缺氧诱导因子1α、Bcl-2/腺病毒E1B19kDa相互作用蛋白3在儿童创伤性脑损伤中的表达及意义

目的动态观察缺氧诱导因子1α(hypoxia-inducible factor 1α,HIF-1α)、Bcl-2/腺病毒E1B19kDa相互作用蛋白3(Bcl-2/adenovirus E1B19kDa-interacting protein 3,BNIP3)在儿童创伤性脑损伤(traumatic brain injury,TBI)中的变化,并评估其预测儿童TBI病情轻重及预后的临床价值。方法前瞻性纳入2021年1月—2023年7月47例中重度TBI患儿为研究对象,根据格拉斯哥昏迷评分分为中度亚组(9~12分)和重度亚组(3~8分);以同期因腹股沟斜疝诊治且无基础疾病的30例患儿为对照组。比较各组HIF-1α、BNIP3、自噬相关蛋白Beclin-1及S100B水平的差异,采用受试者操作特征曲线(receiver operating characteristic curve,ROC曲线)评估HIF-1α、BNIP3、Beclin-1及S100B对TBI病情轻重及预后的预测价值。结果TBI组患儿血清HIF-1α、BNIP3、Beclin-1、S100B水平高于对照组(P<0.05);TBI患儿中,重度亚组HIF-1α、BNIP3、Beclin-1、S100B水平高于中度亚组(P<0.05)。相关性分析显示,血清HIF-1α、BNIP3、Beclin-1、S100B水平与格拉斯哥昏迷评分呈负相关(P<0.05)。治疗7 d后,非手术TBI和手术TBI患儿的血清HIF-1α、BNIP3、Beclin-1及S100B水平均较治疗前下降(P<0.05)。ROC曲线分析显示,血清HIF-1α、BNIP3、Beclin-1、S100B水平预测重度TBI的曲线下面积分别为0.782、0.835、0.872、0.880(P<0.05),预测TBI预后不良的曲线下面积分别为0.749、0.775、0.814、0.751(P<0.05)。结论TBI患儿血清HIF-1α、BNIP3及Beclin-1水平显著升高,检测其水平有助于临床判断TBI患儿的病情轻重及预后。

急性药物性肝损伤患者血清核因子E2相关因子2、血红素加氧酶-1、脂肪酸结合蛋白4、缺氧诱导因子1α表达意义及其与肝功能指标相关性研究

目的:探讨急性药物性肝损伤患者血清核因子E2相关因子2(Nrf2)、血红素加氧酶-1(HO-1)、脂肪酸结合蛋白4(FABP4)、缺氧诱导因子1α(HIF-1α)表达意义及其与肝功能指标的相关性。方法:回顾性选取62例急性药物性肝损伤患者的临床资料作为病例组,另选80例健康体检者的临床资料作为对照组。比较两组血清Nrf2、HO-1、FABP4、HIF-1α及肝功能指标水平,用Pearson相关性分析急性药物性肝损伤患者血清Nrf2、HO-1、FABP4、HIF-1α水平与肝功能的相关性,并绘制受试者工作特征曲线(ROC)分析血清Nrf2、HO-1、FABP4、HIF-1α水平联合检测对急性药物性肝损伤的诊断价值。结果:病例组血清Nrf2、HO-1、FABP4、HIF-1α及谷丙转氨酶(ALT)、碱性磷酸酶(ALP)、谷草转氨酶(AST)、谷氨酰转移酶(GGT)、总胆红素(TBIL)水平高于对照组(均P<0.05)。Pearson相关性分析结果显示,急性药物性肝损伤患者血清Nrf2水平与血清ALT、AST、TBIL水平呈负相关(r=-0.763、-0.741、-0.685,均P<0.05);血清HO-1水平与血清ALT、AST、TBIL水平呈负相关(r=-0.489、-0.524、-0.568,均P<0.05);血清FABP4水平与血清AST、TBIL水平呈正相关(r=0.509、0.512,均P<0.05);血清HIF-1α水平与血清ALT、AST、TBIL水平呈正相关(r=0.527、0.486、0.542,均P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,血清Nrf2、HO-1、FABP4、HIF-1α水平联合检测诊断急性药物性肝损伤的曲线下面积(AUC)值为0.919,高于血清Nrf2、HO-1、FABP4、HIF-1α水平单独检测(0.787、0.822、0.824、0.772,均P<0.05)。结论:血清Nrf2、HO-1、FABP4、HIF-1α在急性药物性肝损伤患者中呈高表达,其表达水平与患者肝功能损伤有关,且四者联合检测对急性药物性肝损伤的诊断价值更高。

