目的:检测转录因子E2F1与生长阻滞和DNA损伤诱导蛋白45g(GADD45g)基因在急性髓系白血病(AML)患者中表达的相关性,探讨GADD45g是否通过抑制E2F1诱导AML细胞DNA损伤、凋亡、衰老、周期阻滞和提高药物敏感性。方法:选取2013年1月至2016年1...目的:检测转录因子E2F1与生长阻滞和DNA损伤诱导蛋白45g(GADD45g)基因在急性髓系白血病(AML)患者中表达的相关性,探讨GADD45g是否通过抑制E2F1诱导AML细胞DNA损伤、凋亡、衰老、周期阻滞和提高药物敏感性。方法:选取2013年1月至2016年12月中国医学科学院血液病医院初诊为AML患者32例骨髓标本及AML细胞系U937、HL60、THP-1和Molm-13,用q PCR检测组织和细胞中GADD45g和E2F1 m RNA的表达水平,并分析其相关性。构建E2F1过表达载体,并制备重组慢病毒在过表达GADD45g的Molm-13和THP-1细胞中过表达E2F1,通过彗星实验、Annexin V/7AAD流式细胞术、β-半乳糖苷酶染色和PI染色流式细胞术等确定GADD45g是否通过抑制E2F1对AML细胞发挥抑癌作用。结果:AML患者骨髓和细胞系中GADD45g和E2F1 m RNA的表达呈显著负相关(r=–0.663,P<0.01)。GADD45g在AML细胞系中过表达显著抑制了E2F1的表达(均P<0.01)。成功构建同时过表达GADD45g和E2F1的Molm-13和THP-1细胞,与对照组比较,过表达组细胞GADD45g和E2F1蛋白表达水平均显著升高(均P<0.01)。与过表达GADD45g的细胞相比,同时过表达GADD45g和E2F1细胞的凋亡、衰老率和DNA损伤水平均显著降低(均P<0.01);在过表达GADD45g的细胞中过表达E2F1逆转了GADD45g诱导的周期阻滞(均P<0.01),进而降低了过表达GADD45g对化疗药物的敏感性(均P<0.01)。结论:GADD45g通过抑制E2F1在AML中发挥抗肿瘤作用。展开更多
目的研究泡型包虫病患者肝脏组织TGF-β1和Gadd45γ基因的表达及其在肝损伤中的作用,探讨其临床意义。方法采集23例AE患者肝脏手术标本,Trizol法提取RNA,反转录cDNA后采用实时荧光定量PCR检测TGF-β1、Gadd45γ、p53和p21基因的表达。...目的研究泡型包虫病患者肝脏组织TGF-β1和Gadd45γ基因的表达及其在肝损伤中的作用,探讨其临床意义。方法采集23例AE患者肝脏手术标本,Trizol法提取RNA,反转录cDNA后采用实时荧光定量PCR检测TGF-β1、Gadd45γ、p53和p21基因的表达。体外培养肝细胞HL-7702,用重组TGF-β1(1ng/ml)细胞因子或匀浆虫体蛋白(1mg/ml)刺激30min、1h、24h和48h,分别收集细胞,采用实时荧光定量PCR检测TGF-β1、Gadd45γ、p53和p21基因的表达。结果 AE患者病灶旁肝脏组织TGF-β1、p53和p21mRNA的相对表达量分别为1.93±1.34、1.29±0.62和1.50±1.10,与远端肝组织1.00±0.00比较差异有统计学意义(P<0.05);Gadd45γmRNA为1.24±0.96,与远端组织比较差异无统计学意义(P>0.05)。Pearson法分析TGF-β1表达分别与Gadd45γ、p53和p21呈正相关(r值分别为0.5257、0.5287、0.4605,P<0.05)。用重组细胞因子TGF-β1(1ng/ml)或匀浆虫体蛋白(1mg/ml)刺激30min、1h、24h和48h,均能促进肝细胞HL-7702中TGF-β1、Gadd45γ、p53和p21基因的表达上调。结论在肝泡球蚴病晚期,炎症性细胞因子TGF-β1可能通过激活非经典型MAPK(Mitogen Activated Protein Kinase,JNK和p38)信号转导途径和细胞周期关键调控因子(Gadd45γ,p53,p21)调控肝脏细胞的生长抑制或凋亡,造成宿主肝脏的病理性损伤。展开更多
