人类疱疹病毒6型（HHV－6）分离株DNA限制性核酸内切酶酶切图谱分析研究

人类疱疹病毒６型（ＨＨＶ—６）是１９８６年新发现的疱疹病毒。限制性核酸内切酶切图谱分析表明：ＨＨＶ－６不同株之间ＤＮＡ酶切图谱呈多态性。根据酶切图谱的不同，将ＨＨＶ－６分离株分为Ａ、Ｂ二组，Ｂ组又分为Ⅰ、Ⅱ两个亚组。

BamHI DNA甲基化酶的纯化及对BamHI限制性核酸内切酶限制作用的保护作用

用硫酸铵盐析、磷酸纤维素柱层析和肝素-Sepharose 4B亲和层析从解淀粉芽孢杆菌(Rocllus amyloliquefaciens)纯化了BamHl DNA甲基化酶。并以λDNA为底物,研究了λDNA被BamHl DNA甲基化酶作用后,对BamHl限制性核酸内切酶的切割产生了明显的阻抗作用。

核酸内切酶在DNA断裂损伤检测中的应用研究

利用人体淋巴细胞和Hela细胞并经 10 0 μMH2 O2 诱导DNA损伤 ,然后分为对照组和实验组 ,后者补充 2 5 μl 1μg/ml的核酸内切酶Ⅲ。结果显示对照组淋巴细胞经 4h培养后DNA断裂损伤下降到 6 3 85 (专用单位 ) ;补充核酸内切酶Ⅲ的实验组DNA断裂损伤明显增加达到 16 1 93 (P <0 0 5 )。对照组Hela细胞培养 4h后DNA断裂损伤为 19,而实验组断裂损伤明显高于对照组达到 172 1(P <0 0 1)。提示实验组DNA断裂损伤的增高可能包括H2 O2 所致DNA直接断裂和核酸内切酶Ⅲ切除修复过程中所形成的修复性断裂两部分 ,反映了DNA总体损伤水平。

补充核酸内切酶Ⅲ对DNA氧化损伤影响的研究

目的 :核酸内切酶Ⅲ在DNA损伤的切补修复体系中可能发挥着重要作用 ,是否有效地促进DNA损伤修复本文进行了探讨。方法 :本研究采用“彗星”电泳技术分析DNA断裂损伤 ,利用人体淋巴细胞和Hela细胞并用 10 0 μmolH2 O2 诱导DNA严重损伤 ,其损伤分别达到 198 5和 32 0 (专用单位 ,AU) ,然后再将两种细胞各分为两组 ;一组为对照组 ,另一组为实验组补充2 5 μl(1μg/ml)的核酸内切酶Ⅲ .在培养至 30min ,6 0min ,180min和 2 40min时观察DNA断裂损伤情况。 结果 :淋巴细胞DNA断裂损伤在对照组中经过 4h培养后逐渐得到修复 ,DNA损伤由初始时的 198 5下降到 6 4 2 7(AU) ;补充核酸内切酶Ⅲ的实验组尽管DNA断裂经过 4h后也得到修复 ,但DNA断裂损伤率仍明显高于对照组 (P均 <0 .0 5 )。Hela细胞对H2 O2 表现出较高的敏感性并有极强的自身修复能力 ,对照组DNA断裂损伤从初始时的 32 0下降到 4h后的 19(AU) ,自身修复率达到94 1% ,然而补充核酸内切酶Ⅲ的Hela细胞DNA断裂损伤率在 30min、6 0min、180min、2 40min时均明显高于对照组 (P <0 .0 5 )。结论 :本结果提示核酸内切酶Ⅲ在DNA损伤修复中增加了DNA的断裂损伤率。

识别序列外DNA甲基化对限制性核酸内切酶PvuⅡ酶切活性影响的研究

构建了重组质粒ｐＳＶ２ｇｐｔ－ＳＶ４０ｏｒｉ－ａｎｔｉｓｅｎｓｅ－ｒａｓ（简称Ｐ１），利用这一重组体进一步证实了识别序列外ＤＮＡ甲基化对限制性核酸内切酶ＰｖｕⅡ切割活性的抑制作用，并对这一抑制作用进行了定量研究。结果表明：邻近ＰｖｕⅡ识别位，点的ＤＮＡ甲基化可降低ＰｖｕⅡ对该位点酶切活性的７０％左右。

