聚ADP-核糖聚合酶-1在喉鳞状细胞癌细胞DNA氧化损伤及凋亡中的作用

目的探究聚ADP-核糖聚合酶-1(PARP1)在喉鳞状细胞癌(LSCC)中的表达及其对LSCC细胞DNA氧化损伤与凋亡的影响。方法收集40例患者的LSCC组织及癌旁组织样本,采用免疫组化染色和qRT-PCR检测LSCC组织与癌旁组织中PARP1的表达。采用不同浓度Menadione诱导LSCC细胞系Hep-2,MTT法检测不同浓度诱导下细胞增殖抑制率。将Hep-2细胞随机分为对照组(正常培养)、Men组(20μmol/L Menadione处理)、Men+PARP1抑制剂组(20μmol/L Menadione+10μmol/L PARP1抑制剂Olaparib共处理)。MTT法计算各组细胞增殖抑制率;流式细胞术检测各组细胞内活性氧(ROS)水平;细胞免疫荧光染色观察各组细胞DNA损伤标记分子γ-H2AX焦点生成情况;Western blot测定各组细胞γ-H2AX、DNA-PKcs、BRCA1、LIG4、Caspase-3及Caspase-9蛋白表达;Hoechst33258染色观察各组细胞凋亡情况。结果LSCC组织中PARP1阳性表达率及PARP1 mRNA表达均明显高于癌旁组织(P<0.01)。Hep-2细胞经不同浓度Menadione诱导后,细胞增殖抑制率均升高(P<0.05)。与对照组比较,Men组和Men+PARP1抑制剂组的细胞增殖抑制率升高,细胞ROS水平升高,γ-H2AX焦点形成明显增加,γ-H2AX蛋白表达上调,DNA-PKcs、BRCA1、LIG4蛋白表达均下调,细胞出现浓缩、碎裂的蓝色凋亡体,Caspase-3和Caspase-9蛋白表达上调,差异均有统计学意义(P<0.05),且Men+PARP1抑制剂组以上变化较Men组更明显(P<0.05)。结论PARP1在LSCC组织中高表达,抑制其表达能够进一步加重Menadione诱导的Hep-2细胞DNA氧化损伤,并促进细胞凋亡。

姜黄素在抑制紫外线B诱导的人视网膜色素上皮细胞DNA氧化损伤和凋亡中的作用

目的 探讨姜黄素在紫外线B(UVB)诱导的人视网膜色素上皮(RPE)细胞DNA氧化损伤和凋亡中的作用机制。方法 将人视网膜色素上皮细胞株(ARPE-19)随机分为空白对照组、二甲基亚砜(DMSO)组、姜黄素组、UVB照射组、UVB+DMSO组和UVB+姜黄素组。CCK-8实验检测姜黄素对UVB照射前后ARPE-19细胞活力的影响;免疫荧光检测DNA氧化损伤标志蛋白磷酸化组蛋白H2AX(γH2AX)的定位;Western blot检测γH2AX、凋亡相关蛋白[B淋巴细胞瘤-2基因(BCL-2)和BCL-2相关X蛋白(BAX)]的表达变化;使用X-rosamine衍生物(Mito-Tracker Red CMXRos)和异硫氰酸荧光素(FITC)标记的钙离子依赖的磷脂结核蛋白Annexin V(Annexin V-FITC)来检测UVB诱导的ARPE-19细胞线粒体膜电位变化和细胞凋亡情况。结果 与空白对照组相比,DMSO组DMSO处理24 h后的ARPE-19细胞活力无明显改变(P>0.05)。与DMSO组相比,姜黄素组采用15μmol·L^(-1)姜黄素处理24 h后ARPE-19细胞活力轻度升高(P<0.05),表明15μmol·L^(-1)姜黄素对ARPE-19细胞无毒性作用,后续实验采用该浓度处理细胞。与空白对照组相比,UVB照射组ARPE-19细胞活力降低,γH2AX和BAX蛋白表达水平升高,BCL-2蛋白表达水平降低,线粒体膜电位降低,细胞凋亡增加(均为P<0.05)。与UVB照射组相比,UVB+DMSO组ARPE-19细胞活力,γH2AX、BAX以及BCL-2蛋白表达水平均无明显变化(均为P>0.05),线粒体膜电位和细胞凋亡均无明显改变(均为P>0.05)。与UVB+DMSO组相比,UVB+姜黄素组ARPE-19细胞活力升高,γH2AX和BAX蛋白表达水平降低,BCL-2蛋白表达水平升高,线粒体膜电位升高,细胞凋亡减少(均为P<0.05)。结论 姜黄素能减轻UVB诱导的RPE细胞DNA氧化损伤和凋亡,有望为姜黄素在年龄相关性黄斑变性中的作用机制研究提供新的思路。

