低温保存对绵羊精子DNA链完整性的影响

为了探讨低温保存对绵羊精子DNA链完整性的影响,采用原位缺口末端标记(TUNEL)法对小尾寒羊新鲜和低温保存精子的DNA链完整性进行检测。结果表明:经24 h、48 h、72 h、96 h处理的低温保存绵羊精液的DNA链断裂精子百分率分别为(0.017 2±0.006 2),(0.028 0±0.0142),(0.037 3±0.017 0),(0.037 1±0.008 8)。与新鲜精液相比,低温保存的精液中DNA链断裂精子百分率虽然略有增加但无统计学差异,表明低温保存对绵羊精子DNA链的完整性没有显著性损伤。

四种检测细胞凋亡方法的比较

目的评价四种检测细胞凋亡的方法。方法以蟾蜍素 (bufalin)诱导的白血病细胞株 HL 6 0细胞凋亡 ,选择流式细胞术 (FCM)、原位缺口末端标记法 (TU NEL )、DNA电泳和电镜 (EM)技术对比检测细胞凋亡。结果定性的 EM和 DNA电泳技术可靠 ,而 TUNEL和 FCM主要用于定量检测。结论 EM、TU NEL和

老龄大鼠局灶性脑缺血周围区DNA损伤的研究

目的 探讨老龄大鼠局灶性脑缺血周围DNA损伤特点。方法 应用HE染色、原位末端标记法 (TUNEL)标记、原位分子杂交、免疫组织化学等方法 ,分别对缺血 4、2 4h和 5d组大鼠脑组织中坏死细胞、凋亡细胞、p5 3mR NA、p5 3蛋白阳性细胞密度及空间分布进行观察和比较。结果 不同时间点病灶周围每高倍视野TUNEL、p5 3蛋白、p5 3mRNA的阳性细胞数分别为 4h :8.0± 1.5、2 5 .1± 2 .6、10 .3± 1.9;2 4h :2 0 .5± 2 .4、6 0 .0± 4.8、2 2 .0± 1.8;5d :2 .1± 0 .4、3.6± 1.4、3.5± 0 .8。p5 3基因主要在形态完整和可逆性损伤细胞中表达、分布范围较TUNEL细胞广泛。结论 局灶性脑缺血后 ,缺血周围DNA损伤区大于凋亡区 ,p5 3基因表达范围可能代表病理意义上的半暗带 ;p5

苦瓜蛋白对柯萨奇B3病毒性心肌炎小鼠半胱天冬酶3活性及凋亡的抑制作用

为研究苦瓜蛋白对凋亡的关键酶半胱天冬酶 3及凋亡的调节作用 ,用已经建立起来的方法从苦瓜果肉中提取苦瓜蛋白。将BALB/C小鼠分为 4组 :病毒对照组、正常对照组、药物对照组和药物治疗组 ,分别在第 0天、第 3天、第 7天和第 14天各处死 5只小鼠 ,第 2 1天全部处死动物 ,心肌组织半胱天冬酶 3活性测定按照CAL BIOCHEM公司的试剂说明书进行 ,并稍加改正 ,凋亡鉴定按照Oncogene公司的TdT DNA裂解片断末端原位标记试剂说明书进行。结果发现 ,①病毒对照组第 7天开始出现半胱天冬酶 3活性 (0 .6 3± 0 .2 1pmol/min ,n =5 ) ,第 14天的活性 (10 .9± 1.5pmol/min ,n =5 )显著高于第 7天 ,第 2 1天的活性 (12 .6± 1.3pmol/min ,n =5 )又高于第 14天。②药物治疗组 ,只有一个第 2 1天的标本有半胱天冬酶 3活性 (0 .4 1pmol/min) ,其它两组均未检测到此酶的活性。③DNA裂解片断末端原位标记法发现 ,病毒对照组在第 7天心肌中有少数细胞凋亡 ,第 14天、第 2 1天凋亡细胞明显增多 ,在非病变区域可发现单个凋亡的心肌细胞。治疗组未发现凋亡细胞 ,其它两组也未发现凋亡细胞。结果提示 ,CVB3病毒性心肌炎中发现有明显的凋亡现象 ,凋亡和半胱天冬酶 3发现于第 7天 ,且随着时间增加而逐渐加重(增强 ) ;苦瓜蛋白可显?

坐骨神经切断后脊髓神经细胞的凋亡变化

目的:研究一侧坐骨神经切断后,脊髓第7腰段的神经细胞的凋亡变化。方法:用DNA原位末端标记法。结果:在坐骨神经切断1d后脊髓后角内的神经胶质细胞开始出现凋亡,到第2天达到最大值,白质内的胶质细胞也发生凋亡;脊髓灰质后角感觉神经元的凋亡指数大于前角运动神经元的凋亡指数。结论:坐骨神经切断后的第1天脊髓神经细胞发生凋亡,传入神经元的凋亡大于传出神经元的凋亡,神经胶质细胞在细胞凋亡过程中发挥重要作用。

