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Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗Vero细胞DNA残留定量PCR检测法的验证 被引量:1
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作者 黄祎 李拓 +5 位作者 陈若兰 管茜茜 阮玉 朱秀娟 丁玲 马萌 《国际生物制品学杂志》 CAS 2023年第1期40-44,共5页
目的验证Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗中Vero细胞DNA残留定量PCR(quantitative PCR,qPCR)检测法。方法用试剂盒提取Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗原液的DNA,采用qPCR检测Vero细胞DNA,并验证方法的线性、专属性、准确性、精密度、耐用性及定量... 目的验证Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗中Vero细胞DNA残留定量PCR(quantitative PCR,qPCR)检测法。方法用试剂盒提取Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗原液的DNA,采用qPCR检测Vero细胞DNA,并验证方法的线性、专属性、准确性、精密度、耐用性及定量限;同时采用DNA探针杂交法检测样品。结果qPCR检测Vero细胞DNA标准曲线在0.0030~300.0000pg/μl之间线性良好;对Hep-2细胞、大肠埃希菌、酵母细胞DNA均无扩增反应;高、中、低浓度样品加标回收率在50%~150%,准确性良好;定量检出限为0.0030pg/μl;精密度良好(相对标准偏差<15%);反应体系配制好后置于2~8℃30min后进行检测,相对标准偏差<15%,耐用性良好。DNA探针杂交法与qPCR结果均小于0.1pg/μl。结论qPCR检测Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗中Vero细胞DNA残留具有良好的线性、专属性、准确性、精密度和耐用性,可适用于该项检测。 展开更多
关键词 Vero细胞dna残留 定量聚合酶链反应 dna探针杂交法
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特立帕肽宿主DNA残留量检测方法研究
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作者 吕萍 辛中帅 梁成罡 《药物分析杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期668-671,共4页
目的:对特立帕肽宿主DNA残留量进行了方法学研究,为该品种的质控标准提供依据。方法:根据中国药典2010年版三部的方法,分别对10 dose.mL-1和1 dose.mL-1 2个样品浓度的宿主DNA残留量检测进行了方法学研究。结果:研究表明特立帕肽原液2... 目的:对特立帕肽宿主DNA残留量进行了方法学研究,为该品种的质控标准提供依据。方法:根据中国药典2010年版三部的方法,分别对10 dose.mL-1和1 dose.mL-1 2个样品浓度的宿主DNA残留量检测进行了方法学研究。结果:研究表明特立帕肽原液2个浓度的宿主DNA残留检测均符合系统适用性要求。特立帕肽注射液的10 dose.mL-1浓度对加样回收有一定干扰,不能保证加样回收测定均符合规定,而1 dose.mL-1浓度的注射液在10 ng和1 ng的加样回收均没有干扰,因此将1 dose.mL-1样品浓度作为宿主DNA残留量检测浓度。对1 dose.mL-1样品浓度分别进行了1 ng、0.1 ng的加样回收测定,结果均符合要求。对3批特立帕肽原液和注射液检测结果表明每1剂量的宿主DNA残留量均小于10 ng。结论:该方法检测灵敏度较高,特异性较强,操作较安全简便,可用于特立帕肽的质量评价及进口检定。 展开更多
关键词 重组人甲状旁腺激素 特立帕肽 原液 注射液 宿主dna残留量 dna探针杂交法 学研究
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阈值法检测人用狂犬病疫苗宿主细胞DNA残留量 被引量:1
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作者 杨萍 孙博 +5 位作者 刘大维 隋娜 闫慧 张喜珍 谷铁军 张艳 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2019年第7期806-809,共4页
目的建立人用狂犬病疫苗宿主细胞DNA残留量的阈值检测法,并进行验证。方法验证阈值法的线性范围、准确性及精密度。采用阈值法和DNA探针杂交法分别对3批狂犬病疫苗原液样品宿主细胞DNA残留量进行测定,并进行比较。结果DNA标准品浓度为3~... 目的建立人用狂犬病疫苗宿主细胞DNA残留量的阈值检测法,并进行验证。方法验证阈值法的线性范围、准确性及精密度。采用阈值法和DNA探针杂交法分别对3批狂犬病疫苗原液样品宿主细胞DNA残留量进行测定,并进行比较。结果DNA标准品浓度为3~200pg时,与检测信号(μV/s)呈良好的线性关系,直线回归方程为y=10.812x-36.761,R^2=0.9945;加入100和25pgDNA标准品的样品回收率为88%~110%,CV分别为7.7%和7.4%;精密度各次检测CV均<10%。阈值法检测3批狂犬病疫苗原液样品宿主细胞DNA残留量分别为181.9、104.2和64.6pg/mL,DNA探针杂交法检测结果分别为约250、约100和<100pg/mL,二者检测结果相符。结论阈值法有望应用于生物制品宿主细胞残留DNA含量的常规检测,且具有良好的准确性及精密度。 展开更多
关键词 阈值 人用狂犬病疫苗 宿主细胞残留dna dna探针杂交法
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Effects of hepatitis B virus infection on human sperm chromosomes 被引量:52
