长链非编码RNA在急性肺损伤中的作用及分子调控机制研究进展

急性肺损伤(ALI)是临床上常见的危重症之一。长链非编码RNA(lncRNA)是一类长度超过200个核苷酸的非蛋白质编码RNA,在染色质形成、转录和转录后翻译等基因表达水平直接或间接参与ALI的发生发展。lncRNA核富集丰富转录物1、lncRNA HOX转录反义基因间RNA及lncRNA牛磺酸上调1等lncRNA可作为竞争性内源RNA,与miR-26a-5p、miR-17-5p及miR-34b-5p等微小RNA结合,调节Wnt1诱导的信号通路蛋白1、Rho关联含卷曲螺旋结合蛋白激酶1蛋白及自噬相关蛋白等下游相关蛋白的表达,参与ALI的发生发展。LncRNA可能通过调控DNA甲基化、组蛋白修饰,在表观遗传水平参与ALI的发生发展;L通过组装转录激活因子和抑制因子,调节白细胞介素6(IL-6)、IL-17、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3/9等蛋白质的转录,在转录水平参与ALI的发生发展;与多种RNA结合蛋白相互作用,在转录后水平调控ALI的发生发展。

DNA损伤激活的长链非编码RNA促进多发性骨髓瘤细胞增殖及耐药研究

目的:探讨DNA损伤激活的长链非编码RNA(NORAD)对多发性骨髓瘤(MM)细胞增殖及对硼替佐米(BTZ)化疗耐药性的影响。方法:应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测健康人和骨髓瘤患者、不同MM细胞系中NORAD表达差异,并分析其与MM患者生存率关系;运用慢病毒转染技术,干扰细胞系中NORAD的表达,检测其表达差异;定量PCR(qPCR)检测骨髓瘤细胞系中人类非编码RNA-144a-3p(hsa-miR-144a-3p)的表达;采用双荧光酶素报告验证NORAD和hsa-miR-144a-3p的结合;通过RNA结合蛋白免疫沉淀(RIP)实验进一步验证LncRNA和miRNA的结合;细胞计数试剂8(CCK8)法检测各细胞处理后细胞活性。细胞克隆试验检测细胞增殖能力。结果:MM患者细胞系中NORAD常高表达,提示预后差,生存期短;敲除NORAD基因后,MM耐药细胞系对BTZ药物敏感性增加。MM患者hsa-miR-144a-3p高表达,在骨髓瘤细胞系中加用miR-144a-3p类似物时细胞增殖能力下降;NORAD低表达可显著抑制细胞增殖,细胞对药物敏感性增强。细胞克隆形成实验也证实NORAD低表达可抑制癌细胞增殖。结论:NORAD高表达可增强MM对BTZ化疗耐药性,NORAD可直接与hsa-miR-144a-3p结合,上调其在MM细胞中的表达,进一步调控癌细胞增殖,同时调控患者对BTZ药物敏感性。

DNA损伤诱导的长链非编码RNA(DINO)下调MMP2表达抑制人绒毛膜滋养层细胞侵袭与迁移

目的探讨DNA损伤诱导的长链非编码RNA(DINO)通过调控迁移相关因子基质金属蛋白酶2(MMP2)的表达对人绒毛膜滋养层细胞侵袭与迁移的影响。方法收集子痫前期(PE)患者和正常孕妇的胎盘组织(对照组)各20例,Masson染色观察胎盘组织结构改变,免疫荧光组织化学染色检测胎盘组织滋养层细胞MMP2的表达;实时荧光定量PCR检测DINO的表达;将HTR-8/SVneo人绒毛膜滋养层细胞转染DINO小干扰片段(si-DINO)后,实时荧光定量PCR验证DINO、MMP2 mRNA表达,Western blot法检测MMP2蛋白表达;Transwell^(TM)侵袭实验和细胞划痕实验检测细胞侵袭、迁移情况。结果与对照组相比,PE患者血压、蛋白尿水平明显增高;胎盘组织可见纤维素样坏死,绒毛膜绒毛减少;免疫荧光显示胎盘滋养层细胞MMP2表达减弱、DINO表达增加;转染si-DINO后,DINO表达降低,而MMP2 mRNA及蛋白表达增加,HTR-8/SVneo细胞侵袭和迁移能力显著增加。结论DINO下调MMP2表达,抑制胎盘滋养层细胞的侵袭与迁移。

