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用于诱导纳米金快速聚集比色传感的DNA染料筛选
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作者 叶子熠 刘霜 张信凤 《光谱学与光谱分析》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2023年第9期2805-2810,共6页
近年来,金纳米粒子(AuNPs)因其极高的消光系数以及距离依赖性颜色而被广泛用于比色传感器的开发利用。常见的盐诱导AuNPs聚集通过电荷屏蔽的方式进行,聚集过程易受到干扰,聚集后颜色往往不稳定,而DNA染料通过电荷中和的方式实现AuNPs聚... 近年来,金纳米粒子(AuNPs)因其极高的消光系数以及距离依赖性颜色而被广泛用于比色传感器的开发利用。常见的盐诱导AuNPs聚集通过电荷屏蔽的方式进行,聚集过程易受到干扰,聚集后颜色往往不稳定,而DNA染料通过电荷中和的方式实现AuNPs聚集,该方法具有用量少,聚集速度快,并且稳定性好的优势,因此对常见DNA染料进行筛选十分必要。系统筛选了8种常见DNA染料包括EB、AO、TO、SG、PG、TOTO^(-1)、TOTO-3和YOYO用于诱导AuNPs的快速聚集。实验发现诱导AuNPs团聚的染料用量在0.18~2.6μmol·L^(-1)之间,相比NaCl和Cys用量分别为60和20 mmol·L^(-1)的传统诱导聚集方法用量仅为万分之一。通过考察DNA染料诱导AuNPs聚集的“IC 50”值(即诱导剂使AuNPs聚集的最大吸光度变化(A 680/A 520)的50%的浓度)评价聚集效率,在筛选的8种DNA染料中,SG、PG、TOTO^(-1)、TOTO-3和YOYO分子的“IC 50”值在0.12~0.30μmol·L^(-1)之间,相对较小,诱导AuNPs聚集效率高。由于带正电的N原子数量对AuNPs的聚集有关键性的作用,即带正电的N原子数量越多,中和AuNPs时的用量越少。通过Marvin View中microspecies(微观结构式)和microspecies distribution(微观结构式分布)算出了具体带正电的N原子个数,结果表明,在pH=7条件下,SG、PG、TOTO^(-1)、TOTO-3和YOYO分子带正电荷的N原子较多,因此上述染料诱导AuNPs聚集效率高。通过乔布曲线(Job)计算出双链DNA(dsDNA)碱基对与DNA染料的结合比,结果表明相同条件下,筛选的8种DNA染料与dsDNA碱基对的结合比相差不大。结合实验拟合曲线计算出dsDNA与DNA染料的结合常数,计算表明SG,YOYO,TOTO-3,PG与dsDNA的结合常数较大,在2.75×109~3.12×1010 L·mol^(-1)之间,与DNA结合能力较强。综合考虑SG、PG、YOYO、TOTO-3等染料在快速诱导AuNPs聚集及比色传感方面效果较好。 展开更多
关键词 dna染料 纳米金 结合常数 传感
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荧光染料双染法观察汉防己对胸腺细胞的作用
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作者 陈英杰 陈元晓 +2 位作者 肖伟 李必俊 周轶平 《四川解剖学杂志》 2009年第1期17-19,共3页
目的观察防己(Radix Stephaniae Tetrandrae)对小鼠胸腺细胞增殖的影响。方法取昆明种小鼠的胸腺细胞,分为对照组和药物组,药物组用100μg/ml汉防己煎剂对胸腺细胞分别作用1h、6h、12h、24h后,采用DNA荧光染料双染法观察胸腺细胞增殖的... 目的观察防己(Radix Stephaniae Tetrandrae)对小鼠胸腺细胞增殖的影响。方法取昆明种小鼠的胸腺细胞,分为对照组和药物组,药物组用100μg/ml汉防己煎剂对胸腺细胞分别作用1h、6h、12h、24h后,采用DNA荧光染料双染法观察胸腺细胞增殖的影响。结果实验组可见典型凋亡细胞,对照组细胞大小比较均一,无明显形态学变化。随着药物作用时间的延长,凋亡小体的比例显著增加。结论防己可以诱导小鼠胸腺的细胞的凋亡。 展开更多
关键词 胸腺的细胞 增殖抑制 汉防己煎剂 dna荧光染料双染法
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Fluorescent vital staining of plant sexual cell nuclei with DNA-specific fluorochromes and its application in gametoplast fusion 被引量:2
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作者 YANGHONGYUAN XINLIWU 《Cell Research》 SCIE CAS CSCD 1993年第2期121-130,共10页
DNA-binding fluorochromes are often used for vital staining of plant cell nuclei. However, it is not always sure whether the cells after staining still remain in living state. We chose several criteria to estimate the... DNA-binding fluorochromes are often used for vital staining of plant cell nuclei. However, it is not always sure whether the cells after staining still remain in living state. We chose several criteria to estimate the validity of real vital staining for sexual cell nuclei. These were: the cytoplasmic streaming in pollen tubes whose nuclei were stained, the simultaneous visualization of fluo-rochromatic reaction and nucleus staining in isolated generative cells, and the capability of isolated, prestained generative or sperm cells to fuse with other protoplasts. The results confirmed that 4',6-diamidino-2-phenylindole (DAPI), Hoechst 33258 and mithramycin could be used as real vital stains, though their efficiency varied from case to case; among them DAPI showed best effect. The fluorescent vital staining technique offered a useful means fori-dentification and selection of heterokaryons in gametoplast manipulation studies. 展开更多
关键词 fluorescent vital staining dna-specific fluorochrome generative cell sperm cell gametoplast fusion.