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作者 Jian-MinHuang Tian-HuaHuang +6 位作者 Huan-YingQiu Xiao-WuFang Tian-GangZhuang Hong-XiLiu Yong-HuaWang, Li-ZhiDeng Jie-WenQiu 《World Journal of Gastroenterology》 SCIE CAS CSCD 2003年第4期736-740,共5页
AIM: To evaluate the level of sperm chromosome aberrations in male patients with hepatitis B, and to directly detect whether there are HBV DNA integrations in sperm chromosomes of hepatitis B patients.METHODS: Sperm c... AIM: To evaluate the level of sperm chromosome aberrations in male patients with hepatitis B, and to directly detect whether there are HBV DNA integrations in sperm chromosomes of hepatitis B patients.METHODS: Sperm chromosomes of 14 tested subjects (5healthy controls, 9 patients with HBV infection, including 1with acute hepatitis B, 2 with chronic active hepatitis B, 4with chronic persistent hepatitis B, 2 chronic HBsAg carriers with no clinical symptoms) were prepared using interspecific in vitro fertilization between zona-free golden hamster ova and human spermatozoa, and the frequencies of aberration spermatozoa were compared between subjects of HBV infection and controls. Fluorescence in situ hybridization (FISH) to sperm chromosome spreads was carried out with biotin-labeled full length HBV DNA probe to detect the specific HBV DNA sequences in the sperm chromosomes.RESULTS: The total frequency of sperm chromosome aberrations in HBV infection group (14.8%, 33/223) was significantly higher than that in the control group (4.3%,5/116). Moreover, the sperm chromosomes in HBV infection patients commonly presented stickiness, clumping, failure to staining, etc, which would affect the analysis of sperm chromosomes. Specific fluorescent signal spots for HBV DNA were seen in sperm chromosomes of one patient with chronic persistent hepatitis. In 9 (9/42) sperm chromosome complements containing fluorescent signal spots, one presented 5 obvious FISH spots, others presented 2 to 4signals. There was significant difference of fluorescence intensity among the signal spots. The distribution of signal sites among chromosomes was random.CONCLUSION: HBV infection can bring about mutagenic effects on sperm chromosomes. Integrations of viral DNA into sperm chromosomes which are multisites and nonspecific, can further increase the instability of sperm chromosomes. This study suggested that HBV infection can create extensively hereditary effects by alteration genetic constituent and/or induction chromosome aberrations, as well as the possibility of vertical transmission of HBV via the germ line to the next generation. 展开更多
关键词 ADULT Chromosomes Human dna Viral Hepatitis B Antigens Hepatitis B Surface Antigens Hepatitis B Chronic Humans In Situ Hybridization Fluorescence KARYOTYPING Male Reference Values Research Support Non-U.S. Gov't SEMEN SPERMATOZOA
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