自由基与DNA氧化损伤的研究进展

自由基与DNA氧化损伤关系密切 ,自由基可引发DNA的碱基损伤 ,链断裂等损伤

辐射诱发细胞内活性氧增高与DNA氧化损伤研究

用60 Coγ射线照射人支气管上皮细胞 (BEP2D)。细胞内过氧化氢 (H2 O2 )和超氧阴离子(O2 · - )分别用分子探针 2’ ,7’ -二氯荧光黄双乙酸盐 (DCFH -DA)和氢化乙锭 (HE)进行标记 ,并通过流式细胞仪测定荧光产物 2’ ,7’ -二氯荧光黄 (DCF)和溴乙锭 (EB)荧光强度进行相对定量分析。DNA氧化损伤产物 8-羟基脱氧鸟嘌呤 (OH8dG)含量用高压液相色谱结合电化学方法 (HPLC-ECD)测定。结果表明 ,60Coγ射线诱发BEP2D细胞内活性氧 (ROS)水平和OH8dG含量均显著增高 ,并有良好的剂量效应关系。进一步分析显示 ,60 Coγ射线照射诱发BEP2D细胞内ROS增高与DNA氧化损伤产物OH8dG含量呈明显正相关 。

环境砷中毒人群皮肤损害与DNA氧化损伤的关联性

选择内蒙古自治区某县长期暴露于高砷饮用水的人群中有皮肤损害者199人(病例组)和无皮肤损害者91人(对照组)作为研究对象,检测饮用水砷、尿砷和DNA氧化损伤的主要标志物8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)水平,以分析慢性砷中毒人群DNA氧化损伤与皮肤损害的相关性.结果表明,砷性皮肤损害组和无皮肤损害组人群尿中8-OHdG水平的中位数(四分位间距)分别为4.9(3.5～6.3)μg/g和5.3(4.1～7.2)μg/g,2组对象尿中8-OHdG水平间差异无统计学意义(P=0.074);多元Logistic回归分析结果显示,在校正了年龄、体质指数(BMI)、吸烟、饮酒和饮用高砷水时间等可能的混杂因素后,皮肤损害组人群尿中8-OHdG水平升高的比值比(OR)为1.1(95%CI:0.6,1.9),提示在砷暴露人群中,有无皮肤损害与8-OHdG水平的差异无统计学意义(P=0.863).慢性砷中毒人群皮肤损害与体内的DNA氧化损伤之间无显著的关联性,无皮肤损害人群同样有DNA氧化损伤的风险.

芡实多糖的提取、抗氧化活性及对质粒DNA氧化损伤防护作用的研究

采用纤维素酶超声辅助法提取芡实多糖,由正交实验获得芡实多糖的最佳提取条件,并探究其体外抗氧化活性及对H2O2光解反应诱导质粒p BR322 DNA损伤的保护作用。结果表明芡实多糖的最佳提取条件为:料液比1∶20(g/m L)、p H3、纤维素酶用量为原料质量的2.0%、超声时间5min、提取时间3h、提取温度40℃,多糖得率为17.04%。芡实多糖清除DPPH·、羟基自由基的能力较好,IC50分别为1.78、6.96mg/m L,清除过氧化氢、超氧阴离子自由基的能力较弱,浓度为10mg/m L时,清除率分别为48.00%、20.32%。芡实多糖对抑制DNA损伤具有显著作用,在多糖水溶液质量浓度为0.08mg/m L时,具有最佳保护作用;在质量浓度大于1.0mg/m L时,对质粒DNA没有保护作用,甚至促进了DNA的损伤。综上所述,芡实多糖具有抗氧化及抑制DNA氧化损伤的能力。

