DNA损伤检查点蛋白调节子1片段的表达纯化及抗体制备

目的:原核表达、纯化DNA损伤检查点蛋白调节子1(MDC1)片段,并制备其多克隆抗体。方法:设计特异引物,通过RT-PCR扩增编码MDC1 N端194个氨基酸残基的基因片段,测序正确后插入含GST基因的原核表达载体pGEX-KG中,以IPTG诱导表达,并经谷胱甘肽琼脂糖珠纯化融合蛋白;用纯化的蛋白免疫小鼠制备多克隆抗体,用ELISA测定抗体的效价,Western印迹鉴定抗体的特异性。结果:原核表达并纯化了MDC1 N端片段,并获得了抗MDC1的多克隆抗体,抗体效价达到1∶12800,Western印迹显示该抗血清能特异识别原核及真核细胞表达的MDC1。结论:MDC1 N端片段能够诱导小鼠产生具有较高效价和特异性的多克隆抗体,为进一步研究MDC1在Fhit特异信号通路中的作用奠定了基础。

DNA损伤检测点介质1和p53结合蛋白1在人食管癌细胞系TE-1.TE-13.Eca109中的表达及意义

目的研究DNA损伤检测点介质1(MDC1)和p53结合蛋白1(53BP1)在人食管癌细胞系中的表达及意义。方法采用半定量RT-PCR、免疫细胞化学法、间接免疫荧光法和Western blotting检测MDC1、53BP1mRNA和蛋白在人食管癌细胞系TE-1.TE-13.Eca109的表达水平。结果RT-PCR结果显示MDC1、53BP1mRNA在所检测的人食管癌细胞系中均有表达;免疫细胞化学法、间接免疫荧光法和Western blotting均在人食管癌细胞系中检测到MDC1、53BP1的蛋白表达。结论首次证实了MDC1、53BP1在食管癌细胞系中的表达,推测MDC1、53BP1可能和食管癌细胞的放射敏感性有关。

DNA损伤检查点蛋白调节子1通过抑制p53通路促进胆管癌细胞的增殖、迁移及侵袭

目的 探索DNA损伤检查点蛋白调节子1(MDC1)对胆管癌细胞增殖、迁移、侵袭、周期以及凋亡的影响及其机制。方法 采用特异性靶向MDC1的小干扰RNA(siRNA)在胆管癌细胞RBE和Huh28中瞬时敲低MDC1,使用pLVX-HA-MDC1质粒在RBE和Huh28中瞬时过表达MDC1;采用实时定量PCR(qPCR)和Western印迹鉴定敲低和过表达MDC1的效果。采用CCK-8、平板细胞克隆形成、Transwell和Invasion实验分别检测RBE和Huh28细胞的增殖、迁移和侵袭能力;采用流式细胞术检测细胞周期和凋亡;使用基因集富集分析(GSEA)预测与MDC1显著相关的信号通路,通过Western印迹验证通路相关节点分子的表达情况。采用免疫共沉淀(Co-IP)验证MDC1与p53的相互作用。采用流式细胞术和Western印迹验证MDC1是否通过p53通路影响RBE和Huh28的周期和凋亡。基于癌症基因组图谱(TCGA)数据库分析胆管癌癌组织与正常组织中MDC1的mRNA表达差异情况,以及MDC1表达水平与胆管癌患者总体生存率的相关性。结果 敲低MDC1,RBE和Huh28细胞的增殖、迁移、侵袭能力显著降低,S期细胞比例显著减少,G;0;/G;1;期细胞比例、凋亡率显著增加;而过表达MDC1,RBE和Huh28细胞的增殖、迁移及侵袭能力显著提高,S期细胞比例显著增多,G;0;/G;1;期细胞比例、凋亡率显著减少;在RBE和Huh28细胞中,证实MDC1与p53存在相互作用,且MDC1显著下调p53、p-p53(Ser-15)及p53通路下游分子B淋巴细胞瘤-2相关X蛋白(BAX)、p53上调凋亡调控因子(PUMA)、p21的表达,显著上调B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)的表达,从而促进胆管癌细胞的发生发展;MDC1在胆管癌组织中的表达水平显著高于正常胆管组织,且MDC1高表达与胆管癌患者预后不良密切相关。结论MDC1通过抑制p53通路促进胆管癌的发生发展,MDC1可作为新的胆管癌预后不良的标志物。

