目的:探讨DNA提取方法优化后对转基因小鼠基因分型结果的影响,并比较分析与业内常用试剂盒基因型鉴定结果的差异。方法:在团队前期专利基础上,改进了DNA裂解液的配方和实验流程,并以新型转录因子Musculin和增强型绿色荧光蛋白(enhanced ...目的:探讨DNA提取方法优化后对转基因小鼠基因分型结果的影响,并比较分析与业内常用试剂盒基因型鉴定结果的差异。方法:在团队前期专利基础上,改进了DNA裂解液的配方和实验流程,并以新型转录因子Musculin和增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)转基因小鼠为例,对基因分型结果进行了比较研究和验证。结果:DNA提取时现配裂解液配方为100μL 0.025 N NaOH工作液、160μL 0.5 M EDTA工作液和40 mL超纯水;每个样本加入180μL裂解液,100℃30 min。与相关领域常用的基因分型试剂盒相比,该DNA提取优化方案能够在确保鉴定准确的前提下有效缩短基因分型时间,而且裂解液配置方法简单,反应次数多,步骤更简便,可大幅降低试剂成本和工作量。结论:本研究提供1种适用于转基因小鼠基因分型的经济、简单、可靠的DNA提取技术,具有较好的应用和推广价值。展开更多
探究了不同DNA提取方法对人体肠道微生物菌群研究的影响,为今后研究人体肠道微生物时选择提取方法提供参考依据。选择市面上3种商业化肠道微生物DNA提取试剂盒和1种实验室改良方法对20份人类粪便样本中微生物DNA进行提取,根据DNA浓度、...探究了不同DNA提取方法对人体肠道微生物菌群研究的影响,为今后研究人体肠道微生物时选择提取方法提供参考依据。选择市面上3种商业化肠道微生物DNA提取试剂盒和1种实验室改良方法对20份人类粪便样本中微生物DNA进行提取,根据DNA浓度、纯度和微生物多样性比较4种DNA提取方法差异。结果表明:Q-试剂盒法(QIAamp PowerFecal Pro DNA Kit,Qiagen)、ET-试剂盒法(ET粪便DNA快速提取试剂盒,IDMBIO)、P-实验室改良法3种方法提取的DNA得率较高;方法 P获得的OTU数量最多;α多样性分析结果显示4种提取方法差异不显著;方法 P、方法 Q得到肠道微生物组成结构相似度较高,方法 ET、方法 Y(MolPure Stool DNA Kit,Yeasen)得到肠道微生物组成相似度较高;4种DNA提取方法所得微生物群落构成在门水平和属水平差异明显。每种DNA提取方法都有各自提取偏好性菌属,经过综合比较,方法 Q和方法 ET提取DNA的得率更高、速度更快。展开更多
文摘目的:探讨DNA提取方法优化后对转基因小鼠基因分型结果的影响,并比较分析与业内常用试剂盒基因型鉴定结果的差异。方法:在团队前期专利基础上,改进了DNA裂解液的配方和实验流程,并以新型转录因子Musculin和增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)转基因小鼠为例,对基因分型结果进行了比较研究和验证。结果:DNA提取时现配裂解液配方为100μL 0.025 N NaOH工作液、160μL 0.5 M EDTA工作液和40 mL超纯水;每个样本加入180μL裂解液,100℃30 min。与相关领域常用的基因分型试剂盒相比,该DNA提取优化方案能够在确保鉴定准确的前提下有效缩短基因分型时间,而且裂解液配置方法简单,反应次数多,步骤更简便,可大幅降低试剂成本和工作量。结论:本研究提供1种适用于转基因小鼠基因分型的经济、简单、可靠的DNA提取技术,具有较好的应用和推广价值。
文摘探究了不同DNA提取方法对人体肠道微生物菌群研究的影响,为今后研究人体肠道微生物时选择提取方法提供参考依据。选择市面上3种商业化肠道微生物DNA提取试剂盒和1种实验室改良方法对20份人类粪便样本中微生物DNA进行提取,根据DNA浓度、纯度和微生物多样性比较4种DNA提取方法差异。结果表明:Q-试剂盒法(QIAamp PowerFecal Pro DNA Kit,Qiagen)、ET-试剂盒法(ET粪便DNA快速提取试剂盒,IDMBIO)、P-实验室改良法3种方法提取的DNA得率较高;方法 P获得的OTU数量最多;α多样性分析结果显示4种提取方法差异不显著;方法 P、方法 Q得到肠道微生物组成结构相似度较高,方法 ET、方法 Y(MolPure Stool DNA Kit,Yeasen)得到肠道微生物组成相似度较高;4种DNA提取方法所得微生物群落构成在门水平和属水平差异明显。每种DNA提取方法都有各自提取偏好性菌属,经过综合比较,方法 Q和方法 ET提取DNA的得率更高、速度更快。
