共刺激分子B7H3通过调控DNA拓扑异构酶Ⅱα的表达对乳腺癌多柔比星化疗的影响

目的探讨共刺激分子B7H3(costimulatory molecule B7H3,B7H3)通过调控DNA拓扑异构酶Ⅱα(DNA topoisom eraseⅡalpha,TOP2A)的表达对乳腺癌多柔比星化疗敏感性的影响。方法收集临床标本,采用免疫组织化学染色验证B7H3表达与多柔比星化疗敏感性的相关性。采用成簇规律间隔短回文重复/Cas9基因编辑技术敲除B7H3,通过蛋白质印迹法和流式细胞术验证敲除结果。采用半抑制浓度值分析、集落形成、蛋白质印迹法检测凋亡蛋白、荧光双染色检测凋亡细胞以及细胞周期测定等方法验证B7H3表达与多柔比星作用的敏感性。小干扰TOP2A及其过表达TOP2A回复实验检测细胞凋亡。构建小鼠皮下成瘤模型验证体内B7H3表达与多柔比星化疗的作用。结果高表达B7H3的肿瘤组织对多柔比星治疗更加敏感。成功构建B7H3敲除的乳腺癌细胞。B7H3高表达的乳腺癌细胞对多柔比星作用更敏感。B7H3通过激活核因子κB(nuclear factor-κB,NF-κB)途径促进TOP2A的表达,进而增加乳腺癌细胞对多柔比星作用的敏感性。小鼠体内实验证明,B7H3高表达可增加乳腺癌对多柔比星化疗的敏感性。结论B7H3通过激活NF-κB通路调控TOP2A的表达使乳腺癌对多柔比星化疗更敏感。

消化道恶性肿瘤组织中P糖蛋白、DNA拓扑异构酶Ⅱ及谷胱甘肽转移酶π亚型的表达

目的:检测P糖蛋白(P-gp)、DNA拓扑异构酶Ⅱ(TopoⅡ)和谷胱甘肽转移酶π亚型(GsTπ)在消化道恶性肿瘤组织中的表达,并初步探讨其临床意义。方法:用免疫组化法检测P-gp、TopoⅡ和GSTπ在47例消化道恶性肿瘤(食管癌15例,胃癌12例,结直肠癌15例,肝癌4例,胆囊癌1例)组织中的表达,并对其与病理参数的关系进行了研究。结果:(1)在食管癌、胃癌及结直肠癌组织中,P-gp表达阳性率分别为0、16.7％和66.7％;TopoⅡ表达阳性率分别为86.7％、91.7％和100％;GSTⅡ表达阳性率分别为20.0％、25.0％和48.9％。(3)P-gp和GSTπ表达有明显相关性(r=0.979,P<0.05)。(2)P-gp和GSTπ表达的阳性率在胃癌肠型与弥漫型、高和中分化型腺癌与低分化型腺癌之间均无统计学差异(P>0.05);而结直肠癌高分化型腺癌组织中P-gp的表达阳性率显著高于中分化型腺癌(P<0.05)。结论:P-gp、TopoⅡ与GSTπ在食管癌和胃癌的多药耐药表型中的作用有限;结直肠癌的耐药表型与P-gp表达密切相关。

新型非喹诺酮类细菌ⅡA型拓扑异构酶抑制剂抗菌药物研究进展

自1962年第一代喹诺酮类药物萘啶酮酸发明以来,成百上千种可分为四代的喹诺酮衍生物已经被成功合成,并且细菌ⅡA型拓扑异构酶(DNA旋转酶和拓扑异构酶IV)已经被确认为该类抗菌药物的作用靶点。先前研究表明:细菌DNA复制过程对菌体生长与存活至关重要,而这一过程需要DNA旋转酶和拓扑异构酶IV的共同作用。在过去50多年中,喹诺酮类药物的广泛使用也说明这一药物作用靶点在临床治疗上的重要性;但是由于对喹诺酮类药物不恰当的使用乃至滥用,导致细菌耐药性的逐步上升,为确保这一行之有效的抗菌药物作用靶点继续发挥其良好的治疗效果,研发作用于该靶点的非喹诺酮类抗菌药物来克服现有的喹诺酮耐药迫在眉睫。

