DNA末端原位标记技术研究慢性再生障碍性贫血骨髓CD_(34)^+细胞凋亡

目的 观察慢性再生障碍性贫血 (CAA)患者骨髓CD3 4+ 细胞凋亡状况 ,探讨CAA可能的发病机制。方法 采用单克隆抗体 -免疫磁珠分离系统 (MACS)分离纯化 39例CAA患者的骨髓CD3 4+ 细胞 ,用DNA末端原位标 (TUNEL)技术分析骨髓CD3 4+ 细胞原位凋亡状况。结果 CAA患者骨髓细胞的凋亡率为 (39.2 4± 12 .70 ) % ,健康对照组为 (8.5 0± 2 .30 ) % ,组间比较差异有显著性 (P <0 .0 1)。凋亡细胞可见核染色质皱缩、凝聚 ,但未见到核碎裂现象及典型的凋亡小体。结论 CAA患者骨髓CD3 4+ 细胞的过度凋亡是其质或

骨髓标本中免疫组织化学及DNA原位末端标记双重染色技术的应用

为扩展免疫酶标记分子病理学技术在血液病基础与临床研究中的应用 ,我们探索了碱性磷酸酶抗碱性磷酸酶(APAAP)免疫组化和 DNA原位末端标记 (ISEL)技术在骨髓涂片和切片 (乙二醇甲基丙烯酸酯 GMA冷包埋 )中联合应用 (双重染色 )的方法 ,结果令人满意。

两种原位DNA断链标记技术检测组织切片和培养细胞中的凋亡细胞

目的:介绍两种原位 DNA 断链标记技术(TUNEL 和 ISNT)在检测常规石蜡组织切片和体外培养细胞凋亡中的应用。方法:用 TUNEL 和 ISNT 检测了甲基强的松龙处理的 SD 在鼠胸腺组织,正常鼠肠粘膜组织,肿瘤组织等标本的石蜡组织切片和体外培养的肿瘤细胞药物处理后发生凋亡的细胞爬片及再障病人骨髓涂片。结果:大鼠胸腺组织经甲基强的松龙处理后可见大量凋亡的 T 淋巴细胞,鼠肠粘膜组织粘膜上皮细胞以凋亡的方式更新脱落,肿瘤组织中可见散在凋亡细胞。药物处理的肿瘤细胞和再障病人骨髓细胞中有较多的凋亡细胞。被染成棕色或棕褐色的细胞在形态学上符合凋亡细胞的形态学改变。结论:两种方法具有应用范围广、特异性和敏感性都较高、可以检测早期的细胞凋亡、并可通过计算标记指数进行定量或半定量等的特点。特别适用于常规石蜡组织切片中细胞凋亡的检测,是不失于研究体内组织细胞凋亡的首选方法之一。

DNA分子标记技术及其原理

综述几种DNA分子标记技术:RFLP是用限制性内切酶切割不同个体基因组DNA后,含同源序列的酶切片段在长度上的差异,可靠性较高、但操作烦琐,信息含量低;染色体原位杂交是利用特异性核酸片段作探针,直接同染色体DNA片段杂交,在染色体上显示特异DNA,准确、直观,但技术非常复杂;PCR是模仿DNA在生物体内的自然复制过程来扩增DNA片段,安全性好,快速易行;RAPD是以人工合成的碱基顺序随机排列的寡核苷酸单链为引物,对所研究的基因组DNA进行PCR扩增,产生多态性的RAPD片段,可以检测多个基因位点,但不能识别杂合子位点;AFLP指纹技术是在RFLP与RAPD两种指纹技术基础上建立和发展起来的,有较高的稳定性,但对基因组纯度和反应条件要求较高;DNA芯片技术是一种以杂交测序基本理论为基础的新型生物技术,用于测序、基因表达、疾病诊断等,但造价、探针的密度与纯度还有待完善;小卫星DNA一般与RFLP技术结合以获得小卫星DNA指纹图谱,信息含量高,但它在染色体上分布不均匀;微卫星DNA既可用作探针获得指纹图谱,也可通过PCR方法进行微卫星位点多态性分析,但工作量大;ISSR即内部简单重复序列,也是一种新兴的分子标记技术,具有很好的稳定性和多态性。

亡细胞DNA片段原位末端检测技术在检测人肝细胞性肝癌石蜡切片中的应用(ISEL法检测技术的探讨)

作者采用ＢＯＥＨＲＩＮＧＥＲＭＡＮＮＨＥＩＭ公司新近推出的细胞死亡原位检测碱性磷酸酶试剂盒，对３１例人肝细胞癌石蜡切片进行了凋亡细胞检测。结果表明，该试剂盒具有灵敏度高，实验流程简便和重复性好等优点。另外，就实验流程中ｐＨ值及蛋白酶Ｋ浓度校正和ＮＢＴ／ＢＣＩＰ显色过程中应注意的问题作了介绍。作者认为良好的标记切片应具备下列条件：①检出的阳性信号应有良好的组织内定位和细胞内定位；②正常组织、有病变的组织和肿瘤组织间，同一病例组织切片内的阳性信号率和阳性强度应有一定差异；③清晰的标记切片背景和适度的复染效果。

