DNA模板荧光金属纳米团簇的合成及应用

荧光金属纳米团簇的尺寸介于金属原子和纳米颗粒之间,特殊的结构和尺寸赋予了金属纳米团簇一系列优异的荧光特性,如荧光强度高、抗光漂白性能强、较大的斯托克斯位移。脱氧核糖核酸(DNA)由于其独特的结构和可设计的序列而成为合成金属纳米簇的理想模板。DNA模板的金属纳米簇主要包括DNA模板的银纳米团簇(DNA-AgNCs)、铜纳米团簇(DNA-CuNCs)、金纳米团簇(DNA-AuNCs)等。DNA模板的金属纳米团簇作为一种新型的荧光纳米探针在生物传感和生物成像等领域具有较大潜在应用价值。基于先前对DNA模板的金属纳米团簇的研究,系统总结了DNA模板的金属纳米簇的制备、性质和在生物传感以及生物成像中的应用。最后,讨论了DNA模板的金属纳米簇的未来发展研究重点和前景。

DNA模板骨架合成金属纳米团簇传感策略概述

以DNA模板为骨架合成的金属纳米团簇含有几个到几百个原子,其尺寸范围从亚纳米到2纳米。由于具有很强的量子限域,该类金属纳米团簇表现出优良的类分子荧光特性。该文主要概述了以不同DNA序列模板合成的银纳米团簇(AgNCs)、铜纳米团簇(CuNCs)和金纳米团簇(AuNCs),及其在生物传感领域的应用。与其他配体保护的金属纳米团簇相比,DNA模板金属纳米团簇表现出更优越的物理、化学特性和生物相容性。如DNA模板银纳米团簇根据模板序列的不同,显示出可调的荧光发射和增强的稳定性。近些年来,研究者们利用金属团簇作为一类特殊的免标记型荧光信标,构建了各种目标物检测的传感平台,包括小分子和离子检测,蛋白检测以及核酸检测等。在可预见的未来,基于巧妙设计的DNA-金属纳米团簇及其复合材料在生物传感和生物分析领域将有更大的发展。

萱草种质资源扩增片段长度多态性鉴别与分类的研究Ⅰ.萱草DNA模板的制备

为了获得萱草清晰的 AFL P指纹图谱并进一步进行萱草种质资源的鉴别与分类研究 ,以大花萱草为试材 ,用改进后的 SDS法和 CTAB法 ,从萱草的幼叶、成熟叶、新根等部位提取 DNA.结果表明 ,用这两种方法均可从萱草的幼叶、成熟叶、新根中获得高分子量基因组 DNA和 AFL P指纹图谱 ,其中以幼叶的 DNA产量和品质最好 ,CTAB法提取的

猕猴桃雌雄性别的AFLP鉴别中DNA模板的制备

基因组DNA的成功制备和避免降解是AFLP成功的关键。描述了猕猴桃AFLP研究中的DNA模板制备方法，尤其是DNA的提取和纯化，以及基因组DNA的酶切中常见的问题及其相应的解决措施。应用这些方法得到了猕猴桃清晰的AFLP指纹图谱。

非洲菊SRAP标记的DNA模板制备及反应体系优化

为获得非洲菊清晰的SRAP标记图谱,对非洲菊DNA的提取方法及其SRAP-PCR反应体系的影响因子进行了初步探讨,建立了扩增多态性高、重复性好、带型清晰的DNA模板和SRAP-PCR反应体系.最佳SPAR-PCR反应体系:在50μL的反应总体系中,Mg2+2.0mmol/L,dNTPs0.3mmol/L,DNA模板100ng,DNA聚合酶2.0U,上游、下游引物各0.22mmol/L.扩增程序:在94℃预变性4min,反应前5个循环在94℃变性1min,35℃复性1min,72℃延伸1min的条件下运行,随后的30个循环复性温度提高到55℃,最后72℃延伸5min.

