DNA永生化链和肿瘤干细胞关系的初步研究

目的:探讨DNA永生化链的分配方式与肿瘤干细胞之间的关系.方法:采用启动和促进两阶段化学诱癌方法在小鼠背部诱导皮肤肿瘤;用溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)掺入法检测DNA永生化链在发育期、成年期小鼠皮肤成体干细胞及皮肤肿瘤干细胞中的滞留时间;图像分析DNA含量方法检测肿瘤细胞倍体变化.结果:诱癌4mo后,40只小鼠中有17只背部分别长出1～3个皮肤肿瘤.BrdU阳性细胞变化情况检测显示,24h后发育期、成年期标记的小鼠皮肤上皮细胞和肿瘤组织的细胞均为阳性,阳性部位为细胞核;60d后发育期标记的小鼠皮肤上皮中仍有少数细胞为阳性,它们主要存在于毛囊的隆突部位(bulge),少数位于皮肤基底层.标记后30d检测成年期标记的小鼠皮肤上皮细胞,结果均为阴性.标记后30d检测肿瘤组织发现仍有少数细胞BrdU阳性,这些肿瘤细胞主要分布在肿瘤实质组织和间质组织的交界部位;标记后60d检测,肿瘤组织中不再有BrdU阳性细胞.图像分析DNA含量方法发现上述17例小鼠肿瘤都是非整倍体核型.结论:小鼠皮肤成体干细胞存在DNA永生化链,其在有丝分裂过程中发生非随机分配,肿瘤干细胞中可能存在DNA永生化链,其分配方式趋向随机分配.

细胞永生化与细胞癌变之间关系的研究进展

背景:永生化细胞和肿瘤细胞在基因表达水平、蛋白水平及表型水平等方面存在诸多区别和联系,目前对两种细胞之间关系的认识仍存在争议。目的:分析永生化细胞与肿瘤细胞之间的关系,总结肿瘤细胞生成有关理论的研究进展和前景。方法:应用计算机检索PubMed数据库和SpringerLink数据库(2001-01/2010-01),以"cellular immortality,cancer mechanism"为检索词。应用计算机检索中国知网数据库(2001-01/2010-01),以"细胞永生化、癌变机制"为检索词。结果与结论:共收集95篇文献,中文35篇,英文60篇。排除发表时间较早、重复及类似研究,最终应用文献41篇。永生化细胞不是肿瘤细胞,普遍认为细胞永生化是细胞癌变过程中的必经阶段,若是如此,肿瘤细胞应易于培养。而实际上肿瘤细胞初代培养时非常困难,因此有的学者就二者之间的关系提出质疑。目前有关肿瘤细胞生成的理论存在非整倍体假说、DNA永生化链假说、肿瘤干细胞假说等。对二者之间关系的进一步研究,有利于永生化细胞的应用及肿瘤的治疗。

小鼠骨髓瘤中肿瘤干细胞的初步分析

探讨小鼠骨髓瘤(SP2/0细胞)中肿瘤干细胞存在与否。以克隆形成试验检测SP2/0细胞中具有形成克隆能力细胞的大体比例;采用BrdU标记滞留试验检测SP2/0细胞中含有DNA永生化链的细胞,即具有干细胞特性的细胞;检测SP2/0细胞中具有干细胞特性的SP细胞存在情况及其比例。结果显示,SP2/0细胞中有一部分细胞具有形成克隆的能力;SP2/0细胞中含有DNA永生化链的细胞;SP2/0细胞中存在SP细胞,其比例约为0.7%。而且SP2/0细胞中存在肿瘤干细胞。

小鼠皮肤干细胞染色体非随机分配方式的研究

目的:以小鼠皮肤干细胞为研究对象,对无论干细胞分裂多少次的一组DNA“永生化”链,能持续存在于干细胞基因组中的这一假说进行验证。方法:利用溴脱氧尿嘧啶核苷(B rdU)掺入法,检测发育期和成年期标记的小鼠皮肤B rdU阳性细胞存在情况。结果:免疫组化结果表明,B rdU标记停止后24 h,发育期和成年期标记的小鼠皮肤上皮细胞均为阳性,阳性部位为细胞核,7天后仍为阳性。90天后发育期小鼠皮肤上皮细胞中仍有少数阳性细胞,它们主要存在于毛囊的隆突部位,另有少数阳性细胞散落在基底层。但成年期小鼠30天后皮肤B rdU阳性上皮细胞已全部转为阴性。结论:本实验结果证实,小鼠皮肤干细胞中存在DNA永生化链,其染色体发生了非随机分配。