用限制性核酸内切酶分析钩端螺旋体DNA的研究

作者选用钩体赖型56601株、017株、秋季型56606株、曼耗2型67020株、1987年分离株87112、87369株,用内切酶EcoR Ⅰ、Bgl Ⅱ、Hha Ⅰ和Hind Ⅲ消化分析其DNA,结果表明:钩体017株的四种内切酶图谱明显不同,在EcoR Ⅰ酶切图谱上,赖型、秋季型、曼耗2型钩体DNA的主要差别在高分子区带,赖型强毒力株017较同型弱毒力株56601在10.5kb处染色较深;三型钩体的Hind Ⅲ酶切图谱仅有细小差异;分离株87112和87369的EcoR I 酶切图谱与赖型56601和017基本一致。在HindⅢ酶切图谱上,分离株87112与赖型56601株、017株相似。提示:限制性核酸内切酶分析可以作为钩体分型和鉴定的手段。

限制性核酸内切酶与DNA相互作用研究进展

蛋白质对ＤＮＡ识别的模体中，除了锌指结构、螺旋—转角—螺旋、亮氨酸拉链和β带外，近年来发现，Ⅱ型限制性内切酶与ＤＮＡ作用的模体有许多特别之处。通过对ＥｃｏＲＩ、ＢａｍＨＩ、ＥｃｏＲＶ等与ＤＮＡ复合物的空间构象、一级结构分析，发现酶分子存在催化性裂缝，并且氨基端形成臂结构包绕ＤＮＡ；同时ＤＮＡ发生构象变化、螺旋扭结。这些有趣的结构有利于酶对底物的特异性结合和催化作用。

基于微小RNA-135b-5p靶向调控瓣状核酸内切酶1探究姜黄素对人卵巢癌细胞顺铂耐药的改善机制

目的 基于微小RNA-135b-5p(miR-135b-5p)靶向调控瓣状核酸内切酶1(FEN1)探究姜黄素对人卵巢癌细胞顺铂耐药的改善机制。方法 取对数生长期人卵巢癌顺铂耐药细胞株OVCAR-3/DDP,将细胞分为对照组、顺铂组、姜黄素组、顺铂+姜黄素组、顺铂+姜黄素+阴性对照抑制剂组、顺铂+姜黄素+miR-135b-5p抑制剂组、顺铂+姜黄素+miR-135b-5p模拟物组。对照组不予处理,其余各组分别予顺铂和/或姜黄素,后3组细胞采用脂质体转染法分别转染绿色荧光蛋白质粒(pGFP)-阴性对照抑制剂、pGFP-miR-135b-5p抑制剂、pGFP-miR-135b-5p模拟物载体。各组给药处理72 h后,采用实时荧光定量聚合酶链反应检测各组细胞miR-135b-5p及FEN1 mRNA表达量;蛋白质印迹法检测各组细胞FEN1蛋白表达;双荧光素酶靶标实验验证miR-135b-5p与FEN1之间的作用关系;噻唑盐比色法检测各组细胞增殖抑制率;流式细胞仪检测各组细胞凋亡率。结果 姜黄素组、顺铂+姜黄素组、顺铂+姜黄素+阴性对照抑制剂组、顺铂+姜黄素+miR-135b-5p抑制剂组、顺铂+姜黄素+miR-135b-5p模拟物组miR-135b-5p表达量、增殖抑制率及细胞凋亡率均高于对照组和顺铂组,FEN1 mRNA及蛋白表达量均低于对照组和顺铂组(均P<0.05)。脂质体转染的3组中,顺铂+姜黄素+miR-135b-5p抑制剂组miR-135b-5p表达量、增殖抑制率及细胞凋亡率最低[(0.75±0.10)、(34.399±6.055)%、(17.3±3.1)%],FEN1 mRNA和蛋白表达量最高[(0.77±0.11)、(0.69±0.09)];顺铂+姜黄素+miR-135b-5p模拟物组miR-135b-5p表达量、增殖抑制率及细胞凋亡率最高[(1.68±0.26)、(80.365±10.617)%、(48.7±8.4)%],FEN1 mRNA和蛋白表达量最低[(0.33±0.04)、(0.29±0.04)](均P<0.05)。双荧光素酶靶标实验提示miR-135b-5p靶向FEN1。结论 姜黄素可增强OVCAR-3/DDP对顺铂的敏感性,可能与促进miR-135b-5p的表达从而靶向抑制FEN1的表达相关。