DNA损伤诱导的长链非编码RNA-UCA1促进HeLa细胞增殖

尿路上皮癌抗原1(UCA1)是一种长链非编码RNA,在多种肿瘤内高表达.然而,其在宫颈癌细胞和组织中的表达报告颇不一致,且功能尚未确定.本文探索UCA1在宫颈癌He La细胞中的生物学功能.实时定量PCR(qRT-PCR)结果显示,UCA1、p21和p53 mRNA在阿霉素(doxorubicin,DOX)或γ射线照射的He La细胞中表达上调;相反,敲减p53表达则可抑制DOX诱导的UCA1上调.表明DNA损伤诱导的UCA1可能与p53有关.转染结合CCK8检测He La细胞增殖活力结果显示,与对照比较,过表达UCA1促进He La细胞增殖,干扰UCA1表达则减缓细胞增殖.此外,流式细胞术结果显示,过表达UCA1导致阿霉素诱导的凋亡率下降;siRNA抑制UCA1表达后引起细胞G2/M期比例上升,S期下降,且阿霉素诱导的细胞凋亡率上升.上述结果说明,DNA损伤诱导的UCA1可促进He La细胞增殖,减少细胞凋亡.然而,是否DNA损伤诱导的UCA1上调依赖p53尚需进一步实验证明.

长链非编码RNA-PVT1在顺铂诱导DNA损伤修复中的作用机制

目的研究长链非编码RNA-PVT1对顺铂诱导DNA损伤修复的影响及其作用机制。方法建立顺铂诱导非小细胞肺癌细胞株A549细胞DNA损伤模型,用荧光定量PCR(qRT-PCR)检测PVT1表达。通过siPVT1沉默A549细胞中PVT1表达,用qRT-PCR和Western blot检测核苷酸切除修复(NER)相关基因表达。用RNA免疫共沉淀(RIP)检测PVT1与ERCC1相互作用。结果顺铂处理A549细胞明显下调PVT1表达。沉默PVT1后A549细胞中γH2AX表达显著增高,而NER途径中关键基因如ERCC1、DDB2表达明显降低。RIP实验表明PVT1可与ERCC1蛋白直接相互作用。结论 PVT1可能通过调节NER途径促进顺铂诱导DNA损伤修复。