肝细胞DNA损伤诱导蛋白DDI2的单克隆抗体制备及鉴定

目的制备鼠抗DDI2蛋白单克隆抗体,并对其在细胞和组织中的定位进行初步研究。方法利用体外原核表达的DDI2蛋白,免疫BLAB/c小鼠,制备单克隆抗体。利用免疫组织化学技术明确该蛋白在组织中的定位。结果利用杂交瘤细胞技术,成功制备了两株DDI2单克隆抗体细胞系2H3、2B2。表达纯化的单克隆抗体具有较高的免疫活性。与正常对照组相比,肝损伤组织中该蛋白表达增强,且高表达于门脉周围肝实质细胞,并主要表达于细胞核。结论 DDI2的表达与四氯化碳诱导的肝损伤有关,损伤肝细胞主要表达于肝实质细胞的细胞核。

糖基转移酶抑制剂诱导原代肝细胞损伤中DNA损伤诱导蛋白DDI2 mRNA表达的研究

目的研究糖基转移酶抑制剂对原代培养大鼠肝细胞损伤中DNA损伤诱导蛋白2(DNA-damage inducible protein 2,DDI2)在mRNA水平表达的影响。方法原位胶原酶灌流法分离纯化大鼠原代肝细胞并培养,并用O-糖基化修饰抑制剂苄基-2-乙酰胺基-2-脱氧-α-D-吡喃半乳糖苷(Benzyl-α-GalNAc)及N-糖基化修饰抑制剂衣霉素(tunicamycin,TM)处理细胞,Real time-PCR法测定DDI2 mRNA表达水平。结果衣霉素处理后的原代培养肝细胞DDI2表达上调,而Benzyl-α-GalNAc处理后的原代培养细胞DDI2表达有所下调。结论衣霉素及Benzyl-α-GalNAc在转录水平上分别上调和下调大鼠原代肝细胞DDI2的表达,从而参与肝细胞损伤的调节。

冬凌草甲素诱导人胰腺癌SW1900细胞DNA损伤及对H2AX蛋白表达的影响

目的研究冬凌草甲素(ORI)诱导胰腺癌SW1900细胞DNA损伤对磷酸化组蛋白(H2AX)表达的影响。方法彗星实验检测ORI诱导胰腺癌SW1900细胞DNA损伤的程度。Western印迹检测不同浓度ORI作用胰腺癌SW1900细胞后H2AX蛋白的磷酸化。免疫荧光实验检测Phos-S1981ATM和γ-H2AX焦点。结果彗星实验结果表明不同浓度的ORI(20,40,80μmol/L)处理SW1900细胞48 h后,可发生DNA损伤,并且随浓度增加,DNA损伤加重。Western印迹检测不同浓度ORI作用胰腺癌SW1900细胞后,H2AX蛋白发生磷酸化,γ-H2AX随着浓度增加表达增大。免疫荧光实验发现Phos-S1981ATM和γ-H2AX焦点随着浓度增加表达量增加。结论 ORI可以诱导胰腺癌SW1900细胞DNA损伤;H2AX蛋白发生磷酸化,具体DNA损伤信号通路有待进一步研究。

circMAN1A2调节miR-212-3p/DDIT4轴对胃癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响

目的探究circMAN1A2靶向miR-212-3p/DNA损伤诱导转录子4(NDA damage-inducible transcript 4,DDIT4)轴对胃癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响。方法qRT-PCR法检测胃癌组织和细胞中circMAN1A2、miR-212-3p表达水平。荧光素酶检测circMAN1A2与miR-212-3p、DDIT4和miR-212-3p的靶向关系。在胃癌细胞SGC-7901、HGC-27中转染si-NC、si-circMAN1A2、si-circMAN1A2+anti-NC、si-circMAN1A2+anti-miR-212-3p、miR-NC、miR-212-3p mimics,将未转染的SGC-7901、HGC-27细胞设为对照。平板克隆实验检测细胞增殖;细胞划痕及Transwell实验分别检测细胞迁移、侵袭能力。Western blotting检测增殖、迁移及侵袭相关蛋白表达。结果在胃癌组织及细胞中,circMAN1A2高表达,miR-212-3p低表达;下调circMAN1A2可以靶向上调miR-212-3p表达,且下调DDIT4表达,进而抑制胃癌细胞增殖、侵袭和迁移能力。抑制miR-212-3p表达可部分逆转抑制circMAN1A2表达对胃癌细胞恶性增殖的抑制作用。结论在胃癌细胞中抑制circMAN1A2表达可抑制胃癌细胞增殖、迁移与侵袭,其与调节miR-212-3p/DDIT4信号轴有关。