粪肠球菌Ⅱ型拓扑异构酶基因突变与耐氟喹诺酮类药物关系的研究

目的检测粪肠球菌对氟喹诺酮类药物的敏感性，探讨Ⅱ型拓扑异构酶基因突变与耐氟喹诺酮类药物的关系。方法用二倍琼脂稀释法检测6种氟喹诺酮类药物对60株粪肠球菌临床分离株的体外抗菌活性，随机筛选出11株对环丙沙星不同程度耐药菌，PCR扩增gyrA，gyrB，parC，parE基因的喹诺酮耐药决定区（QRDR），产物测序后分析。结果6种药物的相对抗粪肠球菌活性（MIC50，MIC90）从强到弱为：妥舒沙星〉加替沙星，司帕沙星〉左氧氟沙星〉氧氟沙星，环丙沙星；以妥舒沙星抗菌活性最强，氧氟沙星和环丙沙星抗菌活性最差；序列比较发现，有9株耐药株Ⅱ型拓扑异构酶基因发生突变，突变发生在gyrA基因（6株）和parC基因（9株），其中编码gyrA的Ser83→Ile，Arg和编码parC的Ser80→Ile，Arg的密码子表现出高频突变，gyrB和pare编码的氨基酸序列没有改变；未发现gyrA突变单独存在，同时具gyrA和parC突变的MIC值是仅具parC突变菌株MIC值的4倍以上。结论氟喹诺酮类抗菌药新品种妥舒沙星、加替沙星和司帕沙星的抗粪肠球菌活性较老一代药物更强；粪肠球菌对老一代氟喹诺酮类药物存在不同程度的耐药；gyrA基因83，87位突变及parC基因80，84住突变都可引起粪肠球菌对氟喹诺酮类药物产生耐药，但以parC基因80住突变为主；低耐药株往往是parC基因单位点突变，高耐药株同时合并有gyrA基因双位点突变。

DNA拓扑异构酶Ⅱ与白血病细胞的不典型耐药

白血病细胞耐药是引起化疗失败的主要原因,机制复杂。DNA拓扑异构酶Ⅱ(TopoⅡ)表达异常是引起多药耐药(MDR)的主要机制之一,不同于P-170介导的经典耐药,被冠以不典型耐药(at-MDR)。本文就TOPOⅡ的生物学特性、介导at-MDR的机制、临床意义和逆转at-MDR的策略等方面进行综述。

喹啉酮类药物与细菌Ⅱ型拓扑异构酶的结合模式

细菌Ⅱ型拓扑异构酶是细菌DNA复制和细胞存活所必需的酶,可作为抗菌药的靶点。本文运用AutoDock4.2对接软件,将30种抑制剂对接到细菌II型拓扑异构酶的活性中心。结果显示,活性口袋中残基Asp73、Arg136与抑制剂分子形成氢键网络,将抑制剂分子固定在活性中心,使得抑制剂与酶结合更加稳定。其中抑制剂分子11、19、21、22、23号结合能最大,分别为-11.79、-10.93、-12.24、-11.71、-11.49kcal/mol,与细菌Ⅱ型拓扑异构酶结合得最稳定。计算结果为改进氟喹诺酮类药物对细菌Ⅱ型拓扑异构酶的抑制作用提供了重要的数据依据,为以后新抗菌素药物的开发提供帮助。

