用于转基因植株检测的DNA快速微量提取方法

建立了一个用于转基因小苗检测的ＤＮＡ快速微量方法．每２０ｍｇ新鲜叶片可提出约１０ μｇ ＤＮＡ，且 ＤＮＡ有较好的完整性，Ａ２６０／２８０值在１．７～１．９范围内，并适合于点杂文和ＰＣＲ分析．

鲜榨果汁基因组DNA快速提取方法的建立及优化

目的建立及优化鲜榨果汁基因组DNA快速提取方法。方法本研究比较了植物DNA快速提取试剂盒法、棉签法、纤维素膜片法和滤纸片法4种方法提取15种鲜榨果汁基因组DNA的效果,并筛选不同的提取液和裂解液、优化裂解液中的盐酸胍浓度和果汁基因组提取时间。结果滤纸片法采用DNA裂解液(6 mol/L盐酸胍、1%聚乙烯吡咯烷酮、50 mmol/L三羟甲基氨基甲烷盐酸盐、20 mmol/L乙二胺四乙酸、21.3 mmol/L曲拉通-X-100;pH 6.4)、DNA漂洗液3(8 mol/L盐酸胍、50 mmol/L三羟甲基氨基甲烷盐酸盐;pH 6.4)和DNA漂洗液4(10 mmol/L三羟甲基氨基甲烷盐酸盐、100 mmol/L氯化钠;pH 8.0)即可在5 min内从鲜榨果汁中提取得到适用于聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)的基因组DNA。结论本研究建立的滤纸片法不需要离心机等昂贵的仪器设备、操作简单、无刺激性气味、无环境条件限制,具有快速、价廉、环保等优点,为果汁基因组DNA快速提取与现场鉴定研究提供了参考。

锈菌夏孢子DNA的微量快速提取方法

采用4种方法对毛白杨锈病单个夏孢子堆DNA提取和ITS-PCR扩增表明,钢珠法、玻片法均是锈菌基因组DNA微量快速提取的合适方法,以钢珠法最优,整个过程仅需30min,并且可以获得与CTAB法、氯化苄法相同的PCR扩增结果。钢珠法是在提取液中加入2～3颗钢珠,靠钢珠在涡旋中的相互碰撞将夏孢子破壁,以同时加入NaOH(终浓度3.3%)和Chelex-100(终浓度1.6%)效果最好,ITS-PCR扩增能稳定得到700bp片段。玻片法也能得到相同的结果。分析比较了4种方法的优缺点。

一种快速微量提取植物叶片DNA的方法

介绍了一种快速提取微量DNA的方法。该方法简单易行,无需任何特殊设备,所需样品量少。提取的DNA纯度高,D260nm/D280nm在1.9～2.1之间,可满足RAPD、SSR、转基因植株的PCR检测等以PCR扩增为基础的实验需要。

三种水稻基因组DNA快速提取方法的比较

用分子标记辅助选择进行精细定位和遗传改良时,首先就需要大批量提取植物DNA,作为PCR反应的模板。水稻基因组DNA常用的简易提取方法有碱处理法和高温水煮法等,本文改进了常规的CTAB方法,提出另一种简便的高质量DNA提取方法,称“简化法”,并比较了这三种方法提取的DNA在数量、质量上的差异,以及作为PCR模板时扩增效果,确定了在精细定位和遗传改良时“简化法”是一种较优的方法。

一种简易的拟南芥幼苗微量DNA提取方法

报道了一种简易的拟南芥幼苗微量DNA提取方法。该方法可在常温下进行DNA提取,而且样品用量少,仅需10mg左右,用100μL重蒸水回溶DNA沉淀所获得的粗提液可直接用于PCR检测。结果表明:应用该法提取的DNA完整性好,PCR效果佳,适用于拟南芥转基因植株鉴定。

玉米单株幼芽DNA快速提取新方法

为了攻克利用DNA指纹技术进行玉米种子纯度鉴定中存在的技术难关,对玉米单株幼芽DNA快速提取 方法进行了研究,结果表明:利用新方法提取DNA,不用液氮、不用研磨、不用离心、不用沉淀,不用SDS、不用CTAB、 不用氯仿,并且提取的DNA不降解、完全可以满足利用SSR分子标记进行DNA指纹分析的需要。一个人提取100 株幼芽(1个检测样品)DNA只需30 min左右,1 d可以提取2000株幼芽(20个检测样品)的DNA,为DNA指纹技术 在玉米种子纯度及真伪快速鉴定中的广泛应用解决了关键性技术难题。

