长叶榧叶中对人体DNA多聚酶β的抑制成分

从长叶榧Torreyajackii叶中分得5种成分，经波谱分析及化学反应鉴定为二十烷醇（Ⅰ）、β-谷甾醇（Ⅱ）、反式璎珞柏酸（Ⅲ）、（＋）松脂素单甲醚（Ⅳ）和（＋）松脂素（Ⅴ），其中Ⅲ对人体DNA多聚酶β及白血病P388具有明显的抑制作用。

腺病毒载体介导的大鼠DNA多聚酶β重组体的构建及其在PC12细胞中的表达

【目的】为探讨DNA多聚酶β在神经细胞损伤中的作用与机制，构建其重组腺病毒载体，并在PC12细胞中表达。【方法】RT-PCR获取大鼠DNA多聚酶β(POLβ)的编码序列，TA克隆测序，酶切POLβ基因并连入穿梭质粒pAdTrack-CMV，电转至含腺病毒pAdeasy骨架质粒的大肠杆菌BJ5183。重组腺病毒质粒(pAd-polβ)和Lipofectamine2000转染293细胞，用重组腺病毒感染PC12细胞。【结果】10个TA克隆中有3个克隆的序列与GENE BANK中大鼠POLβ cDNA序列完全一致，同源重组检测时30个克隆中有8个含目标条带。DNA序列正确的POLβ重组腺病毒质粒转染293细胞后，感染Ad-polβ的293及PC12细胞荧光显微镜下可见绿色荧光，重组腺病毒Ad-polβPCR鉴定含目标条带，Ad-polβ感染PC12细胞Western Blot检测到POLβ蛋白表达。

大鼠DNA多聚酶β基因克隆及其腺病毒重组体构建

目的构建大鼠DNA多聚酶β基因克隆及其腺病毒介导的表达载体。方法提取大鼠脑组织总RNA,用逆转录PCR扩增DNA多聚酶β(POLB)的编码区,与T载体连接,作DNA测序后,酶切POLB基因并连入腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV,电转至含腺病毒pAdeasy骨架质粒的大肠杆菌BJ5183。酶切鉴定,重组腺病毒质粒(pAd-polb)和Lipofectamine2000转染293细胞,用293细胞扩增重组腺病毒。结果 8个TA克隆中有2个克隆的序列与GENE BANK中大鼠POLB cDNA序列完全一致。DNA序列正确的POLB重组腺病毒质粒 Ad-polb转染293细胞后,荧光显微镜下可见绿色荧光。结论用TA克隆和AdEasy系统,成功构建了大鼠 DNA多聚酶β的腺病毒重组体。

龙井茶和毛叶茶提取物对艾氏腹水癌细胞DNA多聚酶的抑制作用

目的：检验龙井茶和毛叶茶提取物对小鼠艾氏腹水癌细胞（ＥＡＣ）ＤＮＡ多聚酶（ｐｏｌ）的影响。方法：参照Ｋ．Ｏｎｏ法自小鼠艾氏腹水癌细胞（ＥＡＣ）中提取ｐｏｌ，用磷酸纤维素柱层析法分离，纯化Ｐｏｌα、β、γ，并加以鉴别。检验龙井茶及毛叶茶提取物对ｐｏｌ活性的影响。结果：龙井茶提取物对ＥＡＣＰｏｌα、β、γ抑制的ＩＣ５０分别为１０．２μｇ／ｍｌ、９．９μｇ／ｍｌ、２８．９μｇ／ｍｌ。毛叶茶提取物对ＥＡＣＰｏｌα、β、γ抑制的ＩＣ５０分别为５．６μｇ／ｍｌ、１５μｇ／ｍｌ和１４．７μｇ／ｍｌ。毛叶茶对ｐｏｌ抑制的作用方式是与模板ＤＮＡ产生非竞争性抑制。毛叶茶对Ｐｏｌα、β、γ的抑制常数（Ｋｉ值）分别为２．６８±０．１２μｇ／ｍｌ、２．２４±０．１２μｇ／ｍｌ、２．５６±０．１８μｇ／ｍｌ。结论：龙井茶和毛叶茶提取物均是ＤＮＡ多聚酶α、β、γ的抑制剂，毛叶茶对ＤＮＡ多聚酶抑制的作用方式是非竞争性抑制。