原花青素对MNNG致DNA损伤及拓扑异构酶Ⅱ的影响

目的 观察原花青素对DNA损伤的保护作用及对黑色素瘤细胞中拓扑异构酶的影响 ,探讨原花青素癌化学预防的作用机制。方法 单细胞电泳法检测羟自由基对L92 9细胞DNA损伤的尾迹 ,用 [H3]TdR参入细胞DNA中进行标记 ,测定上清液中的放射强度来判定MNNG对DNA损伤 ;从黑色素瘤肿瘤细胞中提取拓扑异构酶 ,用琼脂糖凝胶电泳测定活性。结果 原花青素可以减轻DNA损伤尾迹及MNNG对DNA的损伤。但对黑色素瘤肿瘤细胞中拓扑异构酶无抑制作用。结论 原花青素对羟自由基及致癌剂MNNG引起的细胞DNA损伤有一定的保护作用。

骆驼蓬种子提取物及其β咔保啉生物碱对DNA拓扑异构酶Ⅱ活性的抑制作用

目的探讨去氢骆驼蓬碱、骆驼蓬碱、骆驼蓬总碱及哈尔满碱(止咳药用植物)对DNA拓扑异构酶Ⅱ活性的抑制作用。方法从体外培养的Q3肝癌细胞中,提取分离DNA拓扑异构酶Ⅱ;以阿霉素为阳性对照,用琼脂糖凝胶电泳法检测药物对DNA拓扑异构酶Ⅱ的作用。结果骆驼蓬总碱、去氢骆驼蓬碱、骆驼蓬碱及哈尔满碱对DNA拓扑异构酶Ⅱ活性均有一定的抑制作用。结论对DNA拓扑异构酶Ⅱ活性的抑制作用是骆驼蓬总碱、去氢骆驼蓬碱、骆驼蓬碱等生物碱抗癌作用和细胞毒作用的机制之一。

铜绿假单胞菌环丙沙星耐药株Ⅱ类拓扑异构酶基因突变的研究

用PCR方法 ,扩增 2 6株临床分离铜绿假单胞菌环丙沙星耐药株、4株环丙沙星敏感菌株和PA0 1菌株的Ⅱ类拓扑异构酶 gyrA、gyrB、parC和 parE基因的喹诺酮类药物耐药决定区 (QRDR)基因片断 ;并对铜绿假单胞菌II类拓扑异构酶基因突变与耐药性关系进行研究。结果表明 90 %以上的铜绿假单胞菌耐药株表现出Ⅱ类拓扑异构酶基因突变 (2 6株中有 2 4株 )。突变主要发生在 gyrA基因 (2 2株 )和 parC基因 (14株 )上 ,其中 gyrA基因的第 83位氨基酸密码子表现出高频突变 (2 2株中有 2 1株 ,ACC→ATC ,占 90 % ) ,parC基因第 80位氨基酸密码子也表现出较高的突变率 (14株中有 12株 ,TCG→TTG ,占 60 % ) ,4株耐药株的 gyrB和 3株耐药株的 parE基因发生单点突变 ,2株耐药株II类拓扑异构酶基因未检测到突变。用二倍稀释法 ,测定部分喹诺酮和 β 内酰胺类药物对耐药突变株的体外抗菌活性。表明铜绿假单胞菌Ⅱ类拓扑异构酶基因突变株对诺氟沙星、左氧氟沙星、哌拉西林、头孢他啶和亚胺培南表现出不同的敏感性。试验所用 2 4株突变株对诺氟沙星呈现 10 0 %的耐药 ;对左氧氟沙星 65 %的耐药 ;40 %的菌株对哌拉西林表现出耐药 ;3 0 %的菌株对头孢他啶耐药 ;75