下调DNA损伤激活的长链非编码RNA抗心房颤动大鼠心肌纤维化的机制研究

目的:探究下调DNA损伤激活的长链非编码RNA(lncRNA NORAD)抗心房颤动(房颤)大鼠心肌纤维化作用及可能的作用机制。方法:SD大鼠随机分为对照组、房颤组、重组腺相关病毒血清型9阴性对照(rAAV9-NC)组、重组腺相关病毒血清型9载体含用于沉默lncRNA NORAD的小干扰RNA(rAAV9-siNORAD)组、p38丝裂原激活的蛋白激酶(p38MAPK)抑制剂SB203580组、rAAV9-siNORAD+SB203580组,每组8只。建立各组模型大鼠并进行对应干预措施,实验结束后对大鼠进行心电图测试,记录房颤的发生率和持续时间;并检测血清肌酸激酶同工酶(CK-MB)、心肌肌钙蛋白I(cTnI)和炎性因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)水平;Masson染色检测心房组织纤维化,计算心房胶原容积分数(CVF);实时荧光定量PCR检测心房组织lncRNA NORAD、Ⅰ型胶原(COL1-A1)和Ⅲ型胶原(COL3-A1)的mRNA表达情况;Western blot检测心房组织丝裂原活化蛋白激酶激酶6(MKK6)、p38MAPK和核因子κB p65(NF-κB p65)及其磷酸化蛋白的表达情况。结果:与对照组相比,房颤组大鼠可观察到P波消失,出现大小不等、不规则的f波,心房组织有明显的纤维化改变,CVF、血清c TnI、CK-MB、TNF-α、IL-6水平、心房组织COL1-A1和COL3-A1的mRNA水平以及lncRNA NORAD表达水平、MKK6蛋白水平、磷酸化p38 MAPK与p38 MAPK的比值和磷酸化NF-κB p65与NF-κB p65比值升高,差异具有统计学意义(P均<0.05);与房颤组相比,rAAV9-siNORAD组和SB203580组大鼠房颤的发生率降低,持续时间缩短(P<0.05),CVF,血清cTnI、CK-MB、TNF-α、IL-6水平,心房组织COL1-A1和COL3-A1的mRNA水平以及lncRNA NORAD表达水平、MKK6蛋白水平、磷酸化p38 MAPK与p38 MAPK的比值及磷酸化NF-κB p65与NF-κB p65的比值降低,差异均具有统计学意义(P均<0.05);分别与单用SB203580和r AAV9-siNORAD相比,两者联合应用后p38 MAPK/NF-κB p65信号通路的激活被进一步抑制,心肌纤维化程度进一步降低。结论:下调lncRNA NORAD可能通过抑制p38 MAPK/NF-κB p65信号通路激活对房颤大鼠发挥抗心肌纤维化作用。

参与DNA损伤应答的长链非编码RNA

长链非编码RNA (long noncoding RNA, lncRNA)曾被看成是转录"噪声",事实上它在多种生命过程中发挥重要作用,其中就包括DNA损伤应答(DNA damage response, DDR)。DDR是细胞维持基因组稳定性的基石,它的缺陷会导致包括癌症在内的多种疾病的发生与发展。近年有关lncRNA在DDR中作用的研究发现,lncRNA不仅参与DDR,而且在DDR多个环节中发挥重要作用。DNA损伤发生后,细胞内许多lncRNA的转录发生显著变化,其中一些lncRNA的转录变化就是DDR调控的结果,如lincRNA-p21等。现有研究显示,这些由DNA损伤胁迫引起转录变化的lncRNA,可以通过调控DDR功能因子转录、参与DDR信号传导和直接参与DNA损伤修复这3种方式参与DDR,另有一些可受激转录的lncRNA则参与维护染色体整倍性和完整的基因组稳定机制,如NORAD和TERRA。

长链非编码RNA LINP1抑制DNA损伤促进非小细胞肺癌电离辐射抗性

目的探索长链非编码RNA LINP1对电离辐射下非小细胞肺癌DNA损伤效应的影响,为非小细胞肺癌的肿瘤治疗提供相关的新思路。方法使用siRNA在非小细胞肺癌细胞系H1299细胞中敲减LINP1,8.0 Gy电离辐射照射后,采用CCK-8增殖实验和克隆形成实验检测肺癌细胞的增殖和克隆形成能力;照射后4 h采用彗星电泳和Western blot检测H1299细胞中DNA损伤效应。结果电离辐射照射后,H1299细胞中LINP1明显上调(P<0.001)。与对照相比,8.0 Gy电离辐射照射后其增殖和克隆形成能力显著下降(P<0.001),DNA损伤明显增加(P<0.001)。沉默LINP1后,在电离辐射条件下,敲减组与对照相比增殖能力、克隆形成能力明显下降(P<0.01),DNA损伤明显增加(P<0.001)。结论LINP1可抑制电离辐射下非小细胞肺癌细胞增殖能力的下降和DNA损伤效应从而增强电离辐射抗性。