黄蜀葵花黄酮抗氧化性及对DNA氧化损伤的保护作用

采用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇对黄蜀葵花乙醇提取物进行分级萃取,得到石油醚相、乙酸乙酯相、正丁醇相和水相4个不同极性成分。采用DPPH·清除、·OH清除和H_2O_2清除试验考察了其抗氧化活性,研究了正丁醇相对·OH和H_2O_2诱导DNA氧化损伤的保护作用,并利用HPLC—MS对正丁醇中黄酮类物质进行了鉴定。结果表明:黄蜀葵花黄酮主要富集于乙酸乙酯相和正丁醇相;乙酸乙酯相对DPPH·的清除能力最好,IC_(50)值为0.038 6 mg/mL,而正丁醇相对·OH和H_2O_2的清除能力较好,IC_(50)值分别为0.225 0,0.575 7mg/mL;正丁醇相对·OH和H_2O_2诱导的DNA氧化损伤都有保护作用;正丁醇相中含有11种黄酮类化合物。

几种天然抗氧化剂对DNA氧化损伤的保护作用

The ability of several nature antioxdants to protect free radical initiator AAPH induced oxidative DNA damage was assessed by measuring the conversion supercoiled pBR322 plasma DNA to the open circular and linear forms.It was found that six nature antioxidants could significantly inhibit the oxidative DNA damage induced by AAPH and their abilities ranked one by one in order as rutin,quercetin and vanillin,ursolic acid,curcumim,oleanolic acid.

骨髓造血细胞DNA氧化损伤与骨细胞凋亡在早期激素性股骨头坏死中的表现

背景:激素导致股骨头缺血坏死是一个复杂的生物学过程,其发病机制仍不清楚,探明其病因学机制,仍然是该领域研究的重点。目的:观察骨髓造血细胞DNA氧化损伤与骨细胞凋亡在早期激素性股骨头缺血坏死中的病理改变。方法:4月龄日本大耳白兔40只,随机数字表法分为4组,每组10只。其中3组兔分别给予激素联合内毒素、单纯激素、单纯内毒素处理,另1组做空白对照。分别于最后一次给药后第2,4周处死实验动物,每次每组5只。光镜下计数各组兔股骨头空缺骨陷窝、电镜观察骨细胞形态变化、TUNEL法检测骨细胞凋亡、免疫组织化学法检测骨髓造血细胞DNA氧化损伤。结果与结论:与其他3组比较,激素联合内毒素组第2,4周空缺骨陷窝率、骨髓造血细胞DNA氧化损伤率及第4周骨细胞凋亡率均显著增高(P<0.01);其他3组之间空缺骨陷窝率、骨髓造血细胞DNA氧化损伤率及骨细胞凋亡率各指标比较差异无显著性意义。激素联合内毒素组空缺骨陷窝率与细胞凋亡率呈正相关(r=0.793)。结果提示在激素性股骨头缺血坏死早期,骨髓造血细胞DNA氧化损伤与骨细胞凋亡参与了激素性股骨头缺血坏死的病理变化过程,前者先于后者发生,骨细胞的死亡方式为凋亡。

过氧化氢诱导肠上皮干细胞DNA氧化损伤模型的建立

目的：探索建立过氧化氢诱导肠上皮细胞DNA氧化损伤模型，以便在体外进一步研究DNA氧化损伤在大肠癌发生发展中的作用。方法：过氧化氢以RPM11640培养基稀释成100、50、10、5、μmol／L5个浓度，以RPMI1640培养荆作空白对照。作用人胎肠上皮干细胞不同时间（10min、30min、1h、1．5h、12h、24h）后，以MTT法检测细胞生存状况，以免疫组织化学方法检测DNA特异性氧化损伤产物8-羟-2-脱氧鸟苷（8-OhdG），用SPSS10．0软件以线性回归方法检验肠上皮干细胞在不同时间的生存率变化趋势。结果：MTT活性检测结果表明，在10～30min时，各浓度过氧化氢作用后的细胞活性较高，为60％～80％，但随时间推移，细胞活性下降，至24h，降至30％左右，时间趋势检验表明，除100、50μmol／L过氧化氢组和空白对照组外，其余各组的生存率随过氧化氢作用时间的延长，生存率下降，时间趋势差异具统计学意义。过氧化氢作用时间在10～30min内，100、50μmol／L组的细胞活性明显低于1～10μmol／L组20％左右，但在1．0h以上各组，虽然过氧化氢浓度不同，但在同一作用时间内细胞活性无明显差别。过氧化氢处理肠上皮细胞15min后进行8-OhdG免疫组织化学检测，结果除对照组阴性外，其余各组肠上皮细胞在不同浓度过氧化氢作用后的胞核及胞浆染色均呈棕褐色，为阳性。结论：过氧化氢能诱导肠上皮细胞发生DNA氧化损伤，肠上皮细胞DNA氧化损伤模型的条件以1～10μmol／L过氧化氢作用10～30min为宜。