一种适宜PCR检测的番茄DNA微量提取方法

通过比较DNA微量提取方法和3种常规提取方法得到的DNA质量和PCR扩增结果,找到一种适用于番茄PCR技术的快速、简单、成本低的DNA提取方法。该方法的材料不用液氮,避免使用酚类、氯仿等有毒试剂,可以单人大批量提取,并在番茄分子标记辅助育种中能稳定而准确的规模化PCR检测。

绿豆核DNA的快速提取方法研究

为缩短提取核DNA的时间 ,提高DNA的得率 ,对绿豆核DNA的提取条件进行了优化。用 4 0 0ml细胞提取液 ,2 50ml饱和KCl溶液 ,0 30倍样液体积的酚 /氯仿 /异戊醇 ( 2 1∶2 8∶1 )溶液 ,0 30倍样液体积的氯仿 /异戊醇溶液 ,0 90倍体积的异丙醇 ,可从 1 0g绿豆芽中提得 4 0mg纯DNA。

快速提取细菌DNA方法的研究

目的:研究快速、有效可以应用于压电基因传感器对病原微生物的快速检测的DNA的提取方法。方法:采用沸水浴法,酚、氯仿法,chelex1 0 0法和试剂盒法提取金黄色葡萄球菌ATCC2 5 92 3、铜绿假单胞菌ATCC 2 785 3和大肠杆菌ATCC 2 5 92 2的DNA对产物进行纯度和产量测定,并对1 6SrDNA区域利用通用引物进行扩增。初步应用自行研制的压电基因传感器检测金黄色葡萄球菌ATCC2 5 92 3的PCR产物。结果:除沸水浴法,其他3种方法均能抽提出3种细菌的DNA与1 0 0法和酚、氯仿法抽提产物的纯度和产量差异无显著性(P >0 .0 5 ) ,但chelex1 0 0法操作更为简单、成本低;试剂盒法抽提出的产物纯度和产量明显高于酚、氯仿法、chelex1 0 0法P <0 . 0 5 ) ,但成本高,操作繁琐。结论:chelex1 0 0法操作简便、省时、成本低,适宜用于压电传感器样本的预处理。

一种少量提取植物组织DNA的快速方法

为了从植物组织中快速提取核酸,从多种DNA提取方法中遴选出2种基本方法。通过优化基本方法的操作步骤、试剂用量与作用时间,建立了一种改良的DNA快速提取方法。在此方法中,用氯仿代替液氮或提取液进行植物组织研磨,之后加入提取液抽提DNA,并用氯仿-异戊醇反复抽提,可显著降低蛋白质含量;通过应用RNA酶可获得纯度较高的DNA。该方法的特点是在室温下即可进行简便操作,快速(提取核酸的过程仅需30min),污染器皿少,实用性强,提取物产量高,纯度好。

微量DNA高效提取方法

[目的]探究一种高效的提取微量地衣体及地衣共生菌DNA的方法。[方法]在CTAB法的基础上,对溶液成分、比例及应用硅基质吸附柱对微量DNA提取进行优化。[结果]对于叶状、枝状和壳状地衣,采用该方法可得到质量较高的DNA。[结论]所用方法既节约样品,简便易行,费用低,稳定性好,效率高,而且不局限于新鲜材料。

Sorghum属7个近似种的DNA微量提取方法比较

本研究以Sorghum属中 7个近似种的种子为试验材料 ,采用CTAB、SDS、CTAB与SDS相结合及TaKaRaDNA提取试剂盒等 4种方法提取DNA ,并对不同提取方法所获取的DNA纯度、浓度及DNA提取率进行研究分析比较。结果表明 :采用Moller方法对其 7个近似种的基因组DNA的提取为最佳方法。