高级别胶质瘤组织中MDC1高表达和miR-590-5p低表达促进胶质瘤细胞凋亡

目的探讨miR-590-5p、DNA损伤检查点蛋白调节子1(mediator of DNA damage checkpoint 1,MDC1)在高级别胶质瘤(high-grade glioma,HGG)组织中的表达及与胶质瘤病人术后放疗效果的关系,并明确二者对胶质瘤细胞增殖、凋亡的影响。方法选取2019年1月至2021年2月河北北方学院附属第一医院64例HGG患者,评估放疗效果。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测miR-590-5p水平,免疫组织化学染色检测MDC1表达情况,分析miR-590-5p、MDC1表达与胶质瘤病人术后放疗效果的关系,多因素Logistic回归分析影响HGG患者术后放疗效果的因素;体外培养胶质瘤U87MG细胞,并分别转染miR-590-5p mimic、MDC1-shRNA及其阴性对照,CCK-8法和流式细胞术分别检测细胞增殖和凋亡;构建裸鼠移植瘤模型,观察过表达miR-590-5p和敲低MDC1对肿瘤生长的影响。结果MDC1在HGG组织中的表达较正常脑组织中升高,mi R-590-5p表达较正常脑组织降低,二者表达水平呈负相关;MDC1表达升高、miR-590-5p表达降低,其放疗效果越差;Logistic回归分析显示,MDC1高表达、miR-590-5p低表达均是影响HGG患者放疗效果的危险因素。过表达miR-590-5p和敲低MDC1后,U87MG细胞增殖力降低,凋亡率升高,移植瘤体积和重量下降,Ki-67阳性细胞比例减少。过表达miR-590-5p后MDC1蛋白表达明显下降。结论HGG组织中miR-590-5p呈低表达,MDC1呈高表达,二者表达与HGG的发生和患者术后放疗效果关系密切;过表达miR-590-5p和敲低MDC1表达可抑制胶质瘤细胞增殖并促进凋亡。

ATR抑制剂Bezosertib通过抑制SHP1功能激活STING通路增加结直肠癌放疗联合免疫治疗的疗效

背景与目的近年来,免疫治疗,特别是程序性细胞死亡蛋白1(programmed cell death protein 1,PD-1)和程序性死亡配体1(programmed death-ligand 1,PD-L1)的免疫检查点抑制剂(immune checkpoint inhibitor,ICI)在各种实体瘤得到了广泛的应用。然而,ICI在结直肠癌(colorectal cancer,CRC)中的应用仅局限于具有缺陷的错配修复(deficient mismatch repair,dMMR)/高微卫星不稳定性(microsatellite instability-high,MSI-H)功能的患者中。dMMR患者仅约占总CRC的5%,其余CRC患者为错配修复完备(proficient MMR,pMMR)、微卫星稳定(microsatellite stable,MSS)的患者几乎不响应免疫治疗。ICI依靠活化淋巴细胞发挥肿瘤杀伤作用,pMMR肿瘤免疫原性低,淋巴细胞浸润少,又被称为冷肿瘤。寻找新的治疗或药物联用策略,将“冷肿瘤”变为免疫细胞浸润较多的“热肿瘤”,以增强ICI的疗效,具有重要研究意义。此前有研究证明,ATR抑制剂(ATR inhibitor,ATRi)联合放射治疗可促进抗肿瘤免疫,但其机制及其在结直肠癌中的作用尚不明确。本研究基于两种具有不同微卫星状态的CRC小鼠模型,探究联用ATRi、放射治疗(irradiation therapy,IR)和抗PD-L1抗体的疗效,并研究其疗效的分子机制,以期为增强ICI疗效提供新的联合策略。方法使用MC38、CT26两种小鼠CRC细胞建立动物皮下瘤模型,评估ATRi、IR和抗PD-L1抗体及其联合应用的抗肿瘤疗效,并使用流式细胞术、免疫组化、转录组测序技术研究不同联合方案下肿瘤微环境改变和转录组特征改变。使用CCK-8、流式细胞术、免疫荧光、免疫印迹、免疫共沉淀试验和实时定量PCR探索不同联合方案下的通路改变,探索联合方案抗肿瘤效应的机制。结果ATRi berzosertib、IR、PD-L1抗体三者联合,可在不同微卫星状态的小鼠CRC模型中均达到了最佳的抗肿瘤疗效,其机制主要与IR+ATRi增强CD8^(+)T细胞浸润有关。进一步的机制研究表明,IR+ATRi既可以通过增加胞质双链DNA水平激活经典的cGAS-STING-pTBK1/pIRF3通路,并同时通过促进SHP1第127号赖氨酸位点的SUMO化,减弱SHP1介导的TRAF6-STING-p65轴抑制,激活非经典STING通路。通过显著增强STING通路,IR+ATRi诱导I型干扰素相关基因表达,激活固有免疫反应,将冷肿瘤变为热肿瘤,增强PD-L1抗体的疗效。结论联合ATRi、IR可通过激活STING通路,将冷肿瘤变为热肿瘤,进而增强PD-L1抗体的疗效。