2-甲基-1,4-萘醌对DNA光敏损伤的诱导作用

选择波长 337nm的激光作为激励光源 ,借助凝胶电泳研究了 2 甲基 1,4 萘醌诱导的DNA光敏损伤 .结果表明 :在氧气饱和、脱氧条件下光敏损伤显著 ,DNA损伤主要与光子剂量、核酸与萘醌浓度比及DNA存在形式有关 .

缺氧诱导因子-1α与基质金属蛋白酶-2在慢性压迫性颈脊髓损伤大鼠模型中的表达及意义

目的 :探讨缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)和基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinases-2,MMP-2)在慢性压迫性颈脊髓损伤大鼠模型中的表达及意义。方法 :将80只成年SD大鼠随机分为假手术组和慢性压迫性颈脊髓损伤组(脊髓压迫组),每组40只。大鼠麻醉后充分显露C5和C6椎板,切除C5左侧半椎板,显露硬脊膜,脊髓压迫组在C6椎板和硬脊膜之间置入吸水后可膨胀聚氨酯薄板(1×3×1mm);假手术组只显露硬脊膜不置入压迫物。两组分别通过BBB(Basso Beattie Bresnahan)评分和体感诱发电位(somatosensory evoked potential,SEP)检测评估脊髓功能;于造模后7d、28d、42d和70d时处死大鼠取颈脊髓组织进行HIF-1α及MMP-2免疫组化染色,检测其在各时间点的表达量(IOD值),采用独立样本t检验比较两组各时间点的差异,分析HIF-1α、MMP-2与脊髓功能变化的相关性。结果:造模后7d时,两组BBB评分无显著性差异;SEP潜伏期显著性延长,波幅显著性降低;HIF-1α显著性降低,MMP-2显著性升高。28d时脊髓压迫组BBB评分显著性低于假手术组,SEP潜伏期与7d比较显著性延长(P<0.05)、波幅显著性降低(P<0.05),HIF-1α表达显著性增高(P<0.05),而MMP-2表达显著性降低(P<0.05)。42d时,脊髓压迫组BBB评分、SEP潜伏期和波幅与28d时比较无显著性差异,HIF-1α表达显著性增高(P<0.05),而MMP-2表达显著性降低(P<0.05);70d时脊髓压迫组神经功能较28d时显著性改善,BBB评分显著性增高(P<0.05),SEP潜伏期显著性缩短(P<0.05)、波幅显著性升高(P<0.05);HIF-1α表达较前显著性降低,而MMP-2表达升高,但与假手术组比较仍有显著性差异(P<0.05)。HIF-1α表达量与BBB评分呈显著性负相关(r=-0.458,P<0.05),MMP-2表达量与BBB评分呈显著性正相关(r=0.903,P<0.05)。结论:大鼠慢性压迫性脊髓损伤后具有一定程度的自我修复能力,HIF-1α、MMP-2表达变化与慢性脊髓压迫性损伤后神经功能改善相关。