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定量PCR的荧光技术 被引量:4
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作者 许颂霄 王虹 尹一兵 《生命的化学》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期413-415,共3页
荧光定量PCR是在普通PCR基础上,利用荧光技术对核酸进行绝对定量的一项新兴技术,其灵敏度高、特异性高、操作简便和定量准确,已被广泛应用于临床和科研中。为更好地发挥荧光定量PCR的优点,荧光技术领域的研发工作十分活跃。
关键词 荧光定量PCR 荧光探针 dna染料
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利用环介导恒温扩增法快速检测空肠弯曲菌 被引量:1
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作者 刘孝波 蒋栋能 蒲晓允 《医学研究杂志》 2013年第8期91-94,共4页
目的利用环介导恒温扩增技术,以空肠弯曲菌的VS1基因设计引物,建立快速检测空肠弯曲菌的方法,以期能应用于急性腹泻和肠炎等疾病的快速检验。方法①通过基因比对与引物设计,设计针对空肠弯曲菌的环介导恒温扩增检测(LAMP)方法;②用钙黄... 目的利用环介导恒温扩增技术,以空肠弯曲菌的VS1基因设计引物,建立快速检测空肠弯曲菌的方法,以期能应用于急性腹泻和肠炎等疾病的快速检验。方法①通过基因比对与引物设计,设计针对空肠弯曲菌的环介导恒温扩增检测(LAMP)方法;②用钙黄绿素、亚甲基蓝、结晶紫、溴化乙锭4种DNA染料对扩增产物进行染色,评价各染料染色效果;③检测该LAMP方法对空肠弯曲菌及其他干扰菌的扩增情况,评价其特异性;④将该LAMP方法与培养法比较,进行统计学分析。结果①设计出针对空肠弯曲菌的LAMP检测方法;②钙黄绿素与扩增产物结合后颜色变化明显,是该LAMP方法中较好的DNA染料物质;③本LAMP检测方法只针对空肠弯曲菌有扩增,对其他干扰菌不扩增,显示出良好的特异性;④试验共检测了60株临床和标准菌株,对于菌株的培养物,LAMP检测结果与培养鉴定法比较差异无统计学意义(χ2=0.3333,P>0.05)。结论本试验设计出了针对空肠弯曲菌LAMP检测方法,该LAMP法较好的DNA染料物质是钙黄绿素,该方法具有良好的特异性,与培养鉴定法比较具有较高的阳性、阴性及总体符合率,能够用于空肠弯曲菌的快速检验。 展开更多
关键词 环介导恒温扩增 空肠弯曲菌 dna染料 钙黄绿素 快速检验
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多种绿色DNA嵌入染料实时荧光PCR检测猪DNA效果比较 被引量:3
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作者 杨艳 王桂姬 +3 位作者 周广运 任皓威 夏秀芳 刘宁 《中国食品学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2018年第6期283-289,共7页
实时荧光定量PCR是食品科学领域一种高效、灵敏的研究技术,荧光染料的种类和浓度会对实时PCR反应产生一定影响。以8种绿色荧光DNA嵌入染料SYTO 11~14,SYTO 16,SYTO 21,SYTO 24~25为研究对象,体系选择荧光染料浓度分别为10,5,2,1,0.5μmo... 实时荧光定量PCR是食品科学领域一种高效、灵敏的研究技术,荧光染料的种类和浓度会对实时PCR反应产生一定影响。以8种绿色荧光DNA嵌入染料SYTO 11~14,SYTO 16,SYTO 21,SYTO 24~25为研究对象,体系选择荧光染料浓度分别为10,5,2,1,0.5μmol/L,以从猪肉中提取的基因组DNA为模板进行扩增,产物长度149 bp。通过分析Ct值和熔解曲线,评价染料浓度对扩增效果的影响,初步筛选出最适染料及相应浓度:SYTO 11(5μmol/L,2μmol/L),SYTO 13(10μmol/L,5μmol/L),SYTO 16(10μmol/L,5μmol/L),SYTO 21(1μmol/L)和SYTO 24(0.5μmol/L)。根据筛选结果自配反应预混液,以2种商业实时荧光PCR预混液为参照,通过模板10倍梯度稀释绘制标准曲线,计算扩增效率,R2均大于0.99,线性范围均在40 ng^0.04 pg之间,其中染料SYTO 13(10μmol/L)和SYTO 16(10μmol/L,5μmol/L)扩增效率分别为99.35%,100.50%和99.71%,接近商业试剂盒2(BYRT染色,扩增效率99.61%),高于商业试剂盒1(Evagreen染色,扩增效率97.80%),具有实际应用价值。 展开更多