MDC1与YAP1在卵巢癌中的表达及与临床特征和预后的关系

目的探讨卵巢癌患者卵巢癌组织中Yes相关转录调节因子1(YAP1)、DNA损伤介质检查点1(MDC1)的表达情况,并分析其与患者临床特征和预后的关系。方法选取118例卵巢癌组织标本为卵巢癌组,56例卵巢正常组织标本为对照组,采用免疫组化法检测YAP1、MDC1在卵巢癌组织及正常卵巢组织中的表达情况,并分析其与临床特征及预后的关系。结果YAP1、MDC1在卵巢癌组织中的阳性表达率均明显高于正常卵巢组织,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。分化程度为G1级、FIGO分期为Ⅲ+Ⅳ期、有淋巴结转移的卵巢癌患者的卵巢癌组织中YAP1、MDC1阳性表达率均分别明显高于分化程度为G2~3级、FIGO分期为Ⅰ+Ⅱ期、无淋巴结转移的卵巢癌患者,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。死亡组患者的卵巢癌组织中YAP1、MDC1阳性表达率均明显高于生存组,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。YAP1、MDC1在卵巢癌组织中表达无相关性(r=0.126,P=0.213)。结论卵巢癌患者卵巢组织中YAP1、MDC1均呈高表达,且与患者临床分期、分化程度、淋巴结转移及预后有关,可能参与了卵巢癌的发生与发展,可以用于卵巢癌的辅助诊断。

MDC1和MMR蛋白在子宫内膜癌中的表达及临床意义

目的探讨DNA损伤检查点蛋白调节子1(MDC1)与错配修复(MMR)蛋白在子宫内膜癌中的表达及其与相关临床特征的关系。方法回顾性分析126例子宫内膜癌患者的临床及病理资料,收集患者手术或刮宫标本进行HE染色和免疫组化染色,检测MDC1、MMR蛋白(MSH6、MSH2、PMS2、MLH1)的表达,并根据MDC1及MMR蛋白免疫组化结果,分析MDC1、MMR蛋白表达及结合两种蛋白不同表达与患者临床特征的关系。采用Kaplan-Meier法绘制生存曲线图分析MDC1和MMR蛋白联合检测与总生存率的关系。采用Spearman秩相关性分析MDC1与MMR蛋白表达的相关性。结果与MDC1阳性表达患者相比,MDC1阴性表达患者年龄较小,主要为低级别(1~2级)子宫内膜样腺癌(P<0.05);与MMR表达完整(MMR-p)患者相比,MMR表达缺失(MMR-d)患者年龄较小,主要为低级别(1~2级)子宫内膜样腺癌(P<0.05)。MDC1阴性表达/MMR-p、MDC1阳性表达/MMR-p、MDC1阴性表达/MMR-d、MDC1阳性表达/MMR-d各组患者年龄、组织学类型、组织学分级比较,差异具有统计学意义(P<0.05);而临床分期、肌层浸润深度比较,差异无统计学意义(P>0.05)。MDC1、MMR蛋白联合检测与患者的总生存率无关(P>0.05),MDC1阴性表达占所有子宫内膜癌患者的9.5%(12/126),与MMR-d呈正相关(P<0.001)。结论MDC1、MMR蛋白多在低级别子宫内膜癌中失表达,并且MDC1阴性表达与MMR-d具有正相关性,提示MDC1失表达与子宫内膜癌的微卫星不稳定性密切相关。