肠缺血灌流时异丙酚对肠上皮细胞凋亡的影响

目的:研究缺血再灌流时异丙酚对肠上皮细胞凋亡的影响及可能机制.方法:96只成年♂Wistar大鼠,随机分为假手术组、缺血再灌流+生理盐水组(I/R+NS)和I/R+异丙酚组(I/R+Pr).采用夹闭肠系膜上动脉(SMA)的方法制作肠缺血再灌流模型.以上各组分别在再灌流后0,30,60,120和240 min(每时间点8只)处死动物取肠袋组织.采用病理学方法观察肠上皮细胞损伤指数;原位DNA末端标记法(TUNEL)检测肠上皮细胞凋亡率的变化;免疫组化法检测肠上皮细胞Caspase-3,bcl-2表达的变化.结果:I/R+Pr组与I/R+NS组相比,肠上皮细胞病理变化较轻,肠上皮细胞的凋亡率明显下降(P<0.01),再灌流后0,30,60,120和240 min肠上皮细胞中Caspase-3阳性细胞数明显减少(104.4±5.3 vs 146.4±7.6;97.4±6.2 vs 130.4±7.4;134.4±5.1 vs 170.4±8.1;125.4±6.2 vs 160.4±9.5:101±5.8 vs 120.4±8.2,均P<0.01),而bcl-2阳性细胞数明显增加(13.34±4.12 vs 6.72±2.59;14.96±4.85 vs 8.24±3.13;15.29±5.28 vs 9.63±2.89;10.39±3.61 vs 9.63±2.89;10.39±3.61 vs 5.96±1.93;11.08±4.83 vs 6.87±2.43,均P<0.01).结论:异丙酚能抑制缺血再灌流时肠上皮细胞Caspase-3表达,而增加bcl-2表达,减少肠上皮细胞的凋亡.

芪红胶囊对柯萨奇病毒引起细胞凋亡的影响

目的探讨柯萨奇病毒是否能够引起心肌细胞凋亡,以及芪红胶囊对凋亡发生是否有抑制作用。方法将培养细胞分为4组:病毒感染对照组、芪红胶囊加病毒组、芪红胶囊对照组和正常细胞对照组。应用原位末端标记法(TUNEL)、Hoechst33258染色和Annexin-Ⅴ/PI染色观察各组细胞凋亡发生情况;并通过流式细胞仪分析各组细胞的凋亡发生率;应用RT-PCR方法观察与凋亡相关细胞因子的表达改变。结果病毒感染对照组细胞经Hoechst33258染色发现病毒感染后的细胞核出现强亮度的蓝色荧光,可观察到凋亡细胞的典型变化;Annexin-Ⅴ/PI染色可见HeLa细胞膜呈强绿色荧光,细胞核显强红色荧光;通过流式细胞仪检测PI染色的细胞DNA,发现病毒感染组出现明显凋亡峰;芪红胶囊加病毒组凋亡发生率明显下降,正常对照组细胞未发生凋亡;同时芪红胶囊能够调节与凋亡相关细胞因子的表达。结论芪红胶囊能够抑制柯萨奇病毒引起的细胞凋亡。

部分背根切断激发脊髓II板层细胞凋亡

目的 :为了解部分背根切断后脊髓可塑性中是否涉及脊髓内胶质细胞和神经元细胞凋亡 .方法 :采用DNA原位末端标记—TUNEL法染色 ,检测部分背根切断后脊髓细胞凋亡 .结果 :在部分背根切断后脊髓的手术侧和非手术侧均见部分TUNEL阳性反应的胶质细胞和神经元 ,且手术侧的II板层凋亡细胞数较非手术侧多 (P <0 0 5 ) .结论 :背根切断不仅导致手术侧胶质细胞和神经元凋亡细胞数量明显增加 。

部分背根切断对脊髓中央管上皮细胞凋亡的影响

目的 :探讨部分背根切断与脊髓中央管上皮细胞凋亡的关系 .方法 :采用DNA原位末端标记 -TUNEL法染色 .结果 :部分背根切断后 3d ,中央管上皮出现大量细胞凋亡 ,10d时凋亡细胞又明显减少 ,但总细胞数术后两组无明显差异 .结论 :部分背根切断可致脊髓中央管上皮细胞凋亡 ,且随损伤时间延长凋亡细胞数有明显减少 ,提示细胞凋亡可能在损伤的间接影响下发生 。

^(90)Sr-^(90)Y对人良性前列腺增生细胞增殖与凋亡影响的研究

目的 探讨放射性核素90 Sr 90 Y对良性前列腺增生 (BPH)组织细胞增殖与凋亡的影响。方法 采用DNA原位末端标记法和免疫组织化学法分别测定BPH组织和经放射性核素90 Sr 90 Y腔内照射后的BPH组织中细胞凋亡和Ki 67的表达情况。结果 经90 Sr 90 Y腔内照射后的BPH组织中增殖指数 (PI)较未照射组明显下降 (P <0 0 1 ) ,而两者细胞凋亡指数 (AI)相比差异无显著性 (P >0 0 5)。结论 放射性核素90 Sr 90 Y腔内照射可抑制前列腺细胞增殖 。

人细小病毒B19可能是再生障碍性贫血的重要病因

该院小儿科主治医师钱新宏、副教授郑跃杰等近日完成的一项研究揭示,人细小病毒B19(B19病毒)可能是引起人类再生障碍性贫血(AA)的重要病因。 为了探讨B19病毒感染与AA的关系,钱新宏、郑跃杰等在军队留学回国人员启动基金资助下,应用巢式PCR技术检测了60例AA[儿童38例,成人22例;急性AA(AAA)33例,