荔枝皮原花青素的体外抗氧化活性和对DNA损伤的保护作用

分别采用邻苯三酚-鲁米诺化学发光体系、硫酸亚铁-鲁米诺-过氧化氢化学发光体系和过氧化氢-鲁米诺化学发光体系测定白腊、妃子笑、糯米糍和怀枝4个品种的荔枝皮原花青素(procyanidins of litchi pericarp,LPPC)体外清除超氧阴离子自由基、羟自由基和过氧化氢的能力。同时运用硫酸铜-邻菲啰啉-抗坏血酸-过氧化氢-DNA体系测定不同LPPC对诱导体系DNA损伤的保护作用。实验结果表明:白腊LPPC具有较好的体外清除超氧阴离子自由基和过氧化氢的能力;妃子笑呈现出较显著的羟自由基清除能力和保护DNA损伤的效果。不同品种的LPPC在不同化学发光体系中的抗氧化活性呈现较大差异。

化学发光法研究莲房原花青素的体外抗氧化活性和对DNA损伤的保护作用

采用多个化学发光体系,研究了测定莲房原花青素(LSPC)的体外抗氧化活性及其对DNA损伤的保护作用。运用邻苯三酚-鲁米诺化学发光体系测定了LSPC对超氧阴离子的清除作用,硫酸铜-邻菲啰啉-抗坏血酸-双氧水、硫酸亚铁-鲁米诺-双氧水和硫酸亚铁-鲁米诺三个体系测定了LSPC对羟基自由基的清除作用,双氧水-鲁米诺体系测定了LSPC对体外双氧水的清除作用,采用硫酸铜-邻菲啰啉-抗坏血酸-双氧水-脱氧核糖核酸测定了LSPC对体外DNA损伤的保护作用。实验结果表明LSPC具有较好的体外清除活性氧和保护DNA损伤的活性,但是在不同体系中LSPC的抗氧化能力存在差异。

山楂果肉原花青素的体外抗氧化活性和对DNA损伤的保护作用

研究了化学发光法测定山楂果肉原花青素(procyanidins of Hawthorn Sarcocarp简称HSPC)的体外抗氧化活性及其对DNA损伤的保护作用。运用邻苯三酚-鲁米诺化学发光体系测定了HSPC对超氧阴离子的清除作用,硫酸铜-邻菲啰啉-抗坏血酸-双氧水体系测定了HSPC对羟基自由基的清除作用,双氧水-鲁米诺体系测定了HSPC对体外双氧水的清除作用,采用硫酸铜-邻菲啰啉-抗坏血酸-双氧水-脱氧核糖核酸测定了HSPC对体外DNA损伤的保护作用。结果表明:当HSPC浓度为1mg/mL时,对超氧阴离子抑制率达87.7%,其半数抑制率浓度IC50值为130.8μg/mL;100μg/mL时对羟基自由基抑制率达91.7%,IC50值为61.73μg/mL;8μg/mL时对双氧水抑制率达91.6%,IC50值为0.19μg/mL;40μg/mL时对体外DNA损伤抑制率达80.7%,IC50值为22.16μg/mL。表明HSPC具有很好的体外清除活性氧和保护DNA损伤的活性。

艾蒿黄酮体外抗氧化活性及对DNA氧化损伤的保护研究

采用四种化学发光体系研究艾蒿黄酮(flavonoids of Artemisia argyi Lé vl.et Vant,简称FAA)的体外抗氧化活性,及对DNA氧化损伤的保护作用。结果表明,艾蒿黄酮能有效地清除O2-·、·OH、H2O2、减轻或消除·OH对DNA的氧化损伤。艾蒿黄酮50%抑制浓度(IC50)分别为151.17、15.34、0.23、15.46mg/L。实验同时还比较了艾蒿黄酮和VC的抗氧化作用,结果表明,艾蒿黄酮抗氧化效应远远高于VC的。艾蒿黄酮是有效的、多功能的天然抗氧化剂和自由基清除剂,是值得进一步开发利用的天然产物。

食源性桑叶生物碱在模拟胃肠消化过程中的抗氧化及抗蛋白、DNA氧化损伤

通过研究在模拟胃肠消化体系中桑叶生物碱抗氧化活性的变化规律,为该物质在生物体内抗氧化作用研究提供参考。采用桑叶粉为原料,按料液比1∶30,60℃,功率800 W,超声处理60 min提取桑叶生物碱,测定其自由基清除能力、FRAP值、ORAC值、DNA和蛋白质氧化损伤保护潜力。结果表明,桑叶生物碱在模拟胃肠消化后,DPPH自由基清除能力、FRAP值极显著提高,是未消化时的3. 88、2. 44倍(P <0. 01);在油脂体系中具有较好的清除自由基作用,消化后其对β-胡萝卜素褪色的抑制率分别95. 14%,是未消化时的6. 12倍(P <0. 01);ORAC值显著提高到595. 23μmol Trolox/10 g md(P <0. 05),较未消化时增长了49. 31%;桑叶生物碱经过胃肠消化后显著降低BSA羰基含量(P <0. 05),较未消化时减少了30. 24%,且有效保护DNA不被损伤。基于研究结果,桑叶生物碱作为功能性食品(抗氧化剂)具有较大潜力。