壮阳填精中药联合左旋肉碱治疗特发性弱精子症疗效及对精液质量、DNA氧化损伤指标的影响

目的观察壮阳填精中药联合左旋肉碱治疗特发性弱精子症疗效及对精液质量、DNA氧化损伤指标的影响。方法将120例特发性弱精子症患者随机分为2组,对照组60例给予左旋肉碱治疗,观察组60例在此基础上加用壮阳填精中药治疗,观察2组治疗前后中医证候积分、精液量、精子密度、精子活动率、精子直线运动速度、a+b级精子比例、精浆活性氧(ROS)及精子DNA氧化产物8-羟基脱氧鸟苷(8-OHd G)水平变化情况,统计2组近期疗效和不良反应发生情况。结果 2组治疗后精子活力低下、腰膝酸软、性欲减退、畏寒肢冷、舌质淡苔白及脉沉或细积分均显著低于治疗前(P均<0.05),且观察组治疗后各项积分改善情况均显著优于对照组(P均<0.05);2组治疗后精液量、精子密度、精子活动率、精子直线运动速度、a+b级精子比例均显著提高(P均<0.05),ROS和8-OHd G水平均显著降低(P均<0.05),且观察组治疗后各项指标改善情况均显著优于对照组(P均<0.05);观察组近期治疗总有效率显著高于对照组(P<0.05);2组不良反应发生率比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论壮阳填精中药联合左旋肉碱治疗特发性弱精子症可有效减轻临床症状体征,增加精液量,提高精子活力,下调ROS和8-OHd G水平,并未加重药物不良反应。

肉类烧烤等烹调师DNA氧化损伤监测研究

目的 研究不同种类烹调操作厨师外周血淋巴细胞DNA氧化损伤的作用。 方法 采用高效液相色谱系统结合电化学测定分析法对不同种类烹调操作厨师外周血淋巴细胞DNA中 8-OHdG的含量进行分析。 结果 ①外周血淋巴细胞DNA中的 8-OHdG水平显示 ,肉类烧烤师和煎炸烹调师分别为 ( 2 3 7± 10 3 )和 ( 19 2± 8 5 ) ,明显高于其他粤菜师的 ( 12 6± 5 2 ) (P <0 0 5 ) ;而其他粤菜师与一般服务员的 ( 11 5± 3 6)无显著差异 (P >0 0 5 ) ;②肉类烧烤师外周血淋巴细胞DNA中的 8-OHdG水平与其工龄有关 :③同岗位厨师DNA氧化损伤的效应个体差异较大。 结论 肉类烧烤师和煎炸烹调师的DNA氧化损伤水平高于一般人群 。

淋巴细胞内DNA氧化损伤与Alzheimer病的关系

目的 评价淋巴细胞内 DNA氧化损伤与 Alzheimer病 (AD)的关系。方法 应用高效液相色谱法(HPL C)对 AD患者和健康老年人的淋巴细胞内的 8-羟基脱氧鸟苷 (8-OH-d G)基础含量进行了测定 ,并对部分受试者氧化应激反应前后的 8-OH-d G进行了对照研究。结果 AD患者淋巴细胞内 8-OH-d G的平均基础含量较对照组显著增高 (86.4± 12 .9fm ol/μg DNA / 58.7± 10 .2 fmol/μg DNA,P<0 .0 1) ,急性氧化应激反应后淋巴细胞内的 8-OH-d G含量的改变在两组间无显著差异。结论 AD不仅在脑内而且在外周的细胞 ,均可受氧化应激的影响 ;氧化应激可能参与了