乳腺癌易感基因1、P53结合蛋白1、DNA损伤检测点介质1在人喉表皮癌细胞中的表达及临床意义

目的研究人喉表皮癌细胞系Hep-2中乳腺癌易感基因1(BRCAl)、P53结合蛋白1(53BP1)和DNA损伤检测点介质1(MDC1)的表达及临床意义。方法采用逆转录聚合酶链式反应检测BRCA1、53BP1、MDC1在喉癌细胞系Hep-2中mRNA的表达,同时用免疫印迹法检测蛋白的表达。结果在所检测的人喉癌细胞系Hep-2中BACR1、53BP1、MDC1在基因与蛋白两个水平均有表达。结论 BRCA1、53BP1、MDC1可能在喉癌的发生发展中有一定作用。

Chk1激酶在恶性血液肿瘤中的研究进展

细胞周期检查点激酶1(Chk1)属于丝氨酸/苏氨酸蛋白质激酶,是一种细胞周期调节因子,控制细胞增殖,是DNA损伤后引起S/G 2期、G 2/M期阻滞的关键基因,为修复DNA损伤提供保障,具有重要的监视功能。Chk1在多种肿瘤组织中呈过表达,可通过特定分子信号通路参与部分肿瘤的发生发展;其表达水平的异常与血液肿瘤患者的治疗效果及预后密切相关,高表达Chk1在血液肿瘤细胞的浸润转移中具有重要意义,而Chk1抑制剂的出现为恶性血液肿瘤治疗提供了新的方向。

tRNA转运与细胞周期检查点

DNA损伤检查点蛋白质与细胞周期进程的关系在分子水平尚不明了。tRNA转运和转录因子Gcn4是细胞周期进程关键的中间体分子,其可检测到DNA损伤并延迟细胞周期由G1到S期转变进程。本文对DNA损伤后tRNA转运和细胞周期检查点延迟细胞周期进程的研究进展做一综述。

对映-贝壳杉烯型二萜类化合物J32对胰腺癌细胞的作用及机制

目的探讨对映-贝壳杉烯型二萜类化合物J32对胰腺癌细胞SW1990的作用及机制。方法将SW1990细胞随机分为对照组、0.5μmol·L^(-1) J32组、1.0μmol·L^(-1) J32组、2.0μmol·L^(-1) J32组、4.0μmol·L^(-1) J32组,分别用含终浓度0.0、0.5、1.0、2.0、4.0μmol·L^(-1) J32的培养基培养。采用细胞划痕试验检测细胞迁移能力,单克隆形成试验检测细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞凋亡情况、细胞中活性氧水平及细胞周期,磷酸化H2组蛋白家族成员X(γ-H2AX)免疫荧光法检测细胞DNA损伤程度,Western blot法检测共济失调毛细血管扩张和Rad3相关蛋白(ATR)-细胞周期检查点激酶1(Chk1)-p53-细胞周期素D1(Cyclin D1)通路相关蛋白以及凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤-2相关X蛋白(Bax)、caspase-3、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)表达。结果培养24、48 h时,1.0μmol·L^(-1) J32组、2.0μmol·L^(-1) J32组、4.0μmol·L^(-1) J32组细胞的迁移能力显著低于对照组(P<0.05),2.0μmol·L^(-1) J32组、4.0μmol·L^(-1) J32组细胞的迁移能力均显著低于1.0μmol·L^(-1) J32组(P<0.05),4.0μmol·L^(-1) J32组细胞的迁移能力显著低于2.0μmol·L^(-1) J32组(P<0.05)。0.5μmol·L^(-1) J32组、1.0μmol·L^(-1) J32组细胞的增殖能力显著低于对照组(P<0.05),1.0μmol·L^(-1) J32组细胞的增殖能力显著低于0.5μmol·L^(-1) J32组(P<0.05)。1.0μmol·L^(-1) J32组、2.0μmol·L^(-1) J32组、4.0μmol·L^(-1) J32组细胞的凋亡率显著高于对照组(P<0.05),2.0μmol·L^(-1) J32组、4.0μmol·L^(-1) J32组细胞的凋亡率显著高于1.0μmol·L^(-1) J32组(P<0.05),4.0μmol·L^(-1) J32组细胞的凋亡率显著高于2.0μmol·L^(-1) J32组(P<0.05)。1.0μmol·L^(-1) J32组、2.0μmol·L^(-1) J32组、4.0μmol·L^(-1) J32组细胞的活性氧水平显著高于对照组(P<0.05),2.0μmol·L^(-1) J32组、4.0μmol·L^(-1) J32组细胞的活性氧水平显著高于1.0μmol·L^(-1) J32组(P<0.05),4.0μmol·L^(-1) J32组细胞的活性氧水平显著高于2.0μmol·L^(-1) J32组(P<0.05)。1.0μmol·L^(-1) J32组、2.0μmol·L^(-1) J32组细胞的DNA损伤程度显著高于对照组(P<0.05),2.0μmol·L^(-1) J32组细胞的DNA损伤程度显著高于1.0μmol·L^(-1) J32组(P<0.05)。1.0μmol·L^(-1) J32组、2.0μmol·L^(-1) J32组细胞中G 1/S期细胞占比显著高于对照组(P<0.05),2.0μmol·L^(-1) J32组细胞中G 1/S期细胞占比显著高于1.0μmol·L^(-1) J32组(P<0.05)。对照组、1.0μmol·L^(-1) J32组、2.0μmol·L^(-1) J32组、4.0μmol·L^(-1) J32组细胞中,随着J32浓度的增加,磷酸化ATR/ATR值及磷酸化p53蛋白表达呈升高趋势(F=25.534、3.970,P<0.05),Chk1、CyclinD1蛋白表达呈降低趋势(F=19.532、0.485,P<0.05);促凋亡蛋白caspase-3、Bax的表达呈升高趋势(F=0.219、4.314,P<0.05),抗凋亡蛋白Bcl-2表达呈下降趋势(F=0.324,P<0.05)。结论对映-贝壳杉烯型二萜类化合物J32可呈浓度依赖性地抑制胰腺癌SW1990细胞的迁移和增殖、促进细胞凋亡及提高细胞内活性氧水平,此外,J32可促进细胞发生DNA损伤及细胞周期阻滞,其作用机制可能与ATR-Chk1-p53-Cyclin D1通路相关。

