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扩增未知序列DNA片段的PCR技术研究进展 被引量:4
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作者 王景雪 孙毅 梁爱华 《生物工程进展》 CSCD 2001年第1期51-57,41,共8页
198 5年 ,Mullis等人发明了PCR技术 ,短短十余年间 ,这一技术得到迅速发展和应用 ,已由扩增已知基因发展到扩增未知基因。本文旨在介绍利用PCR技术扩增未知序列DNA片段的最新进展及这些技术在基因克隆研究中的应用。
关键词 PCR技术 未知序列dna片段 基因克隆 扩增
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新疆核桃4个栽培品种及野生种的遗传多样性分析 被引量:3
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作者 张宏祥 张明理 +1 位作者 桂东伟 姜黎 《植物资源与环境学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期10-16,共7页
以新疆地区种植的4个核桃(Juglans regia Linn.)栽培品种(包括新栽培品种‘温185’和‘新新2’以及老栽培品种‘新丰’和‘扎343’)及巩留野核桃自然保护区生长的野生核桃为研究对象,对其cp DNA的psb K-psb I区间和mt DNA的COX2 intron... 以新疆地区种植的4个核桃(Juglans regia Linn.)栽培品种(包括新栽培品种‘温185’和‘新新2’以及老栽培品种‘新丰’和‘扎343’)及巩留野核桃自然保护区生长的野生核桃为研究对象,对其cp DNA的psb K-psb I区间和mt DNA的COX2 intronⅠ区间以及nr DNA的ITS和ETS区间的DNA片段序列进行了比较分析,并对其MP、ML和UPGMA系统发育树进行了分析;此外,还基于SSR分子标记结果对其进行了遗传多样性指数、UPGMA系统发育树和遗传分组分析。结果表明:野生种与4个栽培品种的cp DNA和mt DNA片段序列无碱基变异,而其nr DNA的片段序列却存在3个碱基变异,但4个栽培品种间无碱基变异。以麻核桃(J.hopeiensis Hu)为外类群,基于上述4个DNA片段序列构建的MP、ML和UPGMA系统发育树的聚类结果一致,均表现为4个栽培品种聚为一组,而野生种和麻核桃则分别单独聚为一组。野生种的观测杂合度、预期杂合度和固定指数分别为0.383、0.448和0.153,4个栽培品种的上述3个遗传多样性指数分别为0.428~0.576、0.423~0.619和-0.043~0.234。基于SSR分子标记结果的UPGMA系统发育树和分组数为5的遗传分组结果均表明:野生种和品种‘温185’分别单独为一组;品种‘新新2’和‘新丰’为一组;而品种‘扎343’也单独为一组,但与品种‘新新2’和‘新丰’遗传关系较近。遗传分组结果还表明:分组数为3更利于明确品种‘扎343’的分组地位,此时,其与品种‘新新2’和‘新丰’为一组。综合分析结果表明:核桃4个栽培品种间的遗传差异较小,且老栽培品种的遗传多样性总体上高于新栽培品种;野生种与栽培品种间具有明显的遗传差异,说明在育种或栽培过程中核桃种质资源的遗传多样性可能会逐渐降低,并且,该野生种可为核桃的分子育种提供天然的基因库资源。 展开更多
关键词 核桃 野生种 栽培品种 遗传多样性 dna片段序列 SSR分子标记
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Development of a SCAR marker for male gametophyte of Gracilariopsis lemaneiformis based on AFLP technique 被引量:1
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作者 周伟 丁弘叶 +2 位作者 隋正红 王钟霞 王津果 《Chinese Journal of Oceanology and Limnology》 SCIE CAS CSCD 2014年第3期522-526,共5页
The red alga Gracilariopsis lemaneiformis(Bory) is an economically valuable macroalgae. As a means to identify the sex of immature Gracilariopsis lemaneiformis, the amplifi ed fragment length polymorphism(AFLP) techni... The red alga Gracilariopsis lemaneiformis(Bory) is an economically valuable macroalgae. As a means to identify the sex of immature Gracilariopsis lemaneiformis, the amplifi ed fragment length polymorphism(AFLP) technique was used to search for possible sex- or phase-related markers in male gametophytes, female gametophytes, and tetrasporophytes, respectively. Seven AFLP selective amplifi cation primers were used in this study. The primer combination E-TG/M-CCA detected a specifi c band linked to male gametophytes. The DNA fragment was recovered and a 402-bp fragment was sequenced. However, no DNA sequence match was found in public databases. Sequence