肿瘤精准治疗新策略——靶向调控DNA损伤修复功能的长链非编码RNA

在过去的10年中,随着高通量测序技术的快速发展,在肿瘤中数以万计的长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)转录子被转录组测序发现。然而,绝大多数lncRNA的全长序列和作用机制尚不清楚,明确这些lncRNA的功能是一项极具挑战性的工作。DNA损伤修复(DNA damage repair,DDR)在肿瘤耐药中的机制,以及利用DDR功能异常的“协同致死”治疗策略已成为目前的研究热点。近年的研究发现,lncRNA通过参与肿瘤相关信号通路的调控而影响肿瘤的发生发展、放化疗和靶向治疗效果。其中,DDR修复机制会直接影响放化疗效果。已有少数研究发现,lncRNA直接或间接参与DDR功能的调控,如何针对lncRNA异常表达导致肿瘤细胞DDR功能缺失发展新的治疗策略,将是极具应用前景的研究方向。

长链非编码RNA NORAD在肺癌中的表达及其对肺癌细胞增殖能力的影响

目的研究长链非编码RNA DNA损伤诱导的非编码RNA(NORAD)在肺癌中的表达及其对肺癌细胞增殖的影响。方法RNA-seq分析肺癌组织中LncRNA及miRNA的表达改变,根据表达量确定候选LncRNA;q RT-PCR检测分析肺癌组织及肺癌细胞中候选NORAD的表达;免疫荧光检测分析肺癌组织中细胞增殖核抗原Ki-67的表达;通过线性回归分析肺癌组织中NORAD与Ki-67的表达相关性。生物在线软件联合miRNA测序结果,并通过荧光素酶检测分析NORAD与miR-26b-5p、miR-654-5p结合情况。将A549细胞分成空白对照组(Control)、si-NORAD组、miR-26b-5p mimics、miR-654-5p mimics、si-NORAD与miR-26b-5p mimics联合组、si-NORAD与miR-654-5p mimics联合组,利用EdU检测细胞增殖能力、Annexin V-FITC/PI双染检测细胞凋亡、蛋白印迹(Western blot)检测细胞凋亡相关蛋白(Bad、Bcl-2、Cleaved Caspase-3)的表达。结果NORAD在肺癌组织及肺癌细胞中的表达均显著升高(均P<0.01),其表达量与Ki-67的表达呈正相关(r=0.646,P<0.01)。miR-26b-5p、miR-654-5p在肺癌组织及细胞中的表达均显著降低(均P<0.01),生物在线软件及荧光素酶检测验证,NORAD与miR-26b-5p、miR-654-5p存在结合位点;在肺癌组织中,miR-26b-5p(r=-0.403,P=0.000)、miR-654-5p(r=-0.423,P=0.000)的表达与Ki-67的表达均呈负相关;miR-26b-5p(r=-0.435,P<0.05)与miR-654-5p(r=-0.395,P<0.05)的表达与NORAD表达均呈负相关。与Control组比较,si-NORAD可显著抑制A549细胞的增殖(P<0.01)、促进其凋亡(P<0.01),Bad及Cleaved caspase-3的表达均显著升高(均P<0.01),Bcl-2的表达显著降低(P<0.05);与si-NORAD组比较,si-NORAD与miR-26b-5p mimics联合组、si-NORAD与miR-654-5p mimics联合组可进一步抑制细胞增殖(P<0.01),促进细胞凋亡(P<0.01)。结论肺癌中NORAD的表达显著上调,可能通过抑制mi R-26b-5p、mi R-654-5p的表达而促进肺癌细胞增殖,NORAD可能作为肺癌的诊断标志物。