DNA拓扑异构酶Ⅱ研究进展

TopoⅡ不仅对细胞的正常生命活动至关重要,而且在肿瘤发生、发展以及疗效等方面均扮演重要 角色。关于TopoⅡα表达调控及其影响因素大致可以分为三个方面。其一,蛋白激酶类成分多直接作用于TopoⅡα蛋白质,影响其生物活性,并且与TopoⅡα活性的周期性特点有关,其二,既能作用于基因水平又能从蛋白质水平影响TopoⅡα的物质,主要包括p53和Rb蛋白等。最后,转录调节因子类成分则主要是从基因水平调控TopoⅡα的表达。针对TopoⅡα和β异同,二者不仅在结构和分布方面有所差别,而且在功能上也各有侧重。特别是在药物敏感性与抗药性方面TopoⅡα与β也有一定的区别。因此,加强对TopoⅡα表达调控的研究,特别是开展对TopoⅡβ表达调控研究,以及深入探讨TopoⅡα和β结构和功能特点,不但对于了解相关作用机制,而且对提高肿瘤诊断、治疗效果具有重要意义。

DNA拓扑异构酶Ⅱα、PCNA在人脑星形细胞瘤中的表达及与预后生存的关系(英文)

目的研究DNA拓扑异构酶Ⅱα(Topo-Ⅱα)、增殖细胞核抗原(PCNA)在中枢神经系统星形细胞瘤中的表达,并探讨其与肿瘤恶性程度及预后的关系。方法应用SABC免疫组化技术,检测32例星形细胞瘤ToPo-Ⅱα、PCNA的表达,并针对其与恶性程度及预后生存状况的关系比较进行统计学分析。结果星形细胞瘤Topo-Ⅱα、PCNA的表达在低度恶性组与高度恶性组之间的差异有统计学意义(P<0.01);Log-rank检验及Kaplan-Meier生存曲线分析显示,Topo-Ⅱα、PCNA的表达强度与星形细胞瘤的预后生存时间呈显著的负相关性,Topo-Ⅱα、PCNA的表达水平反映了星形细胞瘤患者的预后情况。结论Topo-Ⅱα、PCNA在中枢神经系统星形细胞瘤中的表达与其恶性程度相关,与患者的预后生存相关。联合检测二者的表达水平对判断肿瘤的恶性程度有一定的参考意义,同时,这两个因子可作为判断与预测星形细胞瘤患者预后的重要指标。

DNA拓扑异构酶Ⅱα、PCNA在人脑星形细胞瘤中的表达及与预后生存的关系

目的 研究DNA拓扑异构酶Ⅱα(Topo -Ⅱα)、增殖细胞核抗原(PCNA)在中枢神经系统星形细胞瘤中的表达,并探讨其与肿瘤恶性程度及预后的关系。方法 应用SABC免疫组化技术,检测32例星形细胞瘤ToPo Ⅱα、PCNA的表达,并针对其与恶性程度及预后生存状况的关系比较进行统计学分析。结果 星形细胞瘤Topo Ⅱα、PCNA的表达在低度恶性组与高度恶性组之间的差异有统计学意义(P <0 0 1) ;Log rank检验及Kaplan Meier生存曲线分析显示,Topo Ⅱα、PCNA的表达强度与星形细胞瘤的预后生存时间呈显著的负相关性,Topo Ⅱα、PCNA的表达水平反映了星形细胞瘤患者的预后情况。结论 Topo Ⅱα、PCNA在中枢神经系统星形细胞瘤中的表达与其恶性程度相关,与患者的预后生存相关。联合检测二者的表达水平对判断肿瘤的恶性程度有一定的参考意义,同时,这两个因子可作为判断与预测星形细胞瘤患者预后的重要指标。

