DMTCCI对DNA引物酶-多聚酶α复合体活性的抑制作用及其细胞毒作用的研究

目的:研究碘化-3,3'-二乙基-9-甲基-硫杂羰花青(3,3'-Diethyl-9-methylthiacarbocyanineiodide;DMTCCI)对DNA引物酶-多聚酶α复合体的抑制作用,并观察其对多种肿瘤细胞株的细胞毒作用。方法:提取纯化艾氏腹水癌细胞DNA引物酶-多聚酶α复合体,液闪计数法测定其抑酶活性。用MTT法观察化合物对多种肿瘤细胞株的细胞毒作用。结果:18.5nmol/L、37.0nmol/L、111nmol/L、333nmol/L和1000nmol/LDMTCCI对DNA引物酶-多聚酶α复合体活性的抑制率分别为(27.9±1.3)%、(32.2±1.9)%、(39.2±1.5)%、(51.0±2.3)%和(77.8±1.8)%,其IC50值为(168.2±5.5)nmol/L。显示对DNA引物酶-多聚酶α复合体活性有强烈的抑制作用。MTT实验发现DMTCCI对4种肝癌细胞株Bel-7402、HepG2、Hep3B和SMMC的IC50值分别为(2.09±0.10)μmol/L、(3.84±0.08)μmol/L、(7.01±0.08)μmol/L和(4.91±0.08)μmol/L;对四种鼻咽癌细胞株HNE1、CNE1、CNE2和HK的IC50值分别为(5.27±0.03)μmol/L、(4.30±0.07)μmol/L、(1.78±0.05)μmol/L和(6.76±0.03)μmol/L;对人宫颈癌细胞株HeLa和人急性早幼粒细胞性白血病细胞株HL-60的IC50值分别为(3.23±0.02)μmol/L和(0.24±0.04)μmol/L。结论:DMTCCI对DNA引物酶-多聚酶α复合体活性有显著的抑制作用,并?

色氨酸及其肽对cis-syn型1,3-二甲基胸腺嘧啶二聚体的光敏化裂解作用

通过荧光猝灭实验和测定二聚体裂解程度的辐照实验 ,研究色氨酸 (Trp)及其二肽色氨酰苯丙氨酸 (Trp Phe)对cis syn型 1,3 二甲基胸腺嘧啶二聚体 (DMTD)的光敏化裂解作用 .结果表明 ,色氨酸及其二肽在较强光 (λ >2 90nm)辐照下 ,主要通过双光子电离生成的水合电子 (e-aq)导致二聚体裂解 ,其次 ,通过激发单重态与二聚体间的电子转移导致二聚体裂解 .另外一导致二聚体裂解的可能途径 :色氨酸残基激发三重态与二聚体间的电子转移光敏化二聚体裂解 .

基于成簇的规律性间隔的短回文重复序列关联的失活核酸酶9-脱氧核糖核酸甲基转移酶3A基因复合体的O-6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶基因启动子区甲基化修饰对胶质瘤细胞替莫唑胺耐药性影响

目的探讨成簇的规律性间隔的短回文重复序列关联的失活核酸酶9-脱氧核糖核酸甲基转移酶3A基因复合体(CRISPR-dcas9-DNMT3A)介导的O-6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶基因(MGMT)基因启动子区域DNA甲基化修饰对胶质瘤细胞替莫唑胺(TMZ)耐药性的影响。方法 CRISPR-dcas9-DNMT3A表达载体通过慢病毒包装感染TMZ耐药细胞系U251-R[U251(中国医学科院基础医学研究所)通过替莫唑胺高浓度反复间歇诱导法诱导产生], 验证其对MGMT启动子区域DNA甲基化程度, MGMT表达水平以及TMZ药物敏感性影响。结果慢病毒感染成功的U251-R细胞, MGMT启动子区域甲基化水平增高[44.7%(17/38)、63.2%(24/38)、77.1%(27/38)比7.9%(3/38), P<0.05], MGMT蛋白表达减少, 细胞对TMZ化疗的敏感性增加(P<0.05)。结论 CRISPR-dcas9-DNMT3A慢病毒感染的U251-R细胞可通过增加其MGMT基因启动子区域甲基化水平减少MGMT蛋白表达从而增加化疗敏感性。

HLA-DR、DQ等位基因与精神分裂症相关性的研究

目的 证明HLA DR、DQ等位基因与精神分裂症的发病密切相关。方法 HLA DR、DQ等位基因检测 :PCR SSP分型。结果 发现在大连地区随机选择的精神分裂症患者的HLA DQ8基因的频率 (9.0 % )明显高于正常对照 (2 .5 % )。精神分裂症患者的HLA DR、DQ等位基因的某些位点与免疫指标的改变有相关性。结论 ①HLA DQ8基因与精神分裂症有关联 ,可以认为HLA DQ8基因可能是精神分裂症的易感基因。②HLA DR、DQ等位基因的某些组合可能是精神分裂症发病的危险组合模式 ,对预测精神分裂症的基因易感性具有潜在的应用价值。③精神分裂症的免疫指标的改变与HLA DR、DQ等位基因的某些位点有相关性 ,说明精神分裂症与它的免疫指标的变化可能有内在的联系。