基于DNA和限制性核酸内切酶的基本逻辑门设计

由于DNA分子具有特异性、高并行性、微小性等天然特性,在信息处理过程中展现出了强大的并行计算能力和数据存储能力。该文研究将具有特异性识别功能的限制性核酸内切酶引入DNA链置换反应中,作为DNA电路的输入,通过控制立足点的生成和移除设计了是门、非门和与门3种基本逻辑门。采用Visual DSD对逻辑模型进行模拟仿真,并通过凝胶电泳实验验证设计。与以往的分子逻辑门比较,该设计反应迅速,操作简便,具有良好的扩展性,为大规模电路的设计提供了可能性。

类转录激活因子效应物核酸酶(TALEN)介导的基因组定点修饰技术

人工构建的序列特异性核酸内切酶能够识别并切割特定的DNA靶序列,造成双链断裂,从而引起基因组结构的定点改变。人工核酸内切酶技术使得研究人员有可能对任意物种的基因组进行定点修饰,开启了反向遗传学研究的新天地。类转录激活因子效应物核酸酶(Transcription activator-like effector nuclease,TALEN)自2010年底开始成功应用于基因打靶,很快成为一种比锌指核酸酶(Zinc-finger nuclease,ZFN)更容易设计、特异性更高和毒性更低的人工核酸内切酶。文章综述了TALEN技术的研究进展及应用前景,重点介绍TALEN的结构、作用机制与构建方法和利用TALEN进行基因组定点修饰的策略,以及目前利用这一技术已成功实现突变的物种及内源基因,特别是在斑马鱼中的应用,为开展这一领域的研究工作提供参考。

福建两个蛋鸭品种和常见野鸭线粒体DNA(mtDNA)限制性酶切图谱的比较

用７种限制性内切酶（ＢａｍＨⅠ、ＢｇｌⅡ、ＥｃｏＲⅠ、ＥｏｃＲⅤ、ＰｓｔⅠ、ＳａｃⅠ、ＸｂａⅠ）分析了蛋鸭（金定鸭、莆田黑鸭）、野鸭（斑嘴鸭、绿头鸭）的ｍｔＤＮＡ限制性类型，并用双酶法构建了以上鸭类的ｍｔＤＮＡ限制性酶切图谱．结果表明，蛋鸭与野鸭在ｍｔＤＮＡ结构上发生了明显分岐．比较两种野鸭和金定鸭的图谱，发现金定鸭与绿头鸭的亲缘关系较近．

鸡源和鸭源减蛋综合征病毒DNA酶切图谱分析

采用差速离心法纯化鸡源和鸭源减蛋综合征（ＥＤＳ）病毒，酚－氯仿抽提法提取两种毒株的核酸。选取ＥｃｏＲⅠ、ＢａｍＨⅠ、ＢｇｌⅠ、ＢｇｌⅡ、ＫｐｎⅠ、ＰｓｔⅠ和ＨｉｎｄⅢ７种限制性内切酶，对两种毒株进行酶切图谱比较。结果显示，鸡源株酶切片段数分别为４，４，６，８，５，９，１０，共计４６个片段；鸭源株产生的酶切片段数分别为４，４，５，７，９，１０，８，共计４７个片段。两者的酶切结果除ＥｃｏＲⅠ完全相同外，其余均存在不同程度的差异。由此表明，鸡源和鸭源ＥＤＳ病毒虽然血清型相同，但在基因水平上存在较大的差异，属不同基因型。

