机械点样DNA微点阵技术及其在基因表达分析上的应用(I)

从芯片制作、芯片杂交、芯片扫读与图像分析、基因表达数据分析等方面,详细介绍了机械点样DNA微点阵技术及其应用于多基因表达分析的基本步骤与原理。

DNA微点阵分析丙型肝炎病毒非结构蛋白NS4B对信号传导相关基因表达的影响

目的采用DNA微点阵(DNAmicroarray)技术检测致癌相关基因的表达水平,研究丙型肝炎病毒(hepatitisCvirus,HCV)非结构蛋白NS4B在HCV致癌中的作用。方法通过建立稳定表达NS4B的细胞系,用微点阵技术研究NS4B对细胞基因表达的影响,实时定量RT-PCR分析微点阵结果中的两个上调基因(DKK1,FYN)和两个下调基因(AKR1C1,v-fos)的表达,对细胞中AKR1C1的活性进行酶学分析。结果在2308个信号途径相关的基因中,34个基因表达上调,56个基因表达下调。在表达有明显差异的基因中,大部分原癌基因表达上调,而大部分抑癌基因的表达下调;一些基因与细胞压力有关。实时定量RT-PCR和AKR1C1的酶学分析进一步证实了DNA微点阵的结果。结论HCV-NS4B在HCV的致癌过程中起一定作用。

细菌基因转录谱的DNA微点阵芯片分析

基于DNA微点阵芯片技术的细菌基因转录谱研究是基因功能分析的重要手段之一。本文阐述了细菌DNA芯片基因转录谱分析的基本问题 ,包括mRNA和双色荧光实验设计 ,详细介绍了目前细菌体内外DNA芯片基因转录谱的具体应用情况 。

机械点样DNA微点阵技术及其在基因表达分析上的应用(II)

从芯片制作、芯片杂交、芯片扫读与图像分析、基因表达数据分析等方面,详细介绍了机械点样DNA微点阵技术及其应用于多基因表达分析的基本步骤与原理。

实验诊断技术在儿童化脓性脑膜炎诊断中的应用

化脓性脑膜炎疾病危害大,易导致儿童致死致残。化脓性脑膜炎的诊断是根据脑脊液的分析来推断,包括白细胞计数及分类,葡萄糖和蛋白质测定以及革兰染色,诊断的金标准是脑脊液细菌培养。然而诊断的敏感度通常较低,需要至少24~48 h才能得出确定结论,检验精确度有限,所以需要新的有诊断价值的生物标记帮助临床医师早期正确的决策,大量研究证实,有些细胞因子具有很好的诊断价值。微生物在脑脊液及缺血脑组织中的无氧代谢可以导致局部乳酸产生,而且这个过程不受血液乳酸水平的影响;铁蛋白是急性期反应物,感染后血清浓度会急剧上升,同时脑脊液铁蛋白水平也会升高;化脓性脑膜炎与失控及过度表达的细胞因子有关,包括肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1β、IL-6及IL-10等,细胞因子是小分子蛋白,部分能通过血脑屏障,影响脑脊液中细胞因子水平。以核酸探针为基础的聚合酶链反应分析是被广泛认可的细菌病原体检测方法,与细菌培养相比,具有更快的速度及更高的敏感度。本研究主要阐述上述生物标记包括乳酸、铁蛋白、TNF-α、IL-1β、IL-6及IL-10在儿童化脓性脑膜炎中的诊断价值及DNA微点阵分析在诊断中的优势,为儿童化脓性脑膜炎的诊断提供参考。

软肝冲剂抑制血管紧张素Ⅱ诱导的肝星状细胞上调基因的表达

目的:旨在研究软肝冲剂是否通过抑制血管紧张素Ⅱ(AngiotensinⅡ,AngⅡ)诱导的肝星状细胞(HSCs)上调基因起作用。方法:用DNA微点阵分析用AngⅡ(10-8M)以及AngⅡ和软肝冲剂(2.5mg/L)处理的HSCs与对照组之间基因的差异性表达,其结果用实时定量RT-PCR证实。用Westernblot分析软肝冲剂对HSCs在AngⅡ诱导下的胶原蛋白的表达,ELISA分析有生物活性的TGF-β1的含量。结果:软肝冲剂能抑制AngⅡ诱导HSCs上调基因的表达,特别是一些细胞外基质和细胞因子如IL-13,IL-15,MCP-2,TGF-1,TGF-2,细胞因子受体基因,如TGF-1受体。分泌到细胞培养基中的胶原蛋白和有生物活性的TGF-β1也被抑制。结论:软肝冲剂抑制AngⅡ诱导HSCs上调的基因的表达,这可能是软肝冲剂治疗肝纤维化和肝硬化的机制之一。

丙型肝炎病毒非结构蛋白NS4B抑制IFN介导的抗病毒反应

丙型肝炎病毒(Hepatitis C Virus,HCV)非结构蛋白NS4B的功能仍不很清楚。本实验旨在研究NS4B对干扰素介导的抗病毒反应的影响。建立稳定表达NS4B的细胞系后,用空斑实验研究NS4B在不同浓度的IFN_α下对水泡口炎病毒(VSV)的影响,利用代表2308个信号传导相关的基因的微点阵研究其对细胞基因表达的影响,和流式细胞仪分析IFNGR1的荧光强度。结果显示HCV_NS4B能微弱地抑制IFN_α介导的抗病毒反应,可能原因是HCV_NS4B抑制一些与免疫反应相关的基因的表达,特别是与IFN_γ信号传导有关的基因。因此,NS4B对HCV耐受干扰素治疗起一定的作用。

全球控制结核病的展望

本文概述了结核杆菌基因组的特点和用ＤＮＡ微点阵技术阐明ＢＣＧ的体外进化、基因缺失与疫苗效力改变的关系，为全球控制结核病展现了良好前景。

肝癌分子预测技术的研究（上）

1．序论 在生物医学研究和药物的使用中，新技术的开发已经取得了很大的进步。例如荧光DNA序列测定分析技术的发展，使得建立大规模的、高流通量技术满足人类基因组序列的需要成为可能。多聚酶链反应（PCR）、荧光DNA测序分析以及其它技术已经能够发现大约1700个孟德尔氏遗传病的基因。现在以技术学为基础的DNA微点阵的出现已经有可能在不同组织中，同时测量多种疾病的数以千计基因的表达。这种高流通量技术已经为生物医学科学家提供了一种独特的机会来整体描述生物系统特性（即表型），目前正在利用基因组的数字显示装置（即基因表达）进行研究。

Genomica公司上市其H1N1流感诊断试剂盒

Genomica公司（Zehia集团）已上市其新的H1N1流感诊断试剂盒。该试剂盒名为CLART（R）FluAVir，可以鉴别患者是否感染H1N1流感，以及患者感染流感的亚型。该DNA微点阵测试可以在8h内给出结果，并且每8h可以同时处理多达96例患者的样本（Genomica新闻）。