小蘖碱等20个植物药对肿瘤细胞DNA多聚酶及细胞生长的影响

目的 探讨20 个植物药对肿瘤细胞DNA多聚酶的作用及对肿瘤细胞生长的影响。方法 自对数生长期的小鼠艾氏腹水癌细胞中提取核酶液,根据Ono 法,以3H-dTTP掺入活化小牛胸腺DNA的量作为DNA 多聚酶活性指标。用MTT法测定药物对肿瘤细胞生长的影响。结果 巴马汀和小蘖碱抑制小鼠艾氏腹水癌细胞DNA 多聚酶,在100 μg/m l浓度下,巴马汀抑酶率为68.5 % ±6.0 % ,小蘖碱为68.6 % ±15.3 % ,其余18 个植物药均不抑制DNA多聚酶。小蘖碱对体外培养的人早幼粒细胞白血病HL60 细胞和人类淋巴母细胞CCRF-CEM 细胞均有抑制作用,IC50 分别为5.14 μg/m l和34.55 μg/m l。结论 巴马汀和小蘖碱均是肿瘤细胞DNA多聚酶的抑制剂。小蘖碱对体外培养的肿瘤细胞有抑制作用。对DNA 多聚酶的抑制作用可能是其抗瘤机制之一。

若干植物生长调节剂衍生物对 DNA 多聚酶及肿瘤生长的抑制作用

目的：为了在体外培养的肿瘤细胞中证实一组有生物活性载体：磺胺（ＳＵ）、９－氨基吖啶（ＡＣＤ）、异烟肼（ＩＮＨ）的植物生长调节剂４－氯（Ｍ）、２，４－二氯（Ｄ）或２，４，５－三氯（Ｔ）的萘氧乙酸、２，３，５－三氯苯甲酸（ＴＢ）、α－萘乙酸（ＮＡＡ）的衍生物对小鼠艾氏腹水癌细胞ＤＮＡ多聚酶（ＤＰ）的抑制作用，并筛选出抑酶力最强的化合物。方法：参照Ｋ．Ｏｎｏ法分离、纯化并检测ＤＰ活性。ＭＴＴ法测定对体外培养肿瘤细胞的ＩＣ５０。结果：１１个植物生长调节剂中５个化合物在１００μｇ／ｍｌ浓度下对ＤＰ粗酶抑制作用大于５０％，抑制率分别是Ａ８４０３（２，４－Ｄ－ＡＣＤ）７８．５±５．５％，Ａ８８４５（２，４，５－Ｔ－ＳＭＺ）７５．８±１６．０％，Ａ８６０１（ＮＡＡ－ＳＮ）７４．５±６．０％，Ａ８８７４（２，４，５－Ｔ－ＩＮＨ）７３．４±２．９％，Ａ８８７３（４Ｍ－ＩＮＨ）７１．０±１２．１％。其中Ａ８４０３（９－２，４－二氯苯氧乙酸氨基吖啶，２，４－Ｄ－ＡＣＤ）抑制ＤＰ能力最强。对ＤＰα的ＩＣ５０为３．４１４２μｇ／ｍｌ，对ＤＰβ的ＩＣ５０为３．７５２３μｇ／ｍｌ。Ａ８４０３对体外培养的低分化鼻咽癌ＣＮＥ－２细胞及ＨｅＬａ?

灵芝多糖对同种异型抗原刺激的小鼠脾细胞DNA多聚酶α活性的影响(英文)

去蛋白灵芝多糖是从芝灵Ganoderma lucidum(Leyss·ex Fr.)Karst子实体中提取的纯多糖部分,根据分子量不同,命名为GL-A,GL-B和GL-C。混合淋巴细胞培养反应是同种异型抗原(主要组织相容性抗原)刺激的特异性免疫反应。GL-A(16～250μg·ml^(-1)),GL～B(62～250μg·ml^(-1)),GL-C(16～250μg·ml^(-1))都可以明显促进混合淋巴细胞培养中脾细胞对[~3H]TdR的摄取。而且促进作用与药物浓度之间呈正相关。三种灵芝多糖还可以在同样条件下增加脾细胞中DNA多聚酶α的活性。但是在无细胞体系中,同样的药物浓度反而抑制[~3H]TTP参入酸不溶物。以上结果提示,去蛋白灵芝多糖可以促进由同种异型抗原刺激的淋巴细胞转化作用。其作用机制是通过间接诱导DNA多聚酶的产生,从而促进免疫细胞中DNA的合成和促进细胞的增殖,加速免疫应答过程。