应用DNA片段原位末端标记法检测胃良恶性组织中程序性细胞死亡

应用ＤＮＡ段原位末端标记法对胃粘膜正常组织和胃癌组织进行程序性细胞死亡（ＰＣＯ）的检测。２５例正常胃组织中有２０例ＰＣＯ为，５例为，而２５例胃癌组织中ＰＣＤ均为＋。结果提示，ＤＮＡ片段原位末端标记法检测ＰＣＤ灵敏度高，特异性强，为胃癌的防治研究提供了一项分子水平的观察指标。

运用原位末端标记和ICM—DNA定量检测重型肝炎中Ⅲ型细胞死亡

目的 探索Ⅲ型细胞死亡在重型肝炎中生物学特性和形态学特征及其发病中的意义。 方法用ICM-末端标记(ISEL)、ICM-DNA定量并结合形态学方法,观察17例重型肝炎中细胞死亡。 结果 ①Ⅲ型细胞的ISEL标记阳性,在急性和亚急性重型肝炎中的阳性率为(15±7)个/hpf,高于I型细胞的(5±3)个/hpr(P<0.05),而且无核周空晕,无凋亡小体形成,多分布于大片或亚大片坏死区和坏死边缘区,形态上与Ⅱ型细胞有过渡。②原位DNA定量I型、Ⅲ型细胞中亚2C细胞的百分率分别65％和46％,高于残存肝细胞的11％,(P<0.01～0.05),I型和Ⅱ型细胞中的亚2C分别为65％和29％,也存在差异(P<0.05);I型和Ⅲ型细胞核面积分别为22.09和25.11μm^2,均低于残存肝细胞的59.91μm^2(P<0.05)。③光镜下形态学观察表明:Ⅲ型细胞核染色质边聚,细胞体积缩小等有I型细胞特征,胞浆丰富,胞膜边界不清,又有Ⅱ型细胞特征。结论 Ⅲ型细胞死亡与凋亡和坏死相关,是在重型肝炎坏死区中出现的一种特殊类型的细胞死亡。

分子标记技术在棉花育种中的应用

文章阐述了限制性片段长度多态性 (RFLP)、随机扩增多态性DNA (RAPD)、扩增片段长度多态性(AFLP)、分子原位杂交 (ISH)等几种分子标记的原理以及在棉花育种研究中的应用 ,可用于建立品种的指纹档案 ,保护品种专利 ;对重要农艺形状进行早期鉴定 ,缩短育种时间 ;应用分子标记构建棉花的遗传图谱 。

原位DNA末端转移酶法检测细胞凋亡的影响因素

利用原位ＤＮＡ末端转移酶（ＩＳＴｄＴ）法检测肝硬变、肝癌组织标本及小鼠小肠粘膜上皮细胞凋亡。结果发现２５ｍｇＬ－１蛋白酶Ｋ消化１５ｍｉｎ，ＴｄＴ反应后采用中火档微波处理５ｍｉｎ可获最佳结果。

两种原位DNA断链标记技术检测组织切片和培养细胞中的凋亡细胞

目的开发应用范围广，特异性、敏感性高的凋亡细胞检测技术。方法用末端脱氧核苷酸转移酶介导ｄＵＴＰ缺口末端标记法（ＴＵＮＥＬ）和Ｋｌｅｎｏｗ大片段介导的原位缺口翻译法（ＩＳＮＴ）检测了甲基泼尼松龙处理的ＳＤ大鼠胸腺组织，正常鼠肠粘膜组织、肿瘤组织等标本的石蜡组织切片，和体外培养的肿瘤细胞药物处理后发生凋亡的细胞爬片，以及再生障碍性贫血（再障）病人的骨髓涂片。结果在大鼠胸腺组织中可见大量凋亡的Ｔ淋巴细胞，鼠肠粘膜组织粘膜上皮细胞以凋亡的方式更新脱落，肿瘤组织中可见散在的凋亡细胞。药物处理的肿瘤细胞和再障病人骨髓细胞中有较多的凋亡细胞。被染成棕色或棕褐色的细胞在形态学上符合凋亡细胞的形态学改变。结论此两种方法可用于检测组织切片和培养细胞中的凋亡细胞，可以检测早期的细胞凋亡、并可通过计算标记指数对凋亡细胞进行定量或半定量。

凋亡细胞核DNA片段检测方法进展

当今生物学领域的研究一个热点之一是细胞凋亡。开展对细胞凋亡的研究，首先要解决是方法学问题。作者从调亡细胞的特征性核DNA片段检测着手，阐述了多种调亡细胞核DNA片段检测方法以及近年来的一些新进展。