文摘目的:检测转录因子E2F1与生长阻滞和DNA损伤诱导蛋白45g(GADD45g)基因在急性髓系白血病(AML)患者中表达的相关性,探讨GADD45g是否通过抑制E2F1诱导AML细胞DNA损伤、凋亡、衰老、周期阻滞和提高药物敏感性。方法:选取2013年1月至2016年12月中国医学科学院血液病医院初诊为AML患者32例骨髓标本及AML细胞系U937、HL60、THP-1和Molm-13,用q PCR检测组织和细胞中GADD45g和E2F1 m RNA的表达水平,并分析其相关性。构建E2F1过表达载体,并制备重组慢病毒在过表达GADD45g的Molm-13和THP-1细胞中过表达E2F1,通过彗星实验、Annexin V/7AAD流式细胞术、β-半乳糖苷酶染色和PI染色流式细胞术等确定GADD45g是否通过抑制E2F1对AML细胞发挥抑癌作用。结果:AML患者骨髓和细胞系中GADD45g和E2F1 m RNA的表达呈显著负相关(r=–0.663,P<0.01)。GADD45g在AML细胞系中过表达显著抑制了E2F1的表达(均P<0.01)。成功构建同时过表达GADD45g和E2F1的Molm-13和THP-1细胞,与对照组比较,过表达组细胞GADD45g和E2F1蛋白表达水平均显著升高(均P<0.01)。与过表达GADD45g的细胞相比,同时过表达GADD45g和E2F1细胞的凋亡、衰老率和DNA损伤水平均显著降低(均P<0.01);在过表达GADD45g的细胞中过表达E2F1逆转了GADD45g诱导的周期阻滞(均P<0.01),进而降低了过表达GADD45g对化疗药物的敏感性(均P<0.01)。结论:GADD45g通过抑制E2F1在AML中发挥抗肿瘤作用。
文摘目的研究泡型包虫病患者肝脏组织TGF-β1和Gadd45γ基因的表达及其在肝损伤中的作用,探讨其临床意义。方法采集23例AE患者肝脏手术标本,Trizol法提取RNA,反转录cDNA后采用实时荧光定量PCR检测TGF-β1、Gadd45γ、p53和p21基因的表达。体外培养肝细胞HL-7702,用重组TGF-β1(1ng/ml)细胞因子或匀浆虫体蛋白(1mg/ml)刺激30min、1h、24h和48h,分别收集细胞,采用实时荧光定量PCR检测TGF-β1、Gadd45γ、p53和p21基因的表达。结果 AE患者病灶旁肝脏组织TGF-β1、p53和p21mRNA的相对表达量分别为1.93±1.34、1.29±0.62和1.50±1.10,与远端肝组织1.00±0.00比较差异有统计学意义(P<0.05);Gadd45γmRNA为1.24±0.96,与远端组织比较差异无统计学意义(P>0.05)。Pearson法分析TGF-β1表达分别与Gadd45γ、p53和p21呈正相关(r值分别为0.5257、0.5287、0.4605,P<0.05)。用重组细胞因子TGF-β1(1ng/ml)或匀浆虫体蛋白(1mg/ml)刺激30min、1h、24h和48h,均能促进肝细胞HL-7702中TGF-β1、Gadd45γ、p53和p21基因的表达上调。结论在肝泡球蚴病晚期,炎症性细胞因子TGF-β1可能通过激活非经典型MAPK(Mitogen Activated Protein Kinase,JNK和p38)信号转导途径和细胞周期关键调控因子(Gadd45γ,p53,p21)调控肝脏细胞的生长抑制或凋亡,造成宿主肝脏的病理性损伤。