长链非编码RNA HIF1α-AS1在血管内皮细胞缺氧损伤中的作用研究

目的检测长链非编码RNA缺氧诱导因子-1alpha-反义链1(lncRNA HIF-1α-AS1)在缺糖缺氧血管内皮细胞中的表达及对细胞缺氧应激损伤的影响。方法原代培养人脐静脉血管内皮细胞并建立缺糖缺氧模型,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)方法从95种长链非编码RNA中筛选出缺糖缺氧后表达差异显著的基因lncRNA HIF-1α-AS1。用流式细胞仪、TUNEL/Hochest检测细胞凋亡情况。siRNA干扰lncRNA HIF1α-AS1表达后,通过乳酸脱氢酶漏出率、Western blot检测超氧化物歧化酶1(SOD1)表达等方法评估细胞损伤情况。结果血管内皮细胞建立缺糖缺氧模型后,lncRNA HIF-1α-AS1含量显著上升1.98倍(P<0.05)。对lncRNA HIF-1α-AS1进行干扰后,3个干扰组细胞乳酸脱氢酶(LDH)漏出率与模型组相比显著下降,siRNA1组为20.84%±2.64%(P<0.05),siRNA2组为19.82%±1.61%(P<0.01),siRNA3组为17.01%±0.24%(P<0.01)。siRNA2和siRNA3的SOD1基因mRNA水平显著上调(P<0.01);2组SOD1蛋白表达量也明显上升,siRNA2(P<0.05),siRNA3(P<0.01),细胞损伤减轻。结论干扰lncRNA HIF-1α-AS1的表达能够减轻血管内皮细胞缺糖缺氧后的损伤,提高细胞的抗缺氧能力,这可能与SOD1表达量升高、乳酸脱氢酶漏出减少有关。

长链非编码RNA PANDAR促进结直肠癌转移的作用和机制研究

背景与目的:越来越多的研究表明,长链非编码RNA(long non-coding RNA,lnc RNA)在肿瘤发生、发展过程中有重要作用。Lnc RNA CDKN1A反义链启动子DNA损伤激动RNA(promoter of CDKN1A antisense DNA damage activated RNA,PANDAR)与多种肿瘤的进展及预后相关,在结直肠癌转移中的作用尚未得到证实。该研究旨在探索lnc RNA PANDAR在结直肠癌中的功能,并对其作用机制进行初步探索。方法:采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)检测lnc RNA PANDAR在结直肠癌细胞及组织中的表达,并分析其表达水平与结直肠癌临床病理特征的关系。构建lnc RNA PANDAR沉默(HCT116-sh PANDAR)和高表达(DLD1-PANDAR)及其对照(HCT116-sh NC、DLD1-vector)稳定转染细胞系。通过Transwell和Matrigel实验检测lnc RNA PANDAR对细胞迁移和侵袭能力的影响。采用RTFQ-PCR检测lnc RNA PANDAR表达改变后介导细胞上皮-间质转化能力的主要调控基因表达情况,并对目的基因在介导lnc RNA PANDAR调控结直肠癌细胞转移中的作用进行验证。结果:Lnc RNA PANDAR在结直肠癌细胞中的表达明显高于结直肠正常上皮细胞;Lnc RNA PANDAR在结直肠癌组织中的表达明显高于癌旁组织[(171.52±97.80)%vs(100.00±63.18)%,P<0.05],且其表达水平与结直肠癌的TNM分期、淋巴结转移和远处转移相关(P<0.05)。在Transwell及Matrigel实验中,lnc RNA PANDAR沉默能够明显减弱结直肠癌细胞的迁移[100.00%vs(42.08±4.77)%,P<0.05]和侵袭[100.00%vs(39.14±3.81)%,P<0.05]能力,lnc RNA PANDAR高表达能够明显促进结直肠癌细胞的迁移[100.00%vs(194.12±9.33)%,P<0.05]和侵袭[100.00%vs(204.08±12.27)%,P<0.05]能力。采用RTFQ-PCR检测lnc RNA PANDAR表达改变后介导结直肠癌细胞上皮-间质转化的基因表达情况发现,锌指E-盒结合同源异形盒(zinc-finger E-box binding homeobox 1,ZEB1)表达与lnc RNA PANDAR表达呈显著正相关;在lnc RNA PANDAR高表达的细胞中干扰ZEB1表达能够明显逆转lnc RNA PANDAR高表达引起的细胞迁移和侵袭能力的增强。结论:Lnc RNA PANDAR能够通过调控ZEB1表达进而促进结直肠癌转移,lnc RNA PANDAR可能成为结直肠癌新的诊断指标及治疗靶点。