characterized amplifi ed region(SCAR) primers were designed from the sequence to test the repeatability of the relationship to the sex, using 69 male gametophytes, 139 female gametophytes, and 47 tetrasporophytes. The test results demonstrate a good linkage and repeatability of the SCAR marker to sex. The SCAR primers developed in this study could reduce the time required for sex identifi cation of Gracilariopsis lemaneiformis by four to six months. This can reduce both the time investment and number of specimens required in breeding experiments. 展开更多
关键词 Gracilariopsis lemaneiformis amplified fragment length polymorphism (AFLP) male gametophyte sequence characterized amplified region (SCAR) marker
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Variation and Characterization Analysis of Partial Fragment of Fibroin Gene From Silkworm, Antheraea pernyi
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作者 李文利 Jin +2 位作者 Liji An Lijia 《High Technology Letters》 EI CAS 2003年第3期29-32,共4页
A 1.4Kb DNA fragment containing 3’ flanking sequence of fibroin gene of silkworm, Antheraea pernyi, was obtained from the silk gland’s mRNA of 5 th larva. Analysis of this sequence with another A.pernyi fibroin prot... A 1.4Kb DNA fragment containing 3’ flanking sequence of fibroin gene of silkworm, Antheraea pernyi, was obtained from the silk gland’s mRNA of 5 th larva. Analysis of this sequence with another A.pernyi fibroin protein (accession No. D83241) revealed that it consists of a completely open reading frame (ORF), which includes 14 polyalanine-containing units (motifs) and 100bp 3’-UTR. The sequence of the predicted amino acid reveals the highest level of overall identity (90%) with D83241. It was found that it loses a repeat region at the upstream of TAA codon and some mutations. A putative polyadenylation signal AATAAA tail was found in position 1300, which follows the termination codon. 展开更多
关键词 fibroin Antheraea pernyi ANALYSIS Chi-like sequence
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Detecting Factor Ⅺ Deficiency in Holstein Cattle Using PCR Analysis
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作者 张科 王占彬 王清义 《Agricultural Science & Technology》 CAS 2010年第5期109-111,共3页
[Objective] This study established a method to detect Factor Ⅺ by polymerase chain reaction analysis.[Method]A pair of primers was designed and synthesized according to sequences of FⅪ gene in Holstein calves,publis... [Objective] This study established a method to detect Factor Ⅺ by polymerase chain reaction analysis.