金属硫蛋白拮抗NaAs_2O_2致DNA损伤的研究

[目的 ]利用金属硫蛋白基因敲除小鼠和野生型小鼠染毒NaAs2 O2 ,观察不同脏器的细胞DNA损伤的情况 ,探讨金属硫蛋白的抗NaAs2 O2 致DNA损伤的作用。 [方法 ]选用成年的金属硫蛋白基因敲除的C57小鼠和野生型C57小鼠 ,皮下注射NaAs2 O210mg/kg ,3h后剖杀动物 ,取脾脏、胸腺、肝脏和骨髓制成细胞悬液 ,运用单细胞凝胶电泳技术 ,观察DNA损伤情况 ,各脏器计数 10 0个细胞中DNA链断裂的细胞个数及其尾长。并用单因素方差分析进行统计学检验。 [结果 ]基因敲除小鼠在染毒NaAs2 O2 后 ,彗星细胞所占比例脾脏 :16 75 % ,胸腺 :18 75 % ,肝脏 :8 5 0 % ,骨髓 :17 5 0 % ,与对照组相比均有显著差异 ;而野生型小鼠脾脏 :8 75 %、胸腺 :12 75 %、肝脏 :1 0 0 %、骨髓 :14 2 5 % ,其中仅肝脏与其对照组比较没有显著差异。野生型的对照组与基因敲除小鼠的对照组比较没有显著差异。在脾脏、胸腺、骨髓中 ,野生型染毒组彗星细胞数则较基因敲除组小鼠少 ,具有显著差异。按NaAs2 O2 染毒导致细胞DNA损伤的严重程度 (测量细胞的尾长 ) ,基因敲除的小鼠脾脏 :( 6 5 9± 2 73)μm、胸腺 :( 6 91± 1 2 6 ) μm、肝脏 :( 2 5 6± 1 0 8) μm、骨髓 :( 7 6 5± 4 5 1) μm ,均显著高于其对照组 ;野生型的仅肝脏细胞与其?

沉默JMJD2B通过诱导DNA损伤抑制人胃癌细胞的恶性表型

目的:探讨人胃癌细胞中含Jumonji结构域的蛋白2B(JMJD2B)与DNA损伤反应之间的关系,及其在肿瘤恶性表型中的作用。方法:应用JMJD2B siRNA特异性抑制人胃癌细胞MGC803和SGC7901中JMJD2B的表达,采用Western blotting检测经处理后DNA损伤特异性标志物磷酸化H2AX(γH2AX)的表达,通过DNA损伤检测方法彗星实验测定DNA拖尾的情况,并分别采用CCK-8和流式细胞仪分析细胞增殖、细胞周期分布及细胞凋亡情况。结果:人胃癌细胞MGC803和SGC7901中,JMJD2B siRNA特异性抑制了JMJD2B的表达,γH2AX表达上调,同时彗星实验提示DNA拖尾百分比明显增加,肿瘤细胞发生了G_( 2)/M或G _(0)/G _(1)期阻滞,细胞凋亡比例增加,细胞增殖显著受抑(P<0.05)。结论:沉默JMJD2B可诱导人胃癌细胞发生DNA损伤,进而抑制了癌细胞的恶性表型。

DNA损伤诱导的长链非编码RNA(DINO)下调MMP2表达抑制人绒毛膜滋养层细胞侵袭与迁移

目的探讨DNA损伤诱导的长链非编码RNA(DINO)通过调控迁移相关因子基质金属蛋白酶2(MMP2)的表达对人绒毛膜滋养层细胞侵袭与迁移的影响。方法收集子痫前期(PE)患者和正常孕妇的胎盘组织(对照组)各20例,Masson染色观察胎盘组织结构改变,免疫荧光组织化学染色检测胎盘组织滋养层细胞MMP2的表达;实时荧光定量PCR检测DINO的表达;将HTR-8/SVneo人绒毛膜滋养层细胞转染DINO小干扰片段(si-DINO)后,实时荧光定量PCR验证DINO、MMP2 mRNA表达,Western blot法检测MMP2蛋白表达;Transwell^(TM)侵袭实验和细胞划痕实验检测细胞侵袭、迁移情况。结果与对照组相比,PE患者血压、蛋白尿水平明显增高;胎盘组织可见纤维素样坏死,绒毛膜绒毛减少;免疫荧光显示胎盘滋养层细胞MMP2表达减弱、DINO表达增加;转染si-DINO后,DINO表达降低,而MMP2 mRNA及蛋白表达增加,HTR-8/SVneo细胞侵袭和迁移能力显著增加。结论DINO下调MMP2表达,抑制胎盘滋养层细胞的侵袭与迁移。