苹果基因组AFLP分析的DNA模板的制备及技术体系的建立

AFLP对模板的质量要求较高。在苹果上用常规的SDS法提取基因组DNA ,若加以适当纯化 ,也可以达到AFLP分析的要求。另外 ,在AFLP分析体系中 ,应注意选择性扩增模板的浓度 ,以及选用适当的引物组合 ,同时也应掌握好变性的条件。

一种简单快速的DNA模板制备方法

在以 PCR为基础的种子纯度鉴定和分子标记辅助选择育种中 ,DNA模板的制备常常成为主要的限速步骤 ,建立一种快速简便的微量 DNA模板制备方法有着十分重要的意义。本文介绍了一种以磨碎的水稻组织直接进行 PCR扩增的方法 ,该方法简单方便、稳定可靠 ,大大简化了 DNA模板制备过程 ,所制备的 DNA模板在 - 2 0℃保存 1个月后不影响

一种适用于昆虫痕量DNA模板制备的方法

近年来分子生物学技术在昆虫学各领域中得到了广泛地运用 ,从昆虫样品中有效地获得DNA模板是实验成功的前提。但是由于许多昆虫体形微小 ,许多研究需要取单个个体的样品 ,用传统的酚∶氯仿抽提法难以从痕量样品中获得总DNA ,而某些生物公司的试剂盒相对而言价格昂贵。该文介绍一种快速简便、广泛适用于不同种类昆虫。

转基因棉籽检测中DNA模板提取方法研究

在转基因棉籽的检测中 ,需要得到合适的DNA模板 ,以进行PCR扩增。应用CTAB1、CTAB2、KIT、KIT1、SDS等五种DNA模板提取方法提取转基因棉籽中的DNA模板 ,根据模板DNA的OD2 6 0 OD2 80 值、波长扫描、琼脂糖凝胶电泳、3个基因的PCR扩增结果 ,评价五种DNA模板提取方法的提取效果 ,发现以KIT1方法提取棉籽中DNA模板效果为好 ,可用于实际检测中。

樟脑胺氯乙酸铂对DNA模板的影响

本文报道樟脑胺氯乙酸铂(camphoramine chloroacetic platinum,CCP)对DNA模扳的影响。采用同位素、紫外光谱,粘度测定等技术,分析和讨论了CCP与DNA结合方式和对DNA二级结构的影响。结果表明,CCP可能以顺式双配位基形式与DNA发生共价结合,产生链内及链间交联,从而损伤了DNA模板,使DNA对碱及温度的敏感性增加,分子变短,粘度下降,最终抑制了DNA复制。

两栖动物酒精标本DNA模板的快速提取

本文以中国角蟾属 4个种的蝌蚪酒精固定标本为材料 ,取尾部肌肉组织 0 1g,滤纸吸干组织块表面的酒精 ,在研钵中用剪刀剪碎 ,液氮研磨成粉 (必要时可加少量石英砂 ) ,转入 1 5ml离心管 ,加入 1 0ml提取缓冲液( 0 5 %SDS ,10mmol/LTris HCl,10 0mmol/LEDTA ,pH 8 0 ) ,37℃温浴h ,5 0 0 0r/min离心 10min ,取上清转入另一 1 5ml离心管 ,氯仿 /异戊醇 ( 2 4:1)抽提两次 ,上清液加 2倍体积预冷 ( - 2 0℃ )的无水乙醇沉淀DNA ,12 0 0 0r/min离心 3min ,无菌条件下风干后 ,5 0 μlTE溶解 ,4℃保存备用。以通用引物PCR扩增 12SrRNA和 16SrRNA基因部分片段并测序。本文不采用蛋白酶K提取酒精保存标本的DNA模板 ,全部流程只需 3个小时 ,可同时提取数十个乃至数百个标本 ,并且所提取的DNA模板适合短片段PCR扩增。

基于DNA模板的核酸适体-金属纳米簇在环境检测中的研究进展

由于优异的光学性能、良好的生物相容性、低毒性和精确可控性等优势,基于DNA模板的金属纳米簇在生物传感、生物成像和疾病治疗等领域获得了广泛的研究与应用.核酸适体作为特异性识别探针,将其与DNA模板的金属纳米簇相结合,可获得生化传感平台的新型荧光探针.本文介绍DNA模板金属纳米簇,简要概述了核酸适体-金属纳米簇的设计与合成,最后重点介绍其在环境检测方面的应用及发展前景.

一种单个胚胎的DNA模板制备方法

建立了一种简单处理单个卵子和早期胚胎制备DNA模板的方法———KOH/DTT-Triton X裂解法,并与TE-蛋白酶K法比较了PCR扩增效率。结果表明:采用KOH/DTT-Triton X裂解法处理单个卵子或2-细胞胚、8-细胞胚、桑椹胚、囊胚后,作为DNA模板直接进行PCR扩增线粒体DNA片段,3对引物的PCR扩增总成功率为100%(70/70),而TE-蛋白酶K法处理的单个卵子的PCR扩增总成功率为92.9%(65/70),二者差异显著(P<0.05)。但两种方法所制备模板的PCR假阳性率均为0。实验设计的KOH/DTT-Triton X裂解法是一种有效的单个早期胚胎的DNA模板制备方法,经一次PCR扩增即能获得清晰的目的DNA条带,能够满足早期胚胎遗传物质检测的需要。