Chk1防止DNA损伤的S期肿瘤细胞进行异常的有丝分裂

为探讨在p53失活的肿瘤细胞中DNA甲基化试剂引发的DNA损伤对于细胞周期的影响,我们将同步化在G1,S和G2/M期的HeLa细胞分别进行甲磺酸甲酯(MMS)处理.MMS的处理结果表明,各个时相的细胞周期进程均发生延迟或阻滞,其中S期细胞对药物最为敏感.进一步的分子机理研究表明,3个时相中ATM-Chk2和p38 MAPK通路均被激活,但是Chk1仅在S期中被活化,提示Chk1特异地参与了S期的DNA损伤检查点(DNA damage checkpoint)或者DNA复制检查点(DNA replication checkpoint)的作用.为了进一步确定Chk1在S期的检查点功能,用专一的小分子抑制剂抑制Chk1的磷酸化,发现被MMS处理的S期细胞能在未完成复制的情况下进行异常的有丝分裂,提示Chk1主要是在HeLa细胞S期的DNA损伤检查点而不是DNA复制检查点发挥其作用.另外,本研究还检查了参与G2/M期进程的cyclin B1的表达变化情况.在MMS处理的S期细胞中,cyclin B1表达量不能上调;而在加入Chk1抑制剂处理后,cyclin B1则有所增加.这一结果进一步支持DNA损伤S期细胞在Chk1失活时进入异常有丝分裂的推论.研究结果表明,Chk1是MMS诱发的HeLa细胞S期DNA损伤检查点的专一性的重要蛋白激酶;当MMS引发DNA损伤后,上游蛋白激酶对Chk1进行磷酸化,从而激活了S期的DNA损伤检查点,阻止细胞进入G2/M期.由于这一过程不依赖于p53的活性,因此Chk1有可能作为p53失活的肿瘤细胞的药物靶标.

卵巢癌中MDC1与YAP1表达与临床特征及预后情况的关联

探讨卵巢癌中DNA 损伤介质检查点1(MDC1)与Yes相关转录调节因子 1(YAP1)表达与临床特征以及预后情况的关联。方法 本研究纳入的对象来自2022年1月~2023年1月,将卵巢癌组织样本35例纳入观察组,将卵巢正常组织标本30例纳入对照组,两组均接受免疫组化检测,判断不同组别MDC1与YAP1表达差异,同时分析指标和临床特征及预后情况关联性。结果 和对照组相比,观察组MDC1、YAP1阳性率占比明显较高(P<0.05);观察组MDC1阳性患者中分化程度G1、FIGOⅢ期-Ⅳ期、发生淋巴结转移占比相对较高(P<0.05);观察组YAP1阳性患者中分化程度G1、FIGOⅢ期-Ⅳ期、发生淋巴结转移占比相对较高(P<0.05);随访结果显示7例发生死亡、28例存活,相比于存活组,死亡率患者MDC1、YAP1阳性率占比较高(P<0.05)。结论 卵巢癌发病患者,其卵巢组织MDC1与YAP1检测结果为高表达,且指标与卵巢癌的发生和发展密切相关,和临床分期、分化情况、淋巴结转移及预后情况关系密切,能够作为临床辅助判断指标,值得重视。