4-羟基-2-壬烯酸诱导培养的主动脉内皮细胞DNA损伤

研究 4 羟基 2 壬烯酸对体外培养的主动脉内皮细胞作用 ,以探讨动脉粥样硬化的发病机理。采用单细胞凝胶电泳检测DNA损伤 ,对体外培养的主动脉内皮细胞在不同浓度 4 羟基 2 壬烯酸作用下产生的DNA损伤进行检测。结果发现 ,体外培养的主动脉内皮细胞分别用 5 μmol L、10 μmol L和 15 μmol L 4 羟基 2 壬烯酸处理 10h后彗星试验的尾距分别为 32 .8± 1.1、4 4 .3± 1.0和 74 .6± 1.0 ,与未用 4 羟基 2 壬烯酸处理的正常对照组彗星试验的尾距 (6 .0± 0 .7)比较 ,差异有显著性 (P <0 .0 0 1) ,经 1μmol L 4 羟基 2 壬烯酸处理后的主动脉内皮细胞彗星试验的尾距为 11.3± 0 .9,与正常对照组比较 ,两者之间差异无显著性 (P >0 .0 5 )。结果提示 ,4 羟基 2 壬烯酸可导致体外培养的主动脉内皮细胞的DNA损伤 ,并随着 4 羟基 2 壬烯酸的浓度增高DNA损伤加剧。

诱导性低温复苏对失血性休克大鼠肠组织Ca^(2+)/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅰ表达影响

目的探讨诱导性低温复苏对失血性休克大鼠肠组织Ca^(2+)/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅰ(CaMKⅠ)表达的影响。方法选取成年雄性Wistar大鼠30只,随机分为假手术组(n=6)、常温复苏组(n=12)以及低温复苏组(n=12)。假手术组仅进行外科插管及相关手术操作,不建立失血性休克模型;常温复苏组及低温复苏组每只大鼠放血25 ml/kg,构建失血性休克模型,休克60 min后分别采取38℃和32℃复苏并维持60 min,复苏结束后将大鼠体温恢复至38℃并监测血流动力学3 h。大鼠复苏3 h后,3组均随机选取50%的大鼠处死,取小肠黏膜、肠系膜淋巴结及血液,剩余大鼠进行72 h生存分析。采用定量聚合酶链式反应(PCR)及蛋白质印迹法分别检测3组大鼠肠黏膜中CaMKⅠmRNA及蛋白表达情况,应用酶联免疫吸附试剂盒检测大鼠血清炎性因子表达情况,同时,进行细菌移位检测。结果复苏3 h后,低温复苏组大鼠的心率和平均动脉压(MAP)均低于常温复苏组,而心输出量、每搏量和射血分数均高于常温复苏组,差异有统计学意义(P<0.05)。设定72 h为观察终点,假手术组大鼠于观察终点时全部存活,低温复苏组大鼠的生存时间为(63.50±9.59)h,明显长于常温复苏组的(46.83±19.59)h,差异有统计学意义(P<0.05)。在液体复苏3 h后,低温复苏组CaMKⅠmRNA表达水平、灰度值均明显低于常温复苏组,差异有统计学意义(P<0.05);常温复苏组与低温复苏组CaMKⅠmRNA、蛋白表达水平均明显高于假手术组,差异有统计学意义(P<0.05)。假手术组大鼠血清中CaMKⅠ、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1β、IL-6和IL-8水平明显低于常温复苏组和低温复苏组,IL-10水平高于常温复苏组,但低于低温复苏组,差异有统计学意义(P<0.05)。低温复苏组大鼠血清中CaMKⅠ、TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-8水平明显低于常温复苏组,IL-10水平明显高于常温复苏组,差异有统计学意义(P<0.05)。复苏3 h后,低温复苏组大鼠血液细菌移位量、肠系膜淋巴结细菌移位量均明显低于常温复苏组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论在诱导性低温复苏条件下,失血性休克大鼠肠组织中CaMKⅠmRNA及蛋白水平表达降低,大鼠生存时间延长,CaMKⅠ下调可能是诱导性低温复苏减轻大鼠失血性休克肠缺血再灌注损伤的重要分子机制。