疟原虫DNA模板制备用于PCR诊断方法的研究

为确立一种快速、敏感、特异的疟原虫检测方法，根据红内期疟原虫ＳＳＵｒＲＮＡ基因序列，设计合成引物３条，采用微量全血和滤纸干血滴标本快速制备疟原虫ＤＮＡ模板的９种方法，进行聚合酶链反应（ＰＣＲ）并比较。结果显示有５种方法的实验效果最佳，其中，全血ＰＣＲ仪预热及滤纸干血滴Ｃｈｅｌｅｘ煮沸两法操作简单、所需试剂较少。采用该两法对深圳地区２０２份和湖北地区１６份镜检阳性的全血和深圳地区１２９份滤纸干血滴标本进行检测，结果与镜检的符合率分别为９８．５％和９９．２％。表明本研究筛选出的两种方法制备ＤＮＡ模板的ＰＣＲ检测体系，适用于临床快速准确诊断间日疟、恶性疟或两者混合感染，尤其适用于流行病学调查，值得推广。

DNA模板指导的有机合成

DNA模板指导的有机合成反应具有序列特异性特点。本文综述了模板DNA指导的多种类型的有机合成反应,包括还原胺化、亲核取代、Henry、Wittig烯化、光化学连接以及多步小分子的合成等反应;介绍了DNA指导的组合库的合成反应;总结了DNA模板结构对反应的影响以及反应中立体选择性的问题。

水稻干燥组织DNA模板的快速制备

用碱处理水稻干燥组织,浸出液直接用作PCR扩增的模板,扩增结果稳定、准确,与CTAB法和SDS法提取的DNA扩增效果相比没有显著差异。用此法提取水稻自然干燥的叶片、叶鞘、茎杆、颖壳和根DNA,质量良好,能够满足SSR分析要求。

东北黑熊不同基因组DNA模板来源的比较研究

文章主要探讨使用黑熊毛发作为试验材料替代其他生物样品进行遗传多样性研究的可行性,筛选满足试验需求的最佳使用量。以延边白头山制药有限公司养熊场的4头成年东北黑熊为试验材料,分别5次拾取2头黑熊铁笼内散落的带有毛囊的50、100根毛发,对麻醉的2头黑熊抽取全血3 mL以及皮下结缔组织1 g,并分别采用不同方法提取基因组DNA。以微卫星位点ABB12和UT35为引物,设置20、50、100 ng·μL-13种模板浓度进行PCR扩增。结果显示,采用50 ng·μL-1的模板浓度均可获得较好的PCR产物,采用聚丙烯酰胺凝胶电泳对扩增基因具有较好的分辨效果。毛发DNA、血液DNA和组织DNA的PCR产物数量和质量并无明显差异。毛发数量与所提取的DNA浓度有一定关系。利用15个毛发DNA的PCR产物进行聚丙烯酰胺凝胶电泳,均可观察到清晰的条带。研究结果进一步证明毛发DNA可作为东北黑熊遗传多样性研究的试验材料。

猪不同基因组DNA模板来源和浓度与微卫星位点扩增效果的比较研究

[目的]探讨全部使用猪毛发作为试验材料进行遗传多样性研究的可行性。[方法]以贵州黔北黑猪中的3头成年母猪为试材,分别拔取100、200根毛发和抽取5 ml全血进行DNA提取。以微卫星引物S0225和S0227为引物,设置1.0、2.5、5.0 ng/μl 3种模板浓度进行PCR扩增。[结果]采用2.5、5.0 ng/μl的模板浓度均可获得较好的PCR产物,用于聚丙烯酰胺凝胶电泳对扩增基因有较好的分辨效果。毛发DNA和血样DNA的PCR产物数量和质量均无明显差异。毛发数量与所提取DNA的浓度无直接关系。利用21个全毛样PCR产物进行变性聚丙烯酰胺凝胶电泳,均可观察到清晰的条带。[结论]该研究进一步证明全毛样DNA可作为猪遗传多样性研究的材料。

一种快速制备酵母细胞PCR扩增DNA模板的方法

报道了一种快速制备酵母细胞PCR扩增DNA模板的方法。以酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)为目标菌,对酵母细胞煮沸-低温冷冻预处理后,直接用于PCR扩增,获得了26S rDNAD1/D2区域序列片段,成功测序。此方法避免了复杂的DNA提取过程。