[Method]A pair of primers was designed and synthesized according to sequences of FⅪ gene in Holstein calves,published in Genbank. Polymerase chain reaction was used to analyze FⅪ deficiency of 576 Holstein calves in Henan,and the result was verified by DNA sequencing. [Result] We detect 576 cows,which include two carriers and one F Ⅺ deficiency,and the result was consistent with the DNA sequencing. The frequency of the FⅪ mutant allele was 0.3%,the carrier was 0.3%,the prevalence was 0.2%.[Conclusion]A method detecting FⅪ by polymerase chain reaction analysis was established. This method is not only simple and convenient,but also has a high accuracy and low cost,which is more suitable for large-scale FⅪ investigation. 展开更多
关键词 Holstein cattle Factor deficiency PCR detection
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中国人内源性高甘油三酯血症患者载脂蛋白AⅣ基因变异的研究 被引量:3
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作者 白怀 刘瑞 +1 位作者 刘宇 刘秉文 《中华医学遗传学杂志》 CAS CSCD 2002年第2期115-119,共5页
目的 探讨载脂蛋白 A (apolipoprotein A ,apo A )基因变异是否与中国人内源性高甘油三酯血症有关联 ,为其分子遗传基础提供依据。方法 应用多聚酶链反应 -限制性片段长度多态性及DNA片段序列分析法 ,对成都地区汉族 171名正常人及 1... 目的 探讨载脂蛋白 A (apolipoprotein A ,apo A )基因变异是否与中国人内源性高甘油三酯血症有关联 ,为其分子遗传基础提供依据。方法 应用多聚酶链反应 -限制性片段长度多态性及DNA片段序列分析法 ,对成都地区汉族 171名正常人及 10 6例内源性高甘油三酯血症 (hypertri glyc-eridemia,HTG)患者 apo A 基因多态性进行了研究。检测的 apo A 基因位点有 :密码子 9(A→ G突变 ,同义突变 ) ,密码子 34 7(A→T突变 ,错义突变 )、密码子 36 0 (G→T突变 ,错义突变 )及 Msp (内含子 2 C→T突变 )。结果 与正常对照组比较 ,HTG组密码子 9的 G等位基因频率显著升高 (0 .45 3vs0 .36 6 ,P<0 .0 5 ) ,其它位点等位基因频率未见差异 (P>0 .0 5 )。中国人 apo A 基因密码子 9、密码子 34 7和密码子 36 0等位点相应的 G等位基因、T等位基因和 T等位基因频率与欧洲白种人存在明显种族差异 (0 .36 6 vs 0 .0 32 ,P<0 .0 0 1;0 .0 0 0 vs0 .16 0 ,P<0 .0 0 1;0 .0 0 0 vs0 .0 70 ,P<0 .0 0 1)。与日本人比较 ,上述位点的等位基因频率及 Msp 位点 T等位基因频率均差异无显著性 (P>0 .0 5 )。正常男性 apo A 基因密码子 9位点G/G基因型携带者其血清 apo A 水平显著高于 A/A基因型携带者 (P<0 .0 1) ;而 HTG组 Msp 展开更多
关键词 内源性高甘油三酯血症 载脂蛋白AⅣ基因 基因变异 限制性片段长度多态性 dna片段序列测定
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中国人内源性高甘油三酯血症患者载脂蛋白AⅣ基因VNTR多态性的分析 被引量:3
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作者 白怀 刘瑞 +1 位作者 刘宇 刘秉文 《中华医学遗传学杂志》 CAS CSCD 2001年第5期356-361,共6页
目的 探讨载脂蛋白 A (apolipoprotein A ,apo A )基因变异与中国人内源性高甘油三酯血症是否有关联 ,为研究本病的分子遗传基础提供依据。方法 应用多聚酶链反应和 DNA片段序列分析法 ,对 48名正常人及 47例内源性高甘油三酯血症 (en... 目的 探讨载脂蛋白 A (apolipoprotein A ,apo A )基因变异与中国人内源性高甘油三酯血症是否有关联 ,为研究本病的分子遗传基础提供依据。方法 应用多聚酶链反应和 DNA片段序列分析法 ,对 48名正常人及 47例内源性高甘油三酯血症 (endogenous hypertriglyceridemia,HTG)患者 apo A 基因 3′端可变串联重复序列 (variable number tandem repeat,VNTR)进行分析。结果 中国人 apo A 基因 3′端 VNTR多态位点 CTGT三连重复 [(CTGT) 3]等位基因的频率为 0 .2 5 3,与德国白种人的 0 .6 0 7和意大利白种人的 0 .5 2 2差异存在显著性 (P<0 .0 1,P<0 .0 1) ,而与日本人的 0 .2 6 2相近 (P>0 .0 5 )。HTG组和对照组之间 (CTGT) 3等位基因的频率差异无显著性 (0 .2 2 3vs 0 .2 81,P>0 .0 5 ) ,对照组 VNTR3/ 3基因型携带者其血清 L DL C水平显著高于 3/ 4型携带者 (3.6 98± 0 .6 7mmol/ L vs 2 .974± 0 .5 4mmol/ L ,P<0 .0 5 )。结论  apo A 基因 VNTR多态性与血清低密度脂蛋白胆固醇 (low- densitylipoprotein cholesterol,L DL C)有一定关联 ,但未见对血清 TG、HDL 展开更多
关键词 内源性高甘油三酯血症 载脂蛋白AⅣ基因 可变串联重复序列多态组 dna片段序列
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