miR-22通过靶向抑制DDIT4促进糖尿病肾病肾小管上皮细胞DNA损伤

目的:探究在糖尿病肾病(DKD)中微小RNA-22(miR-22)是否能靶向抑制DNA损伤诱导转录物4(DDIT4)的表达,进而通过毛细血管扩张性共济失调突变蛋白(ATM)-细胞周期检查点激酶2(Chk2)通路促进DNA损伤。方法:(1)C57BL小鼠建立糖尿病(DM)模型,于16周后处死,分析其生化指标并对肾脏组织做HE染色,Western blot检测肾脏组织中p-ATM、p-Chk2和DDIT4蛋白水平;(2)分别用高糖(30 mmol/L葡萄糖)和正常糖(5.5 mmol/L葡萄糖)培养基培养大鼠肾小管上皮细胞NRK-52E,彗星实验检测DNA双链断裂程度,流式细胞术检测高糖对细胞周期的影响,Western blot检测细胞中p-ATM、p-Chk2和DDIT4蛋白水平;(3)构建DDIT4过表达质粒,转染NRK-52E细胞后通过彗星实验检测DDIT4过表达对DNA双链断裂的影响,并构建miR-22模拟物(mimics)和抑制物(inhibitor),分别转染miR-22 mimics和inhibitor,通过Western blot检测细胞中p-ATM、p-Chk2和DDIT4蛋白水平。结果:(1)DM组小鼠肾组织中p-ATM和p-Chk2蛋白水平显著增高,DDIT4蛋白水平显著下降(P<0.05)。(2)高糖培养的NRK-52E细胞比正常糖培养的细胞彗尾更长,p-ATM和p-Chk2蛋白水平显著增高,DDIT4蛋白水平显著下降(P<0.05)。(3)高糖培养的NRK-52E细胞过表达DDIT4后,p-ATM和p-Chk2蛋白水平显著降低,细胞彗尾变短;转染miR-22 mimics后,p-ATM和p-Chk2蛋白水平显著增高,DDIT4蛋白水平显著下降;转染miR-22 inhibitor后,p-ATM和p-Chk2蛋白水平显著下降,DDIT4蛋白水平显著增高(P<0.05)。结论:高糖可导致DNA损伤加重,其机制可能为miR-22靶向抑制DDIT4表达,诱导肾小管上皮细胞发生DNA损伤,从而促进DKD的发生发展。

磷酸化组蛋白H2AX介导的DNA损伤精子受精卵内修复

成熟精子易受外界影响产生DNA损伤,却缺乏DNA损伤修复系统。由于DNA损伤精子仍具有受精能力和发育潜力,其损伤修复可能发生在受精后。遗憾的是,DNA损伤精子受精后的修复机制尚不清楚。研究发现磷酸化组蛋白H2AX(histone H2AX phosphorylation,γH2AX)参与了DNA损伤精子受精后的修复。本综述主要探讨DNA损伤精子受精后受精卵内经由γH2AX介导修复的可能机制。

苯并芘诱导细胞转化过程中PP2A B56ε表达与DNA损伤修复功能的研究

目的探讨蛋白磷酸酶2A-B56ε亚基(PP2A B56ε,由PPP2R5E基因编码)的表达在苯并芘诱导细胞转化过程中对DNA损伤修复功能的影响。方法实时荧光定量-PCR(QRT-PCR)检测BEAS-2B细胞(人正常肺上皮细胞)、和BEAS-2BT细胞(苯并芘诱导恶变的人肺上皮细胞)中PPP2R5E的mRNA转录水平;免疫印迹法(Western Blot)检测细胞中B56ε编码蛋白的水平;中性单细胞凝胶电泳实验(彗星实验,SCGE)检测喜树碱(camptothecin,CPT)处理的细胞DNA断裂损伤及修复情况;免疫印迹法检测CPT处理诱导γH2AX(磷酸化组蛋白H2AX)水平。结果与BEAS-2B细胞相比较,BEAS-2BT细胞中PPP2R5E其mRNA水平及B56ε蛋白水平均显著高表达(P<0.05)。与BEAS-2B细胞相比,经CPT处理恢复后,BEAS-2BT细胞尾距显著降低(P<0.05)。表明BEAS-2BT细胞中H2AX的磷酸化水平明显降低。结论在苯并芘诱导细胞转化过程中PP2A B56ε通过介导γH2AX去磷酸化影响DNA损伤修复功能。