无嘌呤无嘧啶核酸内切酶/氧化还原因子1的研究进展

无嘌呤无嘧啶核酸内切酶 /氧化还原因子 1(APE/Ref- 1)具有修复 DNA损伤、影响氧化还原反应及调节转录因子DNA结合活性等功能 ,对细胞的生存有重要作用。近年来有关 APE/Ref- 1的研究在其基因、功能、分布以及与某些疾病尤其是神经系统疾病和肿瘤之间的关系等方面都取得了长足的进展 。

内切酶切割环状DNA的数学模型及动态分析

内切酶切割环状ＤＮＡ的数学模型及动态分析＊商立军１谢大来２（１第四军医大学数学教研室西安７１００３３２西北大学数学系）关键词内切酶环状ＤＮＡ数学模型动态分析中图号Ｑ５５孙连魁等［１］对具有三个切点的内切酶切割环状ＤＮＡ的动态过程进行了讨论，给出了切割...

从喜温蓝藻分离热稳定限制性内切核酸酶

从喜温蓝藻ＳｙｎｅｃｈｏｃｏｃｕｓｅｌｏｎｇａｔｕｓＴ３分离出一种限制性内切核酸酶，命名为ＳｅｌＩ．此酶是限制性内切核酸酶Ｓａｕ９６Ｉ的同切酶，它们的识别序列ＧＧＮＣＣ．但是ＳｅｌＩ的反应条件与Ｓａｕ９６Ｉ不同．ＳｅｌＩ是一种热稳定的限制性内切核酸酶。

Q热立克次体DNA酶切片段的电泳分析

本文采用限制性核酸内切酶技术,对本室分离的Q热立克次体七医株,进行了DNA酶切片段的电泳分析,并以国外标准株(Grita株)作为参照。Q热立克次体经泛影葡胺密度梯度离心法进行分离纯化。提纯的立克次体DNA,用限制性核酸内切酶(HaeⅢ和BglⅠ)分别消解后,再经琼脂糖凝胶电泳法分析。本文结果证实,七医株和Grita株的酶切电泳图谱存在差异。这种差异在HaeⅢ酶谱上尤为明显。不仅两株立克次体DNA的绝大多数酶切片段的迁移距离不同,而且Grita株明显比七医株缺少包括4.3kb在内的几个HaeⅢ片段。

DNA序列中限制酶切割位点的分布

本文以人类、小鼠、大鼠和病毒基因组中的DNA序列为材料,分析了其中40种Ⅱ型限制性核酸内切酶识认位点的数量和分布情况,发现人鼠序列中绝大多数酶的切点数量可以通过序列中单核苷酸或双核苷酸的频率来预测,而切点在序列上的分布也是随机的。例外的情况是人鼠序列中酶EcoRⅡ(识认CCWGG)和MnlⅠ(CCTC)的切点显著偏多,而DpnI(GATC)的切点显著偏少;MnlⅠ的切点倾向于聚集一处,病毒基因组中酶切位点也基本上是随机分布,但基因组间差异很大,跟人鼠序列差别也大,特别是噬菌体T7中有多达17种酶的切点显著偏少。文中讨论了所得结果对构建限制酶切图谱的理论计算以及对限制酶显带机理的意义,特别指出显带过程在酶的切点达到所要求的浓度时,跟酶的识认片段的专一性、酶切位点的数量都没有关系,而取决于染色体不同区段抵抗酶切破坏的能力。

限制性核酸内切酶的制备、纯度鉴定和测活方法

限制性核酸内切酶(简称限制酶)主要来源于细菌,其分布广泛、种类繁多。第一个限制酶于1968年问世,迄今已发现了近500种,其中绝大部分是Ⅱ型限制酶。Ⅱ型酶是非常重要的工具酶,被誉为“分子手术刀”;也为研究两类最重要的生物大分子——蛋白质和核酸的相互作用提供了一个理想的模型。