长链非编码RNA在卵巢癌化疗耐药过程中的调控作用

卵巢癌是女性生殖系统三大恶性肿瘤之一,也是导致女性妇科恶性肿瘤相关死亡的主要原因之一。虽然包括手术和化疗在内的治疗方案取得一定疗效,但卵巢癌患者5年总体生存率仍不令人满意。一是由于多数卵巢癌早期无明显症状,诊断时已是晚期;二是归因于卵巢癌复发率及化疗耐药性的提升。降低卵巢癌患者死亡率的关键是早期诊断和治疗以及对化疗耐药的有效预测。研究与卵巢癌相关的基因和蛋白的表达模式对促进诊断相关生物标志物的产生至关重要,并为药物设计、治疗和耐药性提供新的研究靶点。近年来,长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)的作用日益凸显。已在包括癌症在内的许多疾病中发现lncRNA的异常表达,但其在疾病病因学和生物学的确切作用尚不清楚。随着对卵巢癌发病机制的深入研究,已有报道lncRNA的异常表达与铂类/紫杉醇耐药有关。综述近年来lncRNA在卵巢癌化疗耐药方面的研究进展。

lncRNA NEAT1通过抑制DNA损伤促进肺腺癌PC-9细胞的增殖

目的:研究长链非编码RNA核富集转录体1(lncRNA NEAT1)对肺腺癌PC-9细胞增殖能力的影响,并初步探讨其作用机制。方法:qPCR检测人肺腺癌PC-9细胞与人胚肺二倍体2BS细胞中lncRNA NEAT1的表达水平;设计并合成lncRNA NEAT1的小干扰RNA(siRNA)序列,采用脂质体法转染PC-9细胞,通过qPCR检测转染前后PC-9细胞NEAT1的表达水平。MTT法、流式细胞术分别检测lncRNA NEAT1敲低对PC-9细胞增殖及细胞周期的影响;WB检测转染前后DNA损伤相关蛋白,即共济失调毛细血管扩张突变蛋白(ATM)和双链DNA损伤标志物γ-H2AX的表达水平。结果:与2BS细胞相比,PC-9细胞中lncRNA NEAT1呈高表达(P<0.05)。成功建立NEAT1敲低的PC-9细胞,转染siRNA 12 h后siNEAT1-1及siNEAT1-2干扰组细胞增殖能力较空白对照组及空转染组明显下降(P<0.05);干扰组细胞周期被阻滞在G1期[(88.97±2.64)%(,88.15±1.48)%vs(84.5±1.72)%,P<0.05]和G2/M期[(8.35±2.02)%,(8.11±1.36)%vs(4.28±1.28)%,P<0.05];干扰组细胞中DNA损伤相关蛋白ATM和γ-H2AX表达水平显著升高(均P<0.05)。结论:lncRNA NETA1在肺腺癌PC-9细胞呈高表达,其可通过抑制DNA损伤导致细胞周期G1/M期转变促进肺腺癌细胞PC-9的增殖能力。

LncRNA NORAD通过miR-513b-5p/GREM1轴调节颅内动脉瘤血管平滑肌细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的作用机制