基因表达谱芯片技术筛选HBV DNA多聚酶RNase H反式调节基因

目的:应用基因表达谱芯片(基因芯片)技术,检测乙型肝炎病毒DNA聚合酶RNaseH结构域蛋白(HBVDNAP RNaseH ,RNaseH)的表达对肝母细胞瘤细胞HepG2基因表达谱的影响,进一步阐明RNaseH对肝细胞基因表达的调节机制及其生物学功能。方法:以常规的分子生物学技术构建真核表达载体pcDNA 3 1(-) RNaseH ,以脂质体转染肝母细胞瘤细胞系HepG2 ,提取mRNA ,逆转录为cDNA ,与转染空白表达载体pcDNA 3 1(-)的HepG2细胞进行cDNA芯片分析。结果:RNaseH表达质粒转染的细胞有2 2 2条差异表达基因,其中113条基因表达水平上调,10 9条基因表达水平下调。结论:应用基因芯片成功筛选了RNaseH转染细胞后差异表达基因,为进一步阐明RNaseH的反式激活作用及免疫调节机制提供了新的依据。

用PCA方法选择HBV DNA多聚酶TP区VH抗体

目的:用PCA方法选择HBVDNA多聚酶TP区VH抗体.方法:从YeastDisplayscFvAntibodyLibrary中提取包含scFv抗体库的质粒pPNL6,扩增VH抗体片段.以HepG2.2.15细胞分泌的HBVDNA为模板,PCR扩增HBVDNA末端蛋白(TP).以TP区作为抗原,用PCA方法进行VH抗体选择.结果:PCR扩增的TP区共540bp.对HBVDNA多聚酶TP区进行抗体选择,用PCA方法从抗体库中选择出3个对应抗体,根据DNA序列和WernerMüller数据库可标明3个抗体.结论:对HBVDNA多聚酶TP区进行抗体选择,用PCA方法可以从抗体库中较为简便的选择出对应抗体.

DMTCCI对DNA引物酶-多聚酶α复合体活性的抑制作用及其细胞毒作用的研究

目的:研究碘化-3,3'-二乙基-9-甲基-硫杂羰花青(3,3'-Diethyl-9-methylthiacarbocyanineiodide;DMTCCI)对DNA引物酶-多聚酶α复合体的抑制作用,并观察其对多种肿瘤细胞株的细胞毒作用。方法:提取纯化艾氏腹水癌细胞DNA引物酶-多聚酶α复合体,液闪计数法测定其抑酶活性。用MTT法观察化合物对多种肿瘤细胞株的细胞毒作用。结果:18.5nmol/L、37.0nmol/L、111nmol/L、333nmol/L和1000nmol/LDMTCCI对DNA引物酶-多聚酶α复合体活性的抑制率分别为(27.9±1.3)%、(32.2±1.9)%、(39.2±1.5)%、(51.0±2.3)%和(77.8±1.8)%,其IC50值为(168.2±5.5)nmol/L。显示对DNA引物酶-多聚酶α复合体活性有强烈的抑制作用。MTT实验发现DMTCCI对4种肝癌细胞株Bel-7402、HepG2、Hep3B和SMMC的IC50值分别为(2.09±0.10)μmol/L、(3.84±0.08)μmol/L、(7.01±0.08)μmol/L和(4.91±0.08)μmol/L;对四种鼻咽癌细胞株HNE1、CNE1、CNE2和HK的IC50值分别为(5.27±0.03)μmol/L、(4.30±0.07)μmol/L、(1.78±0.05)μmol/L和(6.76±0.03)μmol/L;对人宫颈癌细胞株HeLa和人急性早幼粒细胞性白血病细胞株HL-60的IC50值分别为(3.23±0.02)μmol/L和(0.24±0.04)μmol/L。结论:DMTCCI对DNA引物酶-多聚酶α复合体活性有显著的抑制作用,并?