一种适于PCR检测病毒诱导基因沉默番茄植株的微量DNA提取方法

【研究目的】为了寻找一种适用于病毒诱导的基因沉默番茄叶片PCR检测的快速、简单、成本低的DNA提取方法。【方法】笔者根据PCR反应的要求,用改良的CTAB法,实现了微量番茄叶片基因组DNA的快速提取。【结果】提取基因组DNA所用的组织量虽少,所得的DNA经过电泳检测虽有降解,但足以用于PCR检测,以其作模板扩增中国番茄黄化曲叶病毒诱导的硫黄素酶(Su)基因沉默植株中病毒组分中的DNAmβ和1.7A,片段大小分别为500bp、1300bp。测序结果证明是相应基因的部分片段。【结论】该方法的材料不需要使用液氮,可以单人大批量提取,并在基因沉默的番茄植株中能稳定而准确的规模化PCR检测。

一种改进的水稻总DNA的快速提取方法

植物总DNA的提取质量是植物分子生物学操作成败的关键 ,一个优秀的总DNA提取方法往往可以达到事半功倍的效果。本文以水稻叶片为材料 ,提出了一种改进的植物叶片总DNA快速提取方法 ,该方法能在 35min之内提取到水稻总DNA。电泳结果表明此改进方法提取的总DNA产量与传统CTAB法相当 ,PCR扩增结果表明其质量可靠 。

柑橘黄龙病病原DNA微量提取方法比较

对比分析了3种黄龙病病原DNA微量提取方法,方法1和方法2分别采用Sandrine等人和Hung等人的黄龙病病原DNA提取方法,但取样量分别由100mg和250mg减少为20mg和10mg;方法3采用周常勇等人的微量核酸提取方法,取样量为10mg。实验结果表明方法1提取的病原DNA浓度低、杂质多,PCR效果差;方法2提取的病原DNA浓度较高、杂质少,PCR效果好,但提取周期较长,不适合大批量样品的PCR快速检测;方法3提取的病原DNA浓度较高、杂质少,PCR效果好,且提取速度快,适宜大批量样品的PCR快速检测。

嗜麦芽黄单胞菌基因组DNA快速提取方法

目的 建立一种快速简便提取嗜麦芽黄单胞菌 (X anthomonas maltophilia)基因组 DNA的方法。方法 用去污剂 SDS和 CTAB破坏细胞膜结构 ,使胞内核酸释放 ,用酚 /氯仿 /异戊醇去除蛋白质 ,异丙醇沉淀DNA,TE溶解 DNA。结果 提取的 DNA琼脂糖电泳图谱与 Hauben及 Dufresne方法提取的 DNA图谱相同 ,DNA含量为 34 2～ 388μg/ m l,OD2 60 / OD2 80 为 1.88～ 1.90。 DNA能被 Eco R 酶切消化。结论 本方法能快速简便提取 X.maltophilia DNA,提取的 DNA含量较高、纯度较好 ,可用于酶切分析、构建文库及 PCR操作。

四种微量全血DNA提取方法的比较

目的比较加热去蛋白法、碘化钠法、TT溶血法、氯化胺法四种方法提取人微量全血基因组DNA的纯度及总量的差异。方法收集静脉全血0.5ml,共356人份,分别采用上述四种方法提取基因组DNA,用紫外分光光度仪及琼脂糖凝胶电泳检测其纯度和总量,计算采用x±s,结果经统计学t检验处理。结果四种方法提取的基因组DNA纯度用OD260/OD280表示分别为:加热法1.569±0.158;碘化钠法1.517±0.093;TT溶血法1.789±0.161;氯化胺法1.815±0.051。四种方法提取的基因组DNA总量分别为:加热法(9.34±3.59)μg;碘化钠法(7.82±4.23)μg;TT溶血法(20.98±3.56)μg;氯化胺法(22.07±4.53)μg;加热法与碘化钠法比较,TT溶血法与氯化胺法比较,P>0.05,无显著性差异;TT溶血法、氯化胺法分别与加热法、碘化钠法比较,P<0.05,有显著性差异。结论从提取的基因组DNA纯度和总量来比较,氯化胺法与TT溶血法是四种提取人微量全血基因组DNA方法中较好的两种。

一种快速提取小鼠基因组DNA的方法

本文建立一套简易、快速从小鼠肝（肾）组织中提取高分子量ＤＮＡ的方法，此法产率高，比较经济，其纯度可直接应用于ＰＣＲ进行小鼠遗传监测。