人精子过氧化氧化还原蛋白2表达与精子DNA损伤的相关性

目的精子DNA损伤的分子机制尚不明确。文中旨在通过检测精子DNA正常者和精子DNA损伤患者过氧化氧化还原蛋白2(Prdx2)表达差异,分析Prdx2表达与精子DNA损伤指数(DFI)的相关性。方法收集2017年7月至2018年7月南京军区南京总医院生殖医学中心门诊67份男性不孕患者的精液标本。按DFI值分为3组:DFI正常组(DFI≤15%,n=38)、轻度损伤组(15%<DFI<30%,n=20)和重度损伤组(DFI≥30%,n=9)。通过计算机辅助精子分析系统(CASA)进行精液检测,获得精液常规参数:前向运动精子百分率(PR)、精子密度及精子总活率。提取精子中的总蛋白,Western blot检测Prdx2的表达,免疫荧光检测精子中Prdx2的定位。并分析Prdx2表达与DFI、精液常规参数的相关性。结果与DFI正常组Prdx2相对表达水平(9.06±1.80)比较,轻度损伤组(6.32±1.89)和重度损伤组(2.87±0.83)分别下降了30.2%、68.2%,差异有统计学意义(P<0.01)。免疫荧光结果显示,Prdx2主要定位于人精子中段线粒体以及精子头部核区域;重度损伤组和轻度损伤组Prdx2表达较DFI正常组均降低,其中重度损伤组的Prdx2阳性反应明显减弱。Prdx2蛋白表达与DFI呈负相关(r=-0.478,P<0.01),与PR、精子总活率呈正相关(r=0.135、0.128,P<0.01)。结论 Prdx2对精子DNA损伤患者中DNA完整性的影响可能通过维持细胞内氧化还原平衡,参与保护精子DNA免受损伤,同时影响精子运动能力来实现。

SIK2通过Akt/mTOR转导途径调节细胞自噬对减轻心肌缺血/再灌注损伤的研究

目的探讨盐诱导激酶2(saltinduceskinase2,SIK2)对大鼠心肌缺血/再灌注损伤的调控作用,及对蛋白激酶B(proteinkinaseB,Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammaliantargetofrapamycin,mTOR)通路的影响。方法将15只SD雄性大鼠随机分为假手术组、模型组(心肌缺血/再灌注损伤模型)、SIK2抑制剂组(造模前24h给予10mg/kg博舒替尼),每组5只大鼠。采用超声仪检测大鼠心脏功能,苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色评估心肌组织病理学情况,透射电镜观察心肌细胞自噬情况,Westernblot检测心肌组织Akt/mTOR通路(SIK2、p-Akt、Akt、p-mTOR、mTOR)以及自噬(Beclin-1、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、p62)相关蛋白表达水平。结果3组大鼠左心室后壁厚度(leftventricular posteriorwall,LVPW)、室间隔(interventricularseptum,IVS)组间比较差异无统计学意义(P>0.05),SIK2抑制剂组左心室短轴缩短率(leftventricularfractionshort,LVFS)以及左心室射血分数(leftventricularejectionfractions,LVEF)均高于模型组、低于假手术组(P均<0.01),模型组LVFS、LVEF均低于假手术组(P均<0.01)。与假手术组比较,模型组心肌组织病理损伤明显,自噬小体明显增加,SIK2抑制剂组心肌组织病理损伤、心肌细胞自噬情况较模型组明显改善。SIK2抑制剂组Beclin-1、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ蛋白表达量低于模型组、高于假手术组,p62蛋白表达量高于模型组、低于假手术组(P均<0.05)。3组大鼠Akt、mTOR表达水平差异无统计学意义(P均>0.05),SIK2抑制剂组SIK2水平高于假手术组、低于模型组,而p-Akt、p-mTOR水平高于模型组,模型组p-Akt、p-mTOR水平低于假手术组(P均<0.05)。结论抑制SIK2可减少心肌细胞异常自噬,改善心肌缺血/再灌注损伤,其作用机制可能与SIK2调控Akt/mTOR信号通路有关。