基于DNA拓扑异构酶Ⅱ基因部分序列的侧耳属系统发育分析

对侧耳属(Pleurotus)14个种的14个菌株,亚侧耳属(Hohenbuehelia)1个种和离褶伞属(Lyophyllum)1个种的DNA拓扑异构酶II(EC5.99.1.3)部分序列进行扩增分析。以灰盖鬼伞(Coprinus cinereus)、新型隐球酵母(Cryptococcus neoformans)和玉米黑粉菌(Puccinia polysora)等担子菌为外群,采用最大距离法、最大简约法和最大似然法构建侧耳属的系统发育树。结果表明:作为外群的3个物种独立于所有供试材料;侧耳属菌株作为一大类与供试的离褶伞属和亚侧耳属分开。侧耳属14个种又可细分成6支:可能为侧耳属起源最早的P.flabellatus、P.salmoneostramineus和P.djamor组成一组;P.tuberregium和P.pulmonarius均自成一组;P.abalonus和P.cystidiosus均产生束梗孢,聚为同组;P.eryngiivar.eryngii、P.eryngiivar.ferulae和P.nebrodensis为一组;另一组由P.ostreatus、P.columbinus、P.cornucopiae和P.citrinopileatus组成。按照侧耳属物种菌丝类型的不同,构建的系统发育树将该属14个种进行系群划分,单、二系菌丝分属于各个不同的分支中,说明单、二系菌丝均为多系起源,与用28S rDNA序列进行系统分析的结果一致。

DNA拓扑异构酶Ⅱ在肾癌中的表达及意义

目的：从细胞核水平对肾癌多药耐药（multldrugresistance，MDR）机制进行探讨，以期为选择化疗方案提供参考，获得更有效的化疗效果。方法：应用免疫组化的方法，对肾癌MDR的主要耐药指标DNA拓扑异构酶Ⅱ（TopoisomeraseⅡ，TopeⅡ）进行检测，并结合临床分型、分级、分期进行研究。结果：27例正常组织均表达TopoⅡ（100％），主要位于胞浆，70例癌组织均有TopoⅡ表达（100％），均位于胞核，TopoⅡ值以≥100为阳性标准，仅21．6％为阳性。结论：肾癌TopoⅡ表达值降低，使大多数化疗药物丧失了作用靶点而产生MDR。选择TopoⅡ高表达的患者采用不同的化疗药物进行化疗将有助于提高化疗有效率．

膀胱癌谷胱甘肽转移酶π和DNA拓扑异构酶Ⅱ组合表达的意义

目的 :探讨谷胱甘肽转移酶π(GSTπ)和DNA拓扑异构酶Ⅱ (TopoⅡ )组合表达与膀胱癌生物学行为的关系。方法 :应用免疫组化SP法检测 6 0例膀胱移行细胞癌GSTπ和TopoⅡ表达。结果 :GSTπ表达水平升高 ,其阳性率在Ta～T1与T2 ～T4( 34.5 %、87.1% )、Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级 ( 4 0 %、6 2 .5 %、84 .6 % )、初发与复发 ( 5 2 .3%、87.5 % )间比较 (P <0 .0 5 ) ;TopoⅡ表达水平下降 ,其阳性率在Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级 ( 80 %、6 2 .5 %、30 .8% )、单发与多发 ( 81.3%、35 .7% )间比较P <0 .0 5 ,但与临床分期和复发无关P >0 .0 5。以GSTπ+/TopoⅡ -表达者膀胱癌恶性程度更高 ,具有更强的侵袭力 ,易复发 ,进展快 ,预后差。结论 :GSTπ高表达和TopoⅡ表达水平下降与膀胱癌生物学行为相关。

DNA拓扑异构酶Ⅱ与多药耐药研究进展

ＤＮＡ拓扑异构酶Ⅱ与多药耐药研究进展叶传忠１黄勤２关键词拓扑异构酶Ⅱ；ＤＮＡ；多药耐药福建医科大学１．附属协和医院泌尿外科（福州３５０００１）２．基础部ＤＮＡ拓扑异构酶（ｔｏｐｏｉｓｏｍｅｒａｓｅ，Ｔｏｐｏ）是一种能催化ＤＮＡ超螺旋结构局部构型改变的...

