显示DNA染色技术对角膜上皮性肿瘤病理诊断中的应用

显示ＤＮＡ染色技术对角膜上皮性肿瘤病理诊断中的应用邢惠清，丁华野，田玉旺，郭山春，李颖（北京军区总医院病理科）应用Ｆｅｕｌｇｅｎ微波仪特染技术，对５１例角结膜上应性肿瘤细胞核内ＤＮＡ显示并应用真彩色图像对ＤＮＡ含量分析。临床病理可作为辅助诊断，并可从...

应用肝细胞涂片评估DNA染色方法的可靠性

目的探讨应用肝细胞涂片评估DNA染色方法的可靠性。方法选取10只成年健康雄性小鼠,制备肝细胞涂片,Feulgen染色和天青蓝染色,TIGER细胞图像分析仪测量肝细胞核的DNA含量与倍体。结果涂片内肝细胞核分布均匀,轮廓清晰;Feulgen染色法中肝细胞核呈紫红色,天青蓝染色法呈蓝色;作为参比的Feulgen染色涂片中不同倍体间IOD的比值比天青蓝染色标本更接近倍体数的比值,其CV值也低于天青蓝染色法。结论小鼠肝细胞涂片可应用于评估显示DNA染色方法的可靠性。

微波辐射技术在癌细胞DNA染色中的应用

传统的Ｆｅｕｌｇｅｎ染色方法存在着染色时间长、结果不稳定等缺点，影响对癌细胞ＤＮＡ含量的准确测定及诊断。我们利用微波辐射技术与常规Ｆｅｕｌｇｅｎ染色法相结合，对各种癌细胞进行了ＤＮＡ染色实验。结果表明，微波用于ＤＮＡ染色，具有快速、简便、重复性好等优点。组织浸染Ｓｃｈｉｆ液由常规法的１ｈ左右可缩短为６ｍｉｎ，而且癌细胞核内ＤＮＡ显示十分鲜明，背景清晰，结果稳定，显著提高了ＤＮＡ染色质量，为癌细胞ＤＮＡ含量的准确分析提供了一种新的技术方法。

微波辐射技术在癌细胞DNA染色中的应用

微波辐射技术在癌细胞ＤＮＡ染色中的应用＠胡海霞＠李春光＠谷化平＠苏红￥中国人民解放军第二五一医院病理科微波辐射技术在癌细胞ＤＮＡ染色中的应用胡海霞李春光谷化平苏红（中国人民解放军第二五一医院病理科，张家口０７５０００）癌细胞ＤＮＡ含量测定和倍体分析是近年肿...

缺血心肌细胞核DNA染色法观察

目的 观察缺血心肌细胞核的形态改变。方法 收集 18例心肌缺血组织切片 ,用改良Feulgen氏染色法对细胞核DNA染色 ,在高倍镜下 (40× )观察、计数 ,并进行统计分析。结果 心内膜下缺血心肌细胞核异常肥大、畸形 ,肥大畸形细胞核数目明显多于正常对照组 ,两者有明显差异 (P <0 .0 1)。结论 细胞核DNA染色可作为病理学诊断心肌缺血的指标之一 。

龙胆紫希夫氏液显示DNA染色新方法

应用龙胆紫配制成Schiff(希夫氏)试剂,在微波辐射下进行Feulgen染色,结果使正常及良、恶性肿瘤组织细胞核内DNA着紫红色,并能应用真彩色图像仪进行DNA的定量分析.其方法操作简便,便于临床病理诊断应用.现介绍如下.标本的采集:活检手术切取的肿瘤组织100余例,经甲醛固定,石蜡包埋.切片,厚5μm.染液的配制:①8.3%盐酸水溶液(HCl8.3ml、蒸馏水 91.7ml);②龙胆紫(上海试剂站)希夫氏试剂的配制同PAS方法,以龙胆紫代替碱性品红;③亚硫酸氢盐溶液(10%偏重亚硫酸钠溶液5ml、1mol/L-HCl5ml、蒸馏水90ml).染色步骤;①切片脱蜡至水—蒸馏水;②8.3%盐酸水溶液水解切片1min(微波仪5档),蒸馏水洗;