神经损伤诱导蛋白2在胶质瘤中的表达及其意义

目的:探讨细胞黏附分子神经损伤诱导蛋白2(Ninjurin2)在胶质瘤中的表达及其意义。方法:采用免疫组化染色法检测88例胶质瘤组织和30例正常脑组织中Ninjurin2的表达,用COX多因素分析和Kaplan-Meier曲线分析胶质瘤患者的生存预后,蛋白印迹法检测人胶质瘤细胞系U251、U87、U373和正常胶质细胞系SVG中Ninjurin2的表达。取U251细胞,用Lipofectamine®2000试剂分别转染Ninjurin2 siRNA序列(Ninjurin2-siRNA组)、阴性对照序列(NC-siRNA组),细胞增殖实验评估两组细胞的增殖能力,肿瘤小室实验检测两组肿瘤细胞的侵袭能力。结果:胶质瘤组织中Ninjurin2蛋白高表达率为65.91%(58/88),高于正常脑组织的20.00%(6/30)(P<0.05)。COX多因素分析结果显示,术前卡氏评分(OR=2.312)、WHO分级(OR=2.008)、化疗(OR=1.600)和Ninjurin2(OR=2.816)是胶质瘤患者总生存期的独立影响因素(均P<0.05)。Ninjurin2高表达组中位生存时间为11个月,明显低于低表达组的19个月(P=0.004)。与SVG细胞比较,U251、U87和U373细胞中Ninjurin2蛋白相对表达量较高(均P<0.05)。与NC-siRNA组比较,Ninjurin2-siRNA组U251细胞增殖和侵袭能力明显下降(均P<0.05)。结论:Ninjurin2可能参与胶质瘤进展,Ninjurin2高表达与患者不良生存预后有关。

尿基质金属酶蛋白抑制剂-2和胰岛素样生长因子结合蛋白7联合检测在对比剂诱导急性肾损伤中的早期预测作用

目的 探讨对比剂(contrast medium,CM)损伤后,基质金属酶蛋白抑制剂-2(tissue inhibitor of metalloproteinases-2,TIMP-2)和胰岛素样生长因子结合蛋白7(insulin-like growth factorbinding protein 7,IGFBP7)在肾组织及尿液中的表达及尿[TIMP-2]·[IGFBP7]对急诊经皮冠状动脉介入治疗(primary percutaneous coronary intervention,PPCI)患者术后发生对比剂诱导的急性肾损伤(contrast-induced acute kidney injury,CI-AKI)的早期预测作用。方法 将20只大鼠按随机数字表法分为CI-AKI组(n=9)和对照组。采集大鼠术前及术后24 h动脉血液,检测血肌酐(serum creatinine,Scr);术后24 h采集大鼠肾组织标本,采用HE染色评价肾组织损伤情况,并于电镜下观察肾小管上皮细胞超微结构改变情况;进行免疫组化及蛋白质印迹法检测,观察TIMP-2和IGFBP7在肾组织中的表达。收集大鼠术前、术后4 h、12 h、24 h尿标本,采用酶联免疫吸附法(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)方法检测尿TIMP-2和尿IGFBP7水平。临床上,纳入临泉县人民医院2019年6月至2020年12月行PPCI患者109例,收集患者的一般资料及实验室检查指标,留取术前、术后6 h、12 h、24 h尿标本,使用NephroCheck?试剂盒检测尿[TIMP-2]·[IGFBP7]水平,绘制术后6 h尿[TIMP-2]·[IGFBP7]预测CI-AKI的ROC曲线,评估其对于CI-AKI早期预测的价值。结果 CI-AKI组大鼠术后24 h的Scr升高,显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组相比,CI-AKI组大鼠肾组织HE染色可以观察到明显的小管上皮细胞空泡样变性、核固缩及凋亡小体形成,Paller评分明显高于对照组(P<0.05),电镜下可见广泛线粒体自噬体形成。CI-AKI组大鼠术后尿TIMP-2水平于术后4 h达到峰值,显著高于同期对照组水平(P<0.05)。CI-AKI组大鼠尿IGFBP-7水平于术后4 h开始升高,12 h达峰,术后4 h及12 h水平均高于同期对照组(P<0.05)。免疫组化和蛋白质印迹法结果显示,CM损伤后,TIMP-2和IGFBP7在肾小管上皮细胞中表达均显著升高。109例患者中有16例发生了CI-AKI,发生率为14.7%。发生CI-AKI的PPCI患者,尿[TIMP-2]·[IGFBP7]水平在术后6 h达峰,显著高于同期对照组水平(P<0.05)。以术后6 h的尿[TIMP-2]·[IGFBP7]结果绘制ROC曲线,其预测CI-AKI的AUC为0.841。以0.33作为界值,其预测CI-AKI的敏感性为0.750,特异性为0.893。结论 CM损伤后TIMP-2和IGFBP7在肾小管细胞及尿液中的表达均显著升高。尿[TIMP-2]·[IGFBP7]对于PPCI患者术后CI-AKI的发生具有早期预测作用。