海南哥纳香醇甲GHM-10对L1210细胞DNA分子结构及拓扑异构酶Ⅱ活性的影响

目的：研究海南哥纳香醇甲（ＧＨＭ１０）抑制癌细胞ＤＮＡ合成的作用机制。方法：用单细胞凝胶电泳法检测ＧＨＭ１０对Ｌ１２１０细胞ＤＮＡ分子的损伤，碱洗脱法测定ＧＨＭ１０对Ｌ１２１０细胞ＤＮＡ单链长度的影响，用ＧＨＭ１０对超螺旋ｐＵＣ１８ＤＮＡ的解旋能力测定它对ＤＮＡ拓扑异构酶ＩＩ活性的影响。结果：Ｌ１２１０细胞用ＧＨＭ１０（４～１０）μｇ·ｍｌ－１处理４５ｈ后，ＤＮＡ分子受损，表现为电泳后在荧光显微镜下可见彗星状拖尾。ＧＨＭ１０（４～２５）μｇ·ｍｌ－１处理Ｌ１２１０细胞５ｈ，可引起ＤＮＡ单链断裂。Ｌ１２１０细胞或从Ｌ１２１０细胞分离的蛋白质在用ＧＨＭ１０处理后，ＤＮＡ拓扑异构酶ＩＩ的活性均被抑制。结论：ＧＨＭ１０可引起Ｌ１２１０细胞ＤＮＡ分子损伤；无论在细胞内还是细胞外，ＧＨＭ１０可抑制拓扑异构酶ＩＩ的活性。

疏肝养胃通脉冲剂对萎缩性胃炎患者DNA拓扑异构酶Ⅱ和细胞增殖指数的影响

目的观察疏肝养胃通脉冲剂治疗慢性萎缩性胃炎后DNA拓扑异构酶Ⅱ表达和细胞增殖指数的变化。方法应用免疫组化S-P方法,对174例不同病理亚型CAG患者进行DNA拓扑异构酶Ⅱ(TopoⅡ)和细胞增殖指数PCNA检测。结果观察组(n=106)和对照组(n=68)随着萎缩、异型增生、化生和HP感染加重,To-poⅡ和PCNA表达均数治疗前逐渐增大,治疗后则相反。两组治疗前后比较差异有显著性(P<0.05或P<0.01);观察组和对照组治疗后对比,除萎缩程度外,差异有显著性(P<0.05或P<0.01)。结论疏肝养胃通脉冲剂能抑杀HP,对CAG特别是伴异型增生和肠上皮化生、假幽门腺化生者能下调TopoⅡ和PCNA表达,对CAG的治疗和预防其癌变有较好的作用。

DNA拓扑异构酶Ⅱα的表达与颅咽管瘤预后的关系

目的检测颅咽管瘤组织中DNA拓扑异构酶Ⅱα(DNATopoⅡα)的表达情况,分析其表达与肿瘤复发的关系,探讨其是否可作为判定颅咽管瘤预后的一个有效指标。方法设计前瞻性队列研究方案,采用免疫组化方法和图像分析技术测定63例颅咽管瘤组织切片中DNA拓扑异构酶Ⅱα的表达水平,评价颅咽管瘤釉质上皮瘤与鳞状乳头瘤病理亚型、复发组与非复发组、原发组与复发组之间肿瘤细胞的增殖能力。结果32例釉质上皮瘤14例复发,31例鳞状乳头瘤6例复发;釉质上皮瘤与鳞状乳头瘤病理亚型之间以及复发组与非复发组肿瘤之间DNA拓扑异构酶Ⅱα的表达水平有显著性差异(P<0.05),而原发组与复发组肿瘤之间DNA拓扑异构酶Ⅱα的表达水平无统计学差异(P>0.05)。结论颅咽管瘤的病理亚型以及DNA拓扑异构酶Ⅱα的表达水平与肿瘤的预后和复发有关,可作为预测肿瘤复发危险性的一个参考指标;DNA拓扑异构酶Ⅱα的表达水平在原发组和复发组肿瘤之间无显著性差异,提示肿瘤在复发过程中瘤细胞的增殖活性无明显变化。