茶籽多糖抗氧化性及其对DNA氧化损伤的保护作用

采用水提醇沉法从油茶籽中提取多糖,研究了茶籽多糖的单糖及氨基酸组成,并探究了茶籽多糖体外抗氧化性能及其对DNA氧化损伤的保护作用。结果显示,茶籽多糖主要由葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖3种单糖组成;并且含有谷氨酸、精氨酸、天冬氨酸等17种氨基酸。抗氧化实验表明,茶籽多糖对羟基自由基、过氧化氢、DPPH自由基具有一定的清除能力,其IC50值分别为5.47、4.03、0.54 mg/m L。荧光光度法、紫外分光光度法的研究,表明了茶籽多糖对·OH和H_2O_2引起的DNA氧化损伤具有不同程度的保护作用。

荧光光谱法分析花茶对羟自由基(·OH)诱导的DNA氧化损伤的保护作用

采用荧光光谱扫描法定性定量研究了6种花茶对羟自由基(·OH)诱导的DNA氧化损伤的保护作用.结果表明:桂花茶、复合花茶、绿茶和芍药花茶的保护作用要优于红玫瑰花茶和金莲花茶,且各花茶的保护作用在0～1 mg/mL范围内均随质量浓度的增加而增强.该方法的稳定性和重复性都较好.

甲醛对人Ⅱ型肺泡上皮细胞DNA氧化和甲基化水平的影响

目的：分析甲醛染毒对体外培养的人Ⅱ型肺泡上皮细胞（A549）内8-羟基鸟嘌呤脱氧核苷（8-oxo-dG）水平、DNA 5-甲基胞嘧啶（5-mC）含量的影响及其时间-效应和剂量-效应关系，探讨甲醛所致的细胞DNA氧化与DNA甲基化的关联性。方法：用5～20μmol/L甲醛作用于A549细胞，用高压液相色谱串联电化学检测技术分析细胞DNA 8-oxo-dG水平，用免疫荧光和高效毛细管电泳法检测细胞全基因组DNA 5-mC含量改变。结果：甲醛染毒提高了细胞8-oxo-dG水平，但是降低了细胞的DNA 5-mC含量。甲醛致细胞DNA氧化与DNA甲基化呈现不同特点，A549细胞暴露于20μmol/L甲醛后，DNA氧化水平在1周甚至更早时间就已显著增高，而相同条件下DNA甲基化水平的改变需要6周以上的时间，DNA甲基化的改变滞后于DNA氧化。A549细胞经5～20μmol/L甲醛染毒8周后，DNA氧化水平与甲醛剂量呈正相关关系，而同样条件下DNA甲基化水平与甲醛剂量呈负相关关系。结论：甲醛染毒可提高DNA氧化水平，降低细胞DNA甲基化水平。在甲醛的毒作用效应中，细胞DNA氧化损伤可能是早于其DNA甲基化的一个重要分子事件。

α-硫辛酸对H_2O_2诱导的细胞活性氧水平及DNA氧化损伤的影响

[目的]探讨a-硫辛酸(a-lipoic acid,LA)对外源性促氧化剂H2O2诱导中国仓鼠肺细胞(Chinese hamster lung cells,CHL)的活性氧(Reactive oxygen species,ROS)水平以及DNA氧化损伤的影响。[方法]①胞质内活性氧检测:用H2O2作外源性促氧化剂诱导细胞活性氧升高,以2’,7’-二氯荧光素二乙酸酯(2’,7’-dichlorofluorescin- diacetate,DCFH-DA)作为荧光信号标记物捕获胞质内活性氧,设置两种反应体系:体系Ⅰ为H2O2+LA,作用20min;体系Ⅱ为Fe2++LA,分别作用2、4、8h;借助流式细胞仪检测荧光信号强度。②单细胞凝胶电泳(Single cell gel electrophoresis, SCGE):用H2O2染毒细胞,诱发DNA氧化损伤,同时在反应体系中加入不同浓度LA反应2h,单细胞凝胶电泳分析DNA氧化损伤情况。[结果]ROS:①反应体系Ⅰ:H2O2引发细胞内活性氧骤升,但LA使活性氧水平剂量依赖性降低。②反应体系Ⅱ:Fe2+诱导胞质内活性氧升高,LA能抑制活性氧,降低荧光信号强度。100μmol／L Fe2+诱导细胞活性氧升高,并随时间增加而增强;LA能降低并持续抑制100pmol／I．Fe2-’诱导的活性氧升高,但未表现出明显的浓度依赖性。SCGE: H2O2造成细胞DNA断裂损伤,彗星率、彗星尾长、尾部DNA含量、olive尾矩等指标值均升高;加入LA后使上述各指标值剂量依赖性下降。[结论]LA能清除活性氧,抑制Fe2+诱导的活性氧升高,表现出剂量-反应关系和时间-效应关系;可能的机制为直接清除活性氧、阻断Fe2+介导的Fenton反应。LA发挥抗氧化作用,剂量依赖性降低H2O2诱导的DNA氧化损伤。