用简并寡核苷酸探针筛选对虾白斑综合征病毒DNA多聚酶基因片段

根据一些病毒的DNA多聚酶氨基酸序列中特有的保守序列VYGDTD设计的简并寡核苷酸 ,经地高辛标记后与对虾白斑综合征病毒基因库克隆杂交 ,筛选出一段长度为 70 7bp的EcoRI基因片段 ,该片段在一个开放阅读框内。并含DNA多聚酶B家族特有的保守序列YGDTDS。经与基因库比较 ,其氨基酸序列与藻类DNA病毒科 (Phycodnaviridae)的几株藻类病毒的DNA多聚酶片段有部分相似 ,因此推测该核苷酸片段为对虾白斑综合征病毒DNA多聚酶基因的部分序列。

耐热DNA多聚酶的研究与开发

PCR法的发明与耐热DNA多聚酶的应用 DNA多聚酶已广泛应用于基因探针的切口平移标记,双链DNA上的5′单链末端的填补或3′末端标记,cDNA互补链的合成,双脱氧法测定碱基序列以及体外专一性诱变等分子生物学方法。而耐热的DNA多聚酶至少在两个应用领域中比一般DNA多聚酶有其特殊的作用:其一是在体外扩增特定的基因;

鼻咽癌病人血清抗EB病毒特异性DNA多聚酶活性的研究

本文报道了111例鼻咽癌病人,30例其他癌瘤病人和93例正常人血清抗EB病毒DNA多聚酶抗体的水平。将血清抗酶率≥30％看作是该抗体阳性,血清阳性率分别是:鼻咽癌病人85.6％,其他癌瘤病人6.7％,正常人6.5％,鼻咽癌病人血清抗酶率与病人的病理、分期、病型、年龄及性别无关。检测该抗体可望发展成一种鼻咽癌早期诊断的辅助方法。 本文还探讨了影响检测结果的几个因素,认为用抗酶率表示抗体水平比用抗酶单位更好。

巢式PCR扩增梅毒螺旋体polA及其临床应用的研究

目的 建立一种检测临床标本中微量梅毒螺旋体 (Tp)的敏感、特异的方法。方法 运用常规及巢式PCR扩增了Tp的DNA多聚酶I基因 (polA)的特异性片段 ,检测了两方法的特异性和敏感性 ;与血清学方法比较 ,评价了两方法在诊断梅毒中的意义。结果 常规及巢式 polAPCR只在扩增Tp时有特异性产物 ,灵敏度分别约为 40个 /10 0 μl及 1个 /10 0 μl。检测 13 1份拟诊为梅毒的血清标本 ,血清学方法与巢式 polAPCR结果无显著性差异 ;巢式和常规 polAPCR结果有显著性差异 ,巢式PCR敏感性高于常规PCR。结论 巢式 polAPCR具有高度敏感、特异、标本处理简便等优点 ,适用于检测血清等标本中微量Tp ,可作为血清学方法的补充用于梅毒诊断。

MxA-88G/T和IFN-γ+874A/T位点多态性对地方流行区HBV感染自然转归的影响

目的:探讨常见影响乙型肝炎病毒(HBV)感染自然转归的宿主遗传因素在地方性流行区的作用。方法:收集华南地区100例HBV自限感染者(抗-HBs和抗-HBc均阳性)和340例慢性HBV感染者的外周全血,采用竞争分化聚合酶链反应技术为基础的方法进行MxA-88G/T和IFN-γ+874A/T基因分型。结果:MxA-88G/T的基因型在慢性HBV感染者和自限性感染者中的分布差异有高度显著性;与慢性感染患者相比,自限性感染者有较低的GG基因型(41.0%vs52.9%,P=0.036)和较高的TT基因型(16.0%vs2.4%,P=0.000)。然而,IFN-γ+874A/T的基因型在两组患者中的分布差异并无显著性;在慢性感染者和自限性感染者中,AA基因型分布率为65.0%vs72.8%(P=0.139),TT基因型为2.0%vs1.2%(P=0.894)。结论:常见影响HBV感染自然转归的宿主基因多态性在地方性流行区的作用有所改变,值得同类研究高度注意。