布规律的研究

用核酸的组织化学方法对乌苏里貉脾脏T、B淋巴细胞及其DNA和RNA的分布进行研究。结果表明:乌苏里貉脾脏T-淋巴细胞主要分布在中央动脉周围淋巴鞘为,其次是脾小结外周,边缘区和椭球周围。B-淋巴细胞主要居留在脾索为。DNA存在于T、B淋巴细胞核为,RNA存在于胞浆中,貉脾脏白髓动脉周围淋巴鞘发达,脾小结未见生发中心,椭球数量较多,但体积较小。脾小梁不发达。

“观察DNA和RNA在细胞中的分布”实验的再探索

“观察DNA和RNA在细胞中的分布”是高中生物学教材《分子与细胞》第二章第三节的实验，对帮助学生理解DNA和RNA在细胞中的分布有重要作用。教材中介绍了以人口腔上皮细胞作为材料的实验方法。此外，教材中也提出了可采用洋葱鳞片叶内表皮作为实验材料，但没有提供具体的实验方法。

梅花鹿巴氏杆菌病脾脏T．B淋巴细胞及其DNA和RNA分布的研究

用核酸的组织化学方法对梅花鹿巴氏杆菌病脾脏Ｔ．Ｂ淋巴细胞及其ＤＮＡ和ＲＮＡ的分布进行研究。结果表明：Ｔ－淋巴细胞主要分布在中央动脉周围淋巴鞘、脾小结外周、边缘区及椭球内。Ｂ－淋巴细胞主要存在于脾小结生发中心和脾索中。ＤＮＡ和ＲＮＡ的分布未见异常，即ＤＮＡ存在于淋巴细胞核，ＲＮＡ存在于淋巴细胞的胞浆中，脾脏被膜、小梁平滑肌肿胀，排列疏松，脾髓内含有大量血液。红髓发达，脾索中浆细胞增多，窦腔内网状细胞增殖，有大量黄血盐沉着。白髓不发达，被膜下有弥散性淋巴组织，生发中心不明显；中央动脉淋巴鞘发达。边缘区不明显。鞘毛细血管数量不多，体积也比较小。

“观察DNA和RNA在细胞中的分布”的实验教学设计

“观察DNA和RNA在细胞中的分布”属观察验证性实验，是对核酸知识学习后的验证。验证性实验不仅是训练操作技能，提供感性认识的一种手段，如果教师恰当地挖掘教材中的素材，还能借助实验载体达成多种知识能力目标，提高学生科学素质。

HBV RNA和HBV DNA在慢性乙型肝炎及乙型肝炎病毒相关肝细胞癌中的表达研究

目的探讨乙型肝炎病毒(HBV)RNA和HBV DNA在慢性乙型肝炎(CHB)及乙型肝炎病毒相关肝细胞癌(HBV-HCC)中的表达。方法以2021年6月至2023年6月在西安交通大学第一附属医院消化内科或感染科就诊的82例CHB患者和61例HBV-HCC患者为研究对象。检测两组的HBV DNA、HBV RNA、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、门冬氨酸氨基转移酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)及γ-谷氨酰转移酶(GGT)及乙型肝炎表面抗原(HBsAg)。比较两组的实验室指标,分析两组的HBV DNA与HBV RNA检出情况及相关性,分析HBV DNA与HBV RNA对HBV-HCC的诊断效能。结果CHB组的HBV DNA、HBV RNA载量及HbsAg阳性率高于HBV-HCC组(P<0.05);CHB组的ALT、AST、ALP及GGT水平低于HBV-HCC组(P<0.05)。两组的HBV RNA阳性率均略高于HBV DNA;对阳性数据做散点图结果显示,CHB组的HBV RNA载量高于HBV DNA(P<0.05);对HBV DNA和HBV RNA阳性数据行相关性分析结果显示,两组患者的HBV DNA与HBV RNA均呈正相关(P<0.05)。受试者工作特征(ROC)曲线结果显示,HBV RNA诊断HBV-HCC的曲线下面积(AUC)高于HBV DNA。结论HBV RNA在CHB进展为HBV-HCC的过程中具有比HBV DNA更优的临床监测价值。