关键词 实时荧光PCR dna嵌入染料 dna
原文传递
不同脲酶抑制剂对瘤胃微生物数量的影响 被引量:7
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作者 李大刚 李杰 《粮食与饲料工业》 CAS 2004年第9期38-40,共3页
以4只装有永久性瘘管的本地山羊来研究3种脲酶抑制剂:乙酰氧肟酸、丝兰皂甙、对苯二酚对山羊瘤胃微生物数量的影响,采用自身前后对照实验设计,分别用DNA荧光染料法和MFS法对瘤胃液细菌与原虫进行记数。研究结果表明,脲酶抑制剂对瘤胃细... 以4只装有永久性瘘管的本地山羊来研究3种脲酶抑制剂:乙酰氧肟酸、丝兰皂甙、对苯二酚对山羊瘤胃微生物数量的影响,采用自身前后对照实验设计,分别用DNA荧光染料法和MFS法对瘤胃液细菌与原虫进行记数。研究结果表明,脲酶抑制剂对瘤胃细菌总数没有影响(P>0.05);丝兰属植物提取物能显著降低瘤胃原虫数量(P<0.05)。 展开更多
关键词 脲酶抑制剂 瘤胃 微生物数量 山羊 dna荧光染料 MFS法
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实时荧光PCR技术的研究及其应用进展 被引量:21
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作者 高斌 刘敬忠 《诊断学理论与实践》 2005年第6期507-509,共3页
关键词 实时荧光定量聚合酶链反应 荧光标记探针 dna结合染料 标准曲线
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一种简便快速的聚合酶活性实时检测新方法 被引量:3
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作者 栾瑞波 孟祥贤 +3 位作者 羊小海 王柯敏 谭蔚泓 郭秋平 《生命科学研究》 CAS CSCD 2006年第2期113-117,共5页
基于双链DNA结合染料能特异嵌入双链DNA发出荧光的原理,发展了一种实时检测DNA聚合酶活性的简便方法.在检测过程中,聚合酶的聚合反应进程被实时转换为荧光信号,通过监测荧光强度的变化实时检测聚合酶的活性及药物对聚合酶活性的影响.该... 基于双链DNA结合染料能特异嵌入双链DNA发出荧光的原理,发展了一种实时检测DNA聚合酶活性的简便方法.在检测过程中,聚合酶的聚合反应进程被实时转换为荧光信号,通过监测荧光强度的变化实时检测聚合酶的活性及药物对聚合酶活性的影响.该方法不需要对DNA进行放射性同位素标记和荧光标记,也不需要聚丙烯酰胺凝胶电泳和聚合酶链式反应,是一种简便、快速的聚合酶活性实时检测新方法,为研究抗肿瘤药物对聚合酶活性的影响提供了一种简捷方法,也将为相关疾病诊治和药物筛选提供一种新的思路. 展开更多
关键词 聚合酶 双链dna结合染料 实时监测 活性
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羊乳制品中牛乳成分的荧光定量PCR检测方法研究 被引量:12
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作者 宋宏新 刘建兰 +1 位作者 徐丹 徐秦峰 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2018年第7期283-287,299,共6页
选取牛、羊线粒体12S rRNA基因的特异性引物,以新鲜牛、羊乳样品提取模板DNA,建立了基于DNA结合染料(SYBR Green I)的实时荧光定量PCR方法,用于羊乳制品中牛乳成分的掺假鉴别检测。结果表明,该方法最低可检出新鲜羊奶中掺入2.5%的牛乳成... 选取牛、羊线粒体12S rRNA基因的特异性引物,以新鲜牛、羊乳样品提取模板DNA,建立了基于DNA结合染料(SYBR Green I)的实时荧光定量PCR方法,用于羊乳制品中牛乳成分的掺假鉴别检测。结果表明,该方法最低可检出新鲜羊奶中掺入2.5%的牛乳成分,并应用于11份市售羊乳制品样本中的牛、羊源性成分的鉴别。基于DNA结合染料的定量PCR检测无需电泳分离和设计标记DNA探针,具有快速、灵敏、低成本和高通量等优点,可以作为羊乳及其深加工制品中牛乳源性成分掺入检测的有效手段之一。 展开更多
关键词 羊乳掺假 牛乳 荧光定量PCR dna结合染料
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