DNA损伤修复与细胞周期阻滞

面对各种因素导致的DNA损伤,细胞有一套应答修复机制。其中细胞周期阻滞在DNA损伤应答修复中扮演了重要角色,为修复受损DNA创造了条件。关于细胞周期调控的研究集中于细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶(CDK)与细胞周期检查点等方面。在DNA损伤修复过程中,损伤位点募集的磷脂酰肌醇-3-激酶样激酶(PIKKs)可引起细胞周期检查点相关蛋白的激活,导致细胞周期阻滞。在碱基切除修复、核苷酸切除修复、错配修复、DNA双链断裂修复等常见的DNA损伤修复途径中,招募的损伤修复相关蛋白在细胞周期调控中也起到一定的作用。因此综述了主要DNA损伤修复形式与细胞周期阻滞之间的关系及研究进展。

细胞周期点激酶l/2的研究进展

细胞周期检测点激酶(checkpoint kinase)的作用是在DNA损伤后通过阻滞细胞周期,使受损的DNA得以修复,从而维持了基因组的保真度。已知的细胞周期检查点激酶包含:Chk1(checkpoint kinase 1)和Chk2(checkpoint kinase 2)。二者具有重叠的底物谱和相似的结构,但在不同肿瘤及其他疾病的细胞和组织中表达并不相同。目前两者的应用研究主要体现在作为肿瘤细胞的重要靶点,使用选择性的抑制剂单剂或联合放射治疗和DNA损伤剂治疗肿瘤及相关疾病。本文就Chk1/2的最新研究进展作出简要综述。

唑来膦酸与顺铂异序联合应用对肺腺癌A549细胞抑制作用的比较

目的 比较唑来膦酸与顺铂异序联合对肺腺癌A549细胞的抑制作用.方法 按照唑来膦酸和顺铂药物处理的不同顺序将肺腺癌A549细胞分为4组（唑来膦酸和顺铂的药物浓度分别为1.560 0 mmol/L和0.312 5mg/L）：（1）A组（对照组）：肺腺癌A549细胞常规培养,不作药物处理;（2）B组（同时用药组）：同时加入唑来膦酸和顺铂孵育48 h;（3）C组（顺铂＋唑来膦酸组）：顺铂孵育24 h后,加入唑来膦酸孵育24 h;（4）D组（唑来膦酸＋顺铂组）：唑来膦酸孵育24 h后,加入顺铂孵育24 h.采用噻唑蓝（MTT）法检测各组细胞体外增殖水平;膜联蛋白V（Annexin V）/碘化丙锭（PI）双染色法检测各组细胞凋亡;实时荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）法检测各组细胞DNA损伤检查点蛋白调节因子1（MDC1）、DNA切除修复交叉互补基因1（ERCC1）和受体相关蛋白80（RAP80）基因mRNA的表达.结果 A、B、C、D组细胞生长抑制率分别为0、（39.16±4.94）％、（46.94±3.45）％、（38.43±4.84）％,B、C、D组均显著高于A组（P＜0.05）,B、D组均显著低于C组（P＜0.05）;各组细胞凋亡率分别为（0.53±0.15）％、（32.3±0.50）％、（36.53±0.31）％、（29.33±2.48）％,B、C、D组均显著高于A组（P＜0.05）,B、D组均显著低于C组（均P ＜0.05）;B、C、D组细胞中MDC1和RAP80基因mRNA的表达（0.374±0.022和1.127±0.018、0.320±0.023和1.036±0.0279.416±0.016和1.181±0.041）均显著低于A组（0.677±0.028和1.548±0.038-P＜0.05）,且B、D组均显著高于C组（P＜0.05）;各组细胞ERCCl基因mRNA表达差异无统计学意义（P＞0.05）.结论 顺铂联合唑来膦酸可抑制肺癌A549细胞的增殖,诱导其凋亡,并有顺序依赖性,以顺铂序以唑来膦酸效果更显著;其作用可能与下调MDC1和RAP80基因mRNA表达有关.