卵巢浆液性、黏液性囊腺癌DNA拓扑异构酶的表达

目的 :探讨DNA拓扑异构酶在卵巢浆液性、黏液性囊腺癌中的表达及与细胞增殖、凋亡的关系。方法 :应用免疫组化S P法检测石蜡包埋的 71例卵巢浆液性、黏液性囊腺癌组织切片中DNA拓扑异构酶Ⅱ (DNAtopoisomeraseⅡ ,TOPOⅡ )表达和细胞增殖指数 (Ki 6 7labelingindex ,Ki 6 7LI)和应用原位末端标记技术 (TUNEL)检测细胞凋亡指数 (apoptosisindex ,AI)。结果 :TOPOⅡ高表达为 36 6 % (2 6 /71) ,与组织学类型、FIGO分期和组织学分级差异无显著性 (P >0 0 5 ) ;Ki 6 7LI高表达为 43 7% (31/71) ,与FIGO分期差异有显著性 (P <0 0 0 1) ;AI高表达为 2 5 6 % (18/71) ,与组织学分级、FIGO分期和组织学分级均差异无显著性 (P >0 0 5 ) ,但AI与TOPOⅡ表达有相关 (P <0 0 1)。结论 :应用免疫组化方法检测组织中TOPOⅡ和Ki 6 7LI水平 ,对卵巢浆液性。

老龄大鼠局灶性脑缺血周围区DNA损伤的研究

目的 探讨老龄大鼠局灶性脑缺血周围DNA损伤特点。方法 应用HE染色、原位末端标记法 (TUNEL)标记、原位分子杂交、免疫组织化学等方法 ,分别对缺血 4、2 4h和 5d组大鼠脑组织中坏死细胞、凋亡细胞、p5 3mR NA、p5 3蛋白阳性细胞密度及空间分布进行观察和比较。结果 不同时间点病灶周围每高倍视野TUNEL、p5 3蛋白、p5 3mRNA的阳性细胞数分别为 4h :8.0± 1.5、2 5 .1± 2 .6、10 .3± 1.9;2 4h :2 0 .5± 2 .4、6 0 .0± 4.8、2 2 .0± 1.8;5d :2 .1± 0 .4、3.6± 1.4、3.5± 0 .8。p5 3基因主要在形态完整和可逆性损伤细胞中表达、分布范围较TUNEL细胞广泛。结论 局灶性脑缺血后 ,缺血周围DNA损伤区大于凋亡区 ,p5 3基因表达范围可能代表病理意义上的半暗带 ;p5

发育期小鼠肾小体细胞凋亡的研究

目的 研究小鼠肾小体发育过程中的细胞凋亡规律及形态学特点。 方法 应用光镜、电镜技术和脱氧核糖核酸末端转移酶介导的dUTP缺口末端标记法 (TUNEL法 )分别对不同胚龄和生后日龄小鼠肾小体内细胞凋亡进行观察。 结果 胚龄 14d肾小体发生时就出现细胞凋亡 ,胚龄 18d左右达到高峰 ,随后缓慢下降。肾小体内凋亡细胞以内皮细胞和足细胞多见。凋亡细胞的两种结局 :1 被邻近的细胞所吞噬 ;2 落入肾小体的毛细血管腔或肾小囊中。 结论 小鼠肾小体的整个发育过程均存在细胞凋亡现象 ,肾小体内细胞凋亡与肾小体发育的完善有关。

细胞凋亡与大鼠肾小球硬化关系的初步探讨

目的 通过实验性动物模型观察细胞凋亡与肾小球硬化发生发展的相关性。方法 用一侧肾切除加静脉注射柔红霉素的方法建立大鼠肾小球硬化模型 ,应用原位末端转移酶标记技术 (TUNEL)观察细胞凋亡的发生。结果 ①建立的大鼠肾小球硬化模型 ,其组织形态学特征类似于人类局灶性节段性肾小球硬化的发生发展 ,第 4周开始出现硬化病灶 ,第 8周肾小球大部分节段均成为硬化病灶。②TUNEL结果显示 ,对照组大鼠肾组织中仅存在极少的细胞凋亡现象 ;肾小球硬化模型的肾组织 2周组无显著的细胞凋亡现象 ;4周组开始出现小球细胞凋亡现象 ,与对照组比较差异有显著性 [(5 .4± 1.2 )vs (1.6± 0 .8) ](P <0 .0 1) ;6周至 8周组小球细胞凋亡达高峰 ,凋亡细胞数分别为 (8.6± 2 .8) ,(10 .1± 1.9) ,与对照组比较 [分别为 (1.8± 0 .8) ,(1.7± 0 .5 ) ],差异有显著性 (P <0 .0 1)。③ 4周～ 8周 (硬化初、中期 ) ,硬化肾小球中出现的凋亡细胞数与肾小球细胞总数呈明显负相关(r =- 0 .85 ,P <0 .0 1) ;8周 (硬化后期 )以后 ,硬化肾小球内出现的凋亡细胞数与肾小球细胞总数呈正相关 (r=0 .91,P <0 .0 1)。结论 细胞凋亡与大鼠肾小球硬化发生的范围及进展的时相密切相关 。