维生素C对紫外线诱发DNA损伤的保护作用

用拉曼光谱探讨维生素C对紫外线诱发DNA损伤的保护作用。测量了小牛胸腺DNA水溶液及其添加微量维生素C并经过9min和30min紫外辐射的拉曼光谱,紫外线的辐射照度为18.68W/m2。实验结果表明:在浓度为0.2mmol/L的维生素C存在的条件下,全波段的紫外辐射对DNA只造成了轻微的损伤。DNA被保护可能是因为紫外辐射虽然产生了对DNA损伤很大的自由基,但维生素C具有清除自由基的能力。另外由于DNA和维生素C在260nm处对紫外线都有很强的吸收能力,因此也可能是维生素C对紫外线的吸收能力强于DNA,从而保护了DNA。

桑椹中酚类物质极性分布及抗氧化活性评价

采用超声波辅助,用不同极性的溶剂提取红果2号桑椹,测定并分析各提取浸膏的酚类含量,自由基清除能力、抗脂质过氧化能力、总还原力和DNA保护潜力。研究结果表明,乙醇提取物浸膏(absolute ethanol extracts of fruit,FAE)的酚类含量最高,为3.65 mg GAE/g dw,且总还原力和羟基自由基(·OH)清除力最强(P<0.05);乙酸乙酯提取物浸膏(ethyl acetate extracts of fruit,FEE)的DPPH自由基(DPPH·)清除力(0.71mg/m L)和抗脂质过氧化能力最强;水提取物浸膏(water extracts of fruit,FWE)的ABTS自由基(ABTS+·)清除力最强(3.52 mg/m L),且能有效保护DNA不被损伤;石油醚提取物浸膏(petroleum ether extracts of fruit,FPE)酚类含量最低,且4种活性均最弱。基于实验结果,红果2号桑椹具有作为功能性保健品(天然抗氧化剂)的巨大潜力。

重组人过氧化氢酶在大肠杆菌中的表达、纯化和活性检测

为了了解人过氧化氢酶在各种常见肿瘤细胞中的表达情况,构建人过氧化氢酶的原核表达载体,在大肠杆菌中表达、纯化人过氧化氢酶,并进行活性检测.我们通过常规分子克隆手段构建原核表达载体pET-15bhCAT,将其转化大肠杆菌Rosetta-gami,经过IPTG诱导,表达产物经超声破碎后用Ni-NTA柱进行亲和层析纯化,用试剂盒检测重组hCAT酶活性,然后检测其对DNA氧化损伤的保护作用.通过荧光定量PCR(qPCR)测定hCAT基因在HLF-1正常细胞与几种常见肿瘤细胞中的表达情况.本研究成功构建了pET-15b-hCAT的原核表达载体,SDSPAGE检测结果表明,IPTG诱导表达出一条分子质量约为59.7 ku的目的蛋白,该蛋白主要以可溶的形式存在,活性检测表明经纯化得到的rhCAT比活力为62.9 U/mg,pUC19质粒氧化损伤保护实验显示rhCAT对DNA有一定的损伤保护作用.qPCR检测显示hCAT基因在U937、K562、PC3、HeLa、HT-1080、HepG-2等肿瘤细胞中的表达量明显低于HLF-1正常细胞.成功构建了人过氧化氢酶的原核表达载体,利用大肠杆菌Rosetta-gami获得了hCAT的可溶性表达,纯化的rhCAT具有活性,hCAT基因在U937、K562、PC3、HeLa、HT-1080、HepG-2等肿瘤细胞中的表达量明显低于HLF-1正常细胞.这为后续功能研究及性质实验奠定了基础.

紫色丝膜菌抗氧化及降低细胞内活性氧作用

贺兰山紫蘑菇是主要分布在内蒙古阿拉善盟和宁夏境内贺兰山地区的野生食用菌。以贺兰山紫蘑菇的主要代表种—紫色丝膜菌(Cortinarius purpurascens)为材料,对其抗氧化活性进行研究。结果表明:紫色丝膜菌甲醇提取物乙酸乙酯相的活性最好,在0.5 mg/mL的浓度下对DPPH和羟基自由基的清除率分别达88.3%和96.8%;紫色丝膜菌甲醇提取物乙酸乙酯相可显著保护自由基诱导的DNA断裂;在0.05 mg/mL时对叔丁基过氧化氢引起的细胞内活性氧水平有极显著降低作用,在0.15mg/mL时可将细胞内升高的活性氧降低到正常水平。

化学发光法测定樟树果红色素抗氧化活性的研究

采用化学发光法研究了樟树果实红色素(RPCF)的抗氧化活性及其对DNA损伤的保护作用。运用Pyrogallol-Luminol化学发光体系测定了RPCF对超氧阴离子的清除作用,CuSO4-Phen-VC-H2O2体系测定了RPCF对羟基自由基的清除作用,H2O2-Luminol体系测定了RPCF对双氧水的清除作用,CuSO4-Phen-VC-H2O2-DNA测定了RPCF对体外DNA损伤的保护作用。试验结果表明RPCF有较好的清除活性氧和保护DNA损伤的活性,其清除.O2-、.OH、H2O2能力及对DNA损伤的保护作用的半抑制浓度(IC50)分别为0.207,0.383,0.227和0.401 mg/mL。