重症肌无力患者血浆染色体外环状DNA的分子特征

目的对重症肌无力(myasthenia gravis,MG)患者血浆染色体外环状DNA(extrachromosomal circular DNA,eccDNA)进行全长测序,分析eccDNA的分子特征及潜在功能,初步探索eccDNA在MG发病过程中的作用机制。方法收集2例MG患者及2例性别、年龄与之匹配的健康人血浆样本,基于滚环扩增和纳米孔测序全新技术平台,对血浆eccDNA进行全长测序,分析比较MG患者与健康人血浆eccDNA的长度分布、染色体来源、基因组元件分布及eccDNA相关差异基因功能富集情况。结果在MG患者和健康对照者中,长度为250~500 bp的eccDNA均分布最多,且MG患者在150~300 bp之间eccDNA呈现另一分布高峰,对照组则在此区间的eccDNA丰度极低。健康对照组eccDNA在1号染色体上分布最多,而MG患者组eccDNA在2号染色体上分布最多;MG患者eccDNA来源基因组元件在内含子、远端基因间区占比均高于健康对照者,而外显子区占比均低于健康对照者。相较于健康对照组,MG患者组eccDNA差异基因富集的通路多与氯离子通道活性、氯离子跨膜转运、钙离子结合及细胞信号传导有关。结论MG患者与健康人血浆eccDNA的分子特征(大小分布、染色体来源、基因组元件分布、eccDNA基因功能富集)存在差异,提示eccDNA可能通过基因表达调控、细胞信号传导、神经突触发育及免疫功能调节等潜在功能影响MG的发生发展,eccDNA可能成为MG早期诊断和疗效监测的新型生物标志物。

染色体外环状DNA在肿瘤中的研究进展

染色体外环状DNA(extrachromosomal circular DNA,eccDNA)是一种来自染色体的双链环状DNA。eccDNA种类繁多,但其来源与功能仍尚不清楚。越来越多的证据表明eccDNA通过多种方式在癌症中发挥重要作用,且可能作为生物标志物参与肿瘤诊断与预后判断。本文综述eccDNA的分类、来源、功能等方面的研究进展,为eccDNA的研究提供参考。

染色体外环状DNA的研究进展

染色体外环状DNA(eccDNA)是一类独立于染色体的环状闭合DNA分子,呈现单链或双链,长度主要在1 kb以下,广泛存在于自然界中。目前认为,eccDNA的起源并非随机而是具有明显的序列倾向性,并提示其具有潜在的调控基因表达和影响基因组稳定性和可塑性等作用。eccDNA的生成是一个多机制参与的复杂过程,主要包括染色体微缺失、细胞凋亡和凋亡介导的DNA片段化以及DNA损伤修复等过程。eccDNA染色体起源和亚细胞定位的不同,决定了eccDNA具有调控相关基因表达、产生特异转录本、激活免疫炎症反应等不同的功能。eccDNA在孕妇外周血、成神经管细胞瘤、晚期慢性肾病等不同生理或病理状态下,表现出长度、丰度和表观遗传学等方面的特异性分子特征,同时它的环状结构赋予其较高的稳定性,提示其可能具有成为新型生物标志物的潜力,在液体活检等领域可能具有应用价值。本综述旨在阐明eccDNA的生物学特性、生物学功能以及潜在应用等方面的最新研究进展,为了解eccDNA的发生机制、特征和作用以及为后续研究提供思路。

染色体外环状DNA及其功能概述

染色体外环状DNA是近年来发现的一种在真核生物细胞中普遍存在的基因组DNA,在生物体的多种生理和病理过程如免疫反应、肿瘤生长中都发挥着重要作用。从染色体外环状DNA的发现、类型、形成机制及其生物学功能等方面对其研究现状进行综述,以期为高中生物学基因与染色体相关内容的教学提供拓展素材。