宫颈癌中C-Ha-ras癌基因点突变的研究

宫颈癌是妇女生殖系统最常见的恶性肿瘤,严重威胁着我国妇女的身体健康和生命安全,对宫颈癌癌基因的研究有助于宫颈癌的早期诊断、防治以及肿瘤的分型。我们在国内首次将体外基因扩增技术(即PCR技术)应用于宫颈癌癌基因的研究,先人工合成两个特异性的寡核苷酸引物,在耐热DNA多聚酶的催化下,将宫颈癌DNA中C-Ha-ras癌基因第一个外显子的核苷酸序列放大百万倍左右,再以同位素标记的特异寡核苷酸探针杂交。

HLA-DR1、3、15与新疆地区人群变应性鼻炎的关联分析

目的:研究人类主要组织相容性复合体HLADR1、3、15等位基因在新疆地区人群变应性鼻炎(Allergicrhinitis,AR)中的表达及意义。方法:采用聚合酶链反应序列特异性引物(PCRssp)技术对42例新疆地区变应性鼻炎患者(AR组)的HLADR1、3、15等位基因进行检测,另选择同地区45例体检健康者(对照组)进行对照研究。结果:变应性鼻炎组携带HLADR1、3、15等位基因的频率分别为10.71%、0%、21.42%,对照组分别为1.11%、3.33%、4.44%。两组携带HLADR1、15等位基因的频率差异有统计学意义(P<0.05)(比数比分别12.00和7.69。)。结论:HLADR1和HLADR15等位基因是新疆地区人群中变应性鼻炎重要危险基因。

人细胞间黏附分子1cDNA的克隆及表达载体的构建

目的构建人细胞间黏附分子-1真核表达重组体pcDNA3.1hisB-ICAM-1。方法设计、合成ICAM-1基因序列特异性引物,从肝癌组织中提取总RNA,以此为模板经RT-PCR扩增人ICAM-1的cDNA片段;然后将其克隆到pGEM-TEasyVector,构建中介重组体(pGEM-ICAM-1),再克隆,构建真核表达重组体pcDNA3.1HisB-ICAM-1,经菌落PCR和限制性酶切有目的片段出现,进行DNA序列分析。结果RT-PCR扩增得到人成熟ICAM-1的cDNA片段大小为1622bp,中介重组体(pGEM-ICAM-1),酶切后与真核表达载体连接,根据酶切鉴定和DNA序列分析得到真核表达重组体pcDNA3.1HisB-ICAM-1;结论成功构建了真核表达重组体pcDNA3.1HisB-ICAM-1。

A基因型HBV转基因小鼠的品系恢复

HBV为3 200bp双链不完全环状的DNA结构,其DNA具有高度突变性,可形成不同基因型,目前分为10种（A-J）。A型多分布于西欧、南非、美国等,此地区中HBV感染者约90%为A型,而我国多见B和C型。近年我国A型HBV感染逐渐增多,但受体外试验模型限制。

中性粒细胞胞外诱捕网可增加脓毒症发生风险——一项两样本单向孟德尔随机化研究

目的:基于孟德尔随机化分析方法,探讨中性粒细胞胞外诱捕网(NET)与脓毒症的因果关系。方法:选择基于Donkel等对荷兰鹿特丹研究(RS)分析结果的针对NET生物标志物髓过氧化物酶(MPO) -DNA复合体全基因组关联分析(GWAS)数据集,以及英国生物样本库(UK biobank)中识别脓毒症的相关GWAS数据集,以MPO-DNA复合体为暴露因素,筛选与MPO-DNA复合体相关的单核苷酸多态性(SNP)作为遗传变异工具变量(IV)。采用两样本单向孟德尔随机化主要分析方法逆方差分析法(IVW)分析MPO-DNA复合体与脓毒症、脓毒症28 d死亡、因脓毒症需重症监护、需重症监护的脓毒症28 d死亡的潜在因果关系。利用MR Egger回归截距检验评估SNP水平多效性;采用"leave one out"检验进行敏感性分析。结果:GWAS数据均来源于欧洲人群,男女不限,以孟德尔随机化三大假设为前提设置筛选标准,最终22个SNP纳入孟德尔随机化分析。采用IVW方法进行孟德尔随机化因果关联效应分析结果显示,MPO-DNA复合体水平每增加1个标准差,脓毒症发生风险上升约18%〔优势比( OR)=1.18,95%可信区间(95% CI)为1.07~1.29, P<0.001 〕,脓毒症28 d死亡风险上升约51%( OR=1.51,95% CI为1.27~1.81, P<0.001),因脓毒症需重症监护的风险上升约38%( OR=1.38,95% CI为1.12~1.70, P=0.002),需重症监护的脓毒症28 d死亡风险上升约125%( OR=2.25,95% CI为1.21~4.18, P=0.010);MR Egger回归截距检验提示纳入的SNP不存在水平多效性,MR-PRESSO检验未发现离群值;敏感性分析提示孟德尔随机化结果稳健。 结论:通过孟德尔随机化分析得出NET水平升高可增加脓毒症的发生、恶化及死亡风险。