几种植物化学物粗提物体外抗DNA氧化损伤功能的检测

近年来，植物化学物功能开发备受关注，其粗提物有效生理功能快速筛选方法成为制约保健食品开发速度的一个重要因素。以CuSO4-Phen—Vc—H2O2-DNA化学发光体系为基本检测手段，调整检测条件，分别对竹叶提取物、黑加仑提取物、葡萄籽提取物进行了体外抗DNA氧化损伤功能的筛选。结果提示葡萄籽提取物具有良好的抗DNA氧化损伤功能，在5～25mg／L呈现剂量效应关系（r=0．97，P〈0．01）。竹叶提取物在400mg／L表现为一定的抗DNA氧化损伤功能，但其仅表现为延缓自由基的生成，并不能阻止DNA的氧化损伤，而黑加仑提取物则表现为促进DNA氧化损伤。由此可见CuSO4-Phen—Vc—H2O2-DNA化学发光体系可以作为植物化学物，甚至粗提物抗DNA氧化损伤功能检测的一个快速、经济、有效的方法。葡萄籽提取物可作为良好的保健食品资源，竹叶提取物则需慎重，黑加仑提取物不能作为保健食品资源直接利用。

吸烟诱发人血淋巴细胞DNA氧化损伤的研究

目的 :研究吸烟对人血淋巴细胞DNA氧化损伤的作用。方法 :采用高效液相色谱系统结合电化学测定分析法对吸烟和不吸烟的男性健康人外周血淋巴细胞DNA中氧化损伤的生物标志物— 8 羟基 2 脱氧鸟苷 (8 OHdG)的含量进行分析。 结果 :①吸烟者比不吸烟者淋巴细胞DNA中的 8 OHdG显著增高 (P <0 .0 5 ) ,且 8 OHdG的含量与每天吸烟支数呈正相关 ;②吸烟对DNA氧化损伤的效应个体差异较大 ,本测定方法可用于对吸烟高敏感人群的筛选。 结论

2型糖尿病下肢血管病变与DNA氧化损伤的关系

目的探讨2型糖尿病合并下肢血管病变与机体DNA氧化损伤的关系。方法纳入门诊85例糖化血红蛋白<9%的2型糖尿病病人作为研究组,按照踝肱比(ABI)水平将上述病人分为糖尿病合并下肢血管病变组(n=35)及无并发症组(n=50);同时取60例正常人群作为正常对照组。使用ELISA方法测定血液单核细胞DNA氧化损伤指标8羟基脱氧鸟嘌呤(8-OHdG)水平,并在3组间进行比较,同时采用Logistic回归分析糖尿病合并下肢血管病变的危险因素。结果糖尿病合并下肢血管病变组与无并发症组间年龄、病程、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、糖化血红蛋白等指标差异无统计学意义(P>0.05)。糖尿病合并下肢血管病变组血液8-OHd G水平为(4.03±1.89)ng/ml,无并发症组血液8-OHd G水平为(2.74±1.64)ng/ml,均较正常对照组[(0.53±0.53)ng/ml]升高(P<0.05),且糖尿病合并下肢血管病变组较无并发症组亦升高(P<0.05)。Logistic回归分析显示,8-OHd G以及LDL-C是糖尿病合并下肢血管病变的危险因素。结论 2型糖尿病合并下肢血管病变病人体内DNA氧化损伤较正常人及无并发症糖尿病病人严重,提示DNA氧化损伤在糖尿病下肢血管病变中发挥了一定程度的致病作用。