人α-卫星DNA特异性片段的体外扩增

本研究依据α-卫星DNA序列,经计算机辅助PCR引物分析和设计软件处理,10对引物,从中优选出5对,进行引物内聚体、二聚体分析,选出最优引物1对,用DNA合成仪合成:引物Ⅰ:5′-ATTAGCCAACTGTTTCC-CTGC-3′,合成浓度2.145/μg/μl;引物Ⅱ:5′-GTCTTGCTTCTTTCAAAGCGC-3′,合成浓度3.135μg/μl;设计扩增长度157 bp。

我国棉花枯萎菌生理小种特异性DNA扩增片段的筛选及序列测定

利用 RAPD技术 ,以随机引物对我国棉花枯萎菌的 3个生理小种 (3、7、8号小种 )共 2 6个菌株进行 PCR扩增 ,从产生的 140个 RAPD分子标记中寻找到了不同小种的特征性条带 ,OPF- 10 513 (3号小种 )、OPF- 0 83 71(7号小种 )及 OPF- 12 70 3 (8号小种 )。将其纯化后克隆到 p GEM- T Easy质粒载体上 ,并获得了 DNA特异性片段的核酸序列。

簇毛麦基因组特异DNA序列标记的建立和应用

为建立簇毛麦基因组特异DNA序列的分子标记,以普通小麦中国春、绵阳11、川农17和R111以及多年生簇毛麦、硬粒小麦-多年生簇毛麦双二倍体TDB-3为材料,用120条随机引物进行RAPD分析,筛选出一个多年生簇毛麦的特异性RAPD片段,克隆测序表明该片段全长为937 bp(记为OPM2937)。以OPM2937的DNA序列为基础设计了一对特异引物,并用该特异引物对多年生簇毛麦、二倍体簇毛麦以及中国春-二倍体簇毛麦附加系CSDA1V^CSDA7V与小麦-多年生簇毛麦衍生后代进行了扩增,结果表明,凡具有簇毛麦染色体的材料均可扩增出目标DNA片段,而不具簇毛麦染色体的材料均未能得到扩增。将OPM2937在NCBI中进行序列比对,发现它是一个新的序列,说明OPM2937为簇毛麦基因组的一个特异序列,该DNA序列标记可用于快速跟踪检测小麦背景中的簇毛麦染色体。

一种随机引物联合多特异性DNA片段检测结核分支杆菌的新方法

目的:针对目前结核性疾病实验室诊断的局限性,探索一种更为敏感和特异的结核分枝杆菌DNA检测新方法。方法:选取10株江苏地区流行的结核分支杆菌(MTB)菌株,选取临床其他常见菌株及分枝杆菌菌株作为对照组,分别提取DNA作为随机引物的模板。参考国内、外文献设计12条随机引物,并分别对MTB及对照菌株进行单个引物随机扩增,2%的琼脂糖凝胶电泳对扩增产物进行分离并切胶纯化,通过TA克隆将纯化片段连接到质粒pEASYTM-T5 Zero并进行测序,通过BLAST-nr比对验证是否为MTB DNA片段。按照所确定的MTB片段序列,在其内部设计、合成一对特异性引物。用此特异性引物扩增对应的随机引物扩增产物,获得MTB特异性条带图谱。并将该方法检测的敏感性和特异性与临床上常用的real-time PCR进行比较。结果:经BLAST-nr比对,随机引物IS986F,S535及IS986R扩增的条带与MTB DNA有高度同源性(均为99%)。随机引物IS986F、S535和IS986R分别联合其特异性引物可以检测稀释105倍、105倍和103倍的MTB DNA,其特异性分别为100%、90%和80%。常规real-time PCR可检测出稀释104倍的MTB DNA。结论:随机引物IS986F联合其特异性引物检测结核分枝杆菌的灵敏度和特异性优于S535、IS986R两组,特异性为100%,且灵敏度优于常规real-time PCR法。

DNA分析在法医鉴定中的应用

随着分子生物学的迅速发展,人们对生物体基因组的认识不断深化,各种新兴的DNA分析技术已经能够从分子水平上研究和检验基因的结构与功能。个体差异的本质在于细胞核染色体所含的DNA分子的结构和功能状况的不同,因而,现代DNA分析技术使长期以来一直滞留于遗传表型(如血型)检验的法医物证鉴定,一下子飞跃到直接对生命的遗传物质DNA进行检验的水平。

ISSR分子标记快速预测远志中sibiricose A5和sibiricose A6的含量

目的:优化远志简单重复序列区间(ISSR)扩增多态性反应体系,设计一对聚合酶链式反应(PCR)引物用于快速预测远志药材中sibiricoseA5和sibiricoseA6的含量高低。方法:采用UPLC测定远志药材中sibiricoseA5与sibiricoseA6的含量,通过单因素试验优化远志ISSR反应体系,利用ISSR分子标记技术筛选出与sibiricoseA5和sibiricoseA6含量相关的特异性DNA片段,针对此片段设计特异性PCR引物。结果:7批远志药材中sibiricoseA5和sibiricoseA6的含量差异较大,变化范围分别为0.8954~3.2276,0.6442—2.0578mg·g^-1。对筛选出的与sibiricoseA5和sibiricoseA6含量相关片段(890—8)进行克隆测序后,设计出了1对特异性引物(YZ—SA),可用于快速预测远志药材中sibiricoseA5和sibiricoseA6的含量高低。结论:优化后的远志ISSR反应体系具有标记位点清晰、检测多态性能力强等特点,设计出的特异性引物可用于快速预测远志药材中sibiricoseA5和sibiricoseA6的含量高低。

The Cloning and Expression of Renalase and the Preparation of Its Monoclonal Antibody

To obtain the recombination protein of renalase and prepare the monoclonal antibody, the human renalase gene was amplified from human kidney by specific primer and cloned the DNA fragments into the pET22b. After verification of the positive clones, the gene was transformed to E. coli BL21 to express the protein with 6His on C terminal. The Balb/c mouse was immunized with the purified protein to prepare the monoclonal antibody by hybidoma technique. The renalase protein was reconstructed and 2 strains of the hybidoma which can stable secrete renalase were obtained. The monoclonal antibody can both react with the both recombinant and human serum renalase.