目的:探讨长链非编码RNA DNA损伤诱导的非编码RNA(LncRNA NORAD)通过miR-513b-5p/GREM1轴调节颅内动脉瘤血管平滑肌细胞(VSMC)增殖、迁移、侵袭和凋亡的机制。方法:采用实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)法检测人颅内动脉瘤组织和正常组织中LncRNA NORAD、miR-513b-5p及GREM1表达。体外分离培养人VSMC,随机分为对照组、LncRNA NORAD siRNA组、miR-513b-5p mimics组、共转染(LncRNA NORAD siRNA+miR-513b-5p inhibitor)组、共转染阴性对照(LncRNA NORAD siRNA阴性对照+miR-513b-5p inhibitor阴性对照)组,分组转染后,采用实时荧光定量PCR法检测各组细胞LncRNA NORAD、miR-513b-5p及GREM1 mRNA表达;采用细胞计数试剂盒(CCK-8)和免疫荧光染色检测各组细胞增殖情况;采用Hoechst 33342染色和免疫荧光染色检测各组细胞凋亡情况;采用细胞划痕实验和Transwell实验检测各组细胞迁移、侵袭情况;采用免疫印记实验检测各组细胞上皮间充质转化(EMT)标志蛋白神经钙黏素(N-cadherin)、E-钙黏素(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)表达;采用双荧光素酶报告实验分析VSMC中LncRNA NORAD对miR-513b-5p、miR-513b-5p对GREM1的靶向调控。结果:与正常组织比较,颅内动脉瘤组织LncRNA NORAD、GREM1 mRNA表达明显升高(P<0.05),miR-513b-5p表达明显降低(P<0.05)。与对照组比较,LncRNA NORAD siRNA组、miR-513b-5p mimics组细胞GREM1 mRNA表达、增殖率、Ki67阳性率、迁移率、侵袭数及N-cadherin、Vimentin蛋白表达降低(P<0.05),miR-513b-5p表达、凋亡率及Bax/Bcl-2、E-cadherin蛋白表达升高(P<0.05);共转染阴性对照组各指标差异无统计学意义(P>0.05)。与LncRNA NORAD siRNA组比较,共转染组细胞GREM1 mRNA表达、增殖率、Ki67阳性率、迁移率、侵袭数及N-cadherin、Vimentin蛋白表达升高(P<0.05),miR-513b-5p表达、凋亡率及Bax/Bcl-2、E-cadherin蛋白表达降低(P<0.05)。结论:敲低LncRNA NORAD可通过上调miR-513b-5p表达而降低GREM1表达,从而抑制VSMC增殖与侵袭迁移,并促使其凋亡。

lncRNA在喉鳞状细胞癌发生、发展中的作用

喉鳞状细胞癌是最常见的喉癌,目前手术结合放射化学治疗(简称放化疗)LSCC取得了不错的效果,但是晚期生存率仍较低,且发病机制不明确。近年来更多的研究致力于探索新的生物标志物用于预测和治疗LSCC。已经证实长链非编码RNA(lncRNA)是LSCC发生、发展中重要的调节因子。本文旨在讨论lncRNA在LSCC发生、发展中的调控作用及发生机制,为LSCC的分子生物学治疗提供参考依据。

DNA损伤环境下的裂殖酵母lncRNA表达谱分析

LncRNA在真核生物中广泛转录,且响应于细胞外环境的变化.相比于mRNA,人们对lncRNA在DNA损伤应答中的作用了解甚少.基于高通量测序,本文系统地分析了裂殖酵母在4种DNA损伤药物(喜树碱、羟基脲、甲基磺酸甲酯和腐草霉素)处理下的lncRNA表达谱.与mRNA相似,在DNA损伤环境下,lncRNA的表达谱也发生了剧烈变化.161个受到4种药物共同诱导的lncRNA及194个受到共同抑制的lncRNA被定义为核心DNA损伤应答lncRNA.LncRNA表达谱和mRNA表达谱之间的差异表明,lncRNA在DNA损伤应答中起着重要功能,且这些功能可能并不依赖于调控邻近的mRNA.这项研究为进一步研究裂殖酵母中的lncRNA在DNA损伤应答中的功能提供了基础和参考.