适用于流式细胞术的三角褐指藻核DNA染色方法

为制备可用于配置有488 nm激发器的流式细胞仪检测核DNA含量的三角褐指藻细胞,取对数生长期的三角褐指藻细胞,分别采用70%乙醇、1%戊二醛、1%甲醛溶液进行细胞固定,经RNase A消化后的样品用碘化丙啶(PI)染色,用SYBR-green I对未经RNase A消化的细胞染色,在荧光显微镜下观察细胞染色情况,用流式细胞仪检测细胞核DNA含量.结果显示:在荧光显微镜下观察到,3种不同固定液固定的细胞均表现为SYBR-green I只对藻细胞核染色,PI对于藻的细胞核与细胞质均有着色.流式结果的DNA直方图显示,SYBR-green I染色的细胞的DNA直方图有明显的G1与G2/M峰,拟合度(RCS)在3左右,变异系数(CV)在8.6%左右.而PI染色细胞的DNA直方图表现为变异系数值偏大,拟合度较低,没有明显的G1与G2/M峰.本研究表明,SYBR-green I是一种无需对细胞进行RNase A处理,可应用于配置有488 nm激光器流式细胞仪的核酸染料,可为研究在整个细胞周期的调控机制奠定基础,同时也为其他浮游植物细胞核的染色提供参考.

不同染色法对流式细胞术中DNA含量检测的影响

流式细胞术是目前对细胞进行定性和定量分析最有效的手段之一。本文从染色方法和染色样品存放时间在使用流式细胞术中对染色结果的影响进行了比较 ,旨在寻求一种简便、灵敏且重复性好的染色方法。流式细胞仪分析结果显示一步法同时具备了以上优点 ,并用经不同浓度三尖杉酯碱 (HT)处理的 HL - 6

一种快速提取真菌染色体DNA的方法

介绍了一种适用于多种真菌染色体DNA的快速提取方法。该方法用石英砂振荡破壁 ,快速便捷地提取真菌染色体DNA ,提取时间仅用 1～ 2h。作者应用该方法成功地提取了粗糙脉胞菌 (Neurosporacrassa)、米曲霉 (Aspergillusoryzae)、羊肚菌 (Morchellaesculcnta)、酿酒酵母 (Saccharomycescervisae)等 4种不同真菌的染色体DNA ,所提DNA片段均大于2 0kb ,可直接用于限制性内切酶酶切。

石英砂研磨法快速提取顶头孢霉染色体DNA

本研究的目的是改进头孢菌素C产生菌顶头孢霉基因组DNA的提取方法。采用氯化苄法、液氮研磨法以及石英砂研磨法进行比较,从提取的DNA数量及纯度来分析,石英砂法要好于液氮研磨法,与氯化苄法效果相当,但避免了氯化苄的毒性。提取液的pH对结果影响不大,当pH为9.0～10.0之间时,收率稍高;EDTA浓度应大于40 mmol/L。经石英砂研磨破壁,获得了较高质量的染色体DNA,该法与液氮研磨法、氯化苄法相比廉价、快速、安全,且不影响其后续的分子生物学操作。

DNA荧光染色法和培养法在支原体检测中的比较

[目的]为检测支原体寻求一种有效、快速的方法。[方法]分别运用DNA荧光染色法和培养法对原材料、细胞和生物制品中的支原体污染进行检测,并对检测结果进行比较。[结果]DNA荧光染色法能够快速、准确地检测出细胞中支原体的污染;培养法在支原体检测中需要的时间较长,但能有效地对原材料、细胞和生物制品中支原体污染进行检测。[结论]有效地检测支原体应根据待检样品的特性来筛选最合适的方法。

PCR、DNA荧光染色法与培养法在支原体检测中的比较

用PCR、DNA荧光染色法及培养法，对46株细胞培养物中污染的支原体进行检测，对实验过程及所获得的实验结果进行分析，从实验的可行性、敏感性、可靠性三方面对3种方法进行了评估分析。以便选择支原体检测方法提供参考。

基因工程菌里氏木霉染色体DNA的提取方法

研究基因工程菌株里氏木霉 (TrichodermaTeesei)染色体DNA的提取方法。采用冷冻研磨CTAB法、氯化苄SDS法和冷冻研磨SDS法三种提取DNA的方法。通过琼脂糖凝胶电泳对提取的DNA进行检测。结果表明 :冷冻研磨CTAB法更适合此类DNA的提取。对冷冻研磨CTAB法提取条件进行了优化。用该法提取的DNA上的外源基因t-PAcDNA部分片段进行PCR扩增 ,获得良好结果。用本实验冷冻研磨CTAB法提取的DNA完全适用于PCR和其它的分子生物学操作的要求。