长链非编码RNA在药物性肝损伤大鼠肝脏中表达谱的变化

本试验研究了长链非编码RNA(lncRNA)在药物性肝损伤SD大鼠肝脏中表达谱的变化,采用lncRNA芯片对肝脏lncRNA表达谱进行分析,对原始数据进行归一化处理后,筛选出差异表达的lncRNA并通过基因功能GO富集、KEGG信号通路等生物信息学间接分析主要差异lncRNA的潜在功能。结果表明,与正常SD大鼠肝脏相比,lncRNA表达谱发生了显著变化,2倍以上变化的lncRNAs共有902条(P<0.05),其中上调的有566条,下调的lncRNA有336条,这说明差异性lncRNA可能参与了药物性肝损伤发生及发展过程。

lncRNA DINO在同型半胱氨酸致内皮细胞凋亡中的作用

目的探讨DNA损伤诱导的长链非编码RNA(long noncoding RNA,lncRNA)DINO在同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)致内皮细胞凋亡中的作用。方法以人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)为研究对象,MTT法检测不同浓度的Hcy对内皮细胞增殖的影响,筛选合适浓度;最适浓度Hcy干预细胞后分为对照组(0μmol·L^(-1) Hcy)和实验组(100μmol·L^(-1) Hcy),用细胞活力染色及流式细胞术检测细胞凋亡情况,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测lncRNA DINO的表达;细胞活力染色、流式细胞术、蛋白免疫印迹(Western blot)分别检测Hcy作用于转染lncRNA DINO干扰片段的HUVECs细胞的凋亡情况及凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2的表达。结果100μmol·L^(-1) Hcy对内皮细胞的增殖有抑制作用(P<0.001);与对照组相比,实验组细胞凋亡数增加,且lncRNA DINO表达增加(P均<0.01);转染干扰片段si-DINO、lncRNA DINO表达下降(P<0.01);Hcy作用于转染lncRNA DINO干扰片段的HUVECs细胞的凋亡数下降,Bax/Bcl-2比值下降(P均<0.01)。结论lncRNA DINO能够促进Hcy诱导的内皮细胞凋亡。

抑制长链非编码RNA-BG对人正常肺上皮细胞系Beas-2B放射敏感性的影响

目的 探讨长链非编码RNA-BG对人正常肺上皮细胞Beas-2B放射敏感性的影响.方法 设计合成长链非编码RNA-BG的siRNA,通过脂质体介导的转染法转入Beas-2B细胞;采用实时定量PCR法检测干扰后Beas-2B细胞内BG的转录水平.实验分母细胞对照组、对照siRNA转染组和BG-siRNA转染组.采用克隆形成实验检测长链非编码RNA-BG对Beas-2B细胞受照射后增殖活性的影响;流式细胞术检测受照射后细胞周期的改变;通过免疫荧光染色检测电离辐射损伤后细胞内γ-H2AX焦点形成情况.采用Western blot法对DNA损伤相关蛋白（RAD50、磷酸化P53、KU70、KU80、MDM2、CDK2和RB蛋白）进行检测.结果 与对照siRNA转染组细胞相比,分别转染3组BG-siRNA 24 h后,Beas-2B细胞内长链非编码RNA-BG的转录丰度均显著下降（t=8.32～15.29,P＜0.05）,后续实验采用干扰效率最高的2号siRNA进行.采用siRNA干扰长链非编码RNA-BG,经0、0.5、1、2、4和6 GyX射线照射后2周,采用多靶单击模型拟合曲线发现,与Beas-2B母细胞对照组和对照siRNA转染组细胞相比,放射增敏比（SER）为0.80和0.82.转染BG-siRNA的Beas-2B细胞经4 Gy X射线照射24 h后,细胞周期G2期比例由对照siRNA转染组的（37.37±0.63）％增至（64.19±1.01）％（t=30.65,P＜0.05）;Beas-2B细胞内γ-H2AX焦点数目（59±3.49）/100个细胞较对照siRNA转染组（76±1.78）/100个细胞显著降低（t=13.72,P＜0.05）;RAD50蛋白和磷酸化P53蛋白表达较对照siRNA转染组下降;KU70、KU80、MDM2、CDK2和RB蛋白较对照组表达增高.结论 靶向抑制长链非编码RNA-BG可能通过诱导细胞周期阻滞、促进DNA损伤修复,进而调控人正常支气管上皮细胞Beas-2B的放射敏感性.