DNA甲基化抑制剂对肿瘤细胞中核糖核酸酶抑制因子表达下调的影响(英文)

背景与目的:人核糖核酸酶抑制因子(ribonucleaseinhibitor,RI)RI能有效抑制血管生成因子诱导的血管形成及某些可移植性实体瘤在动物体内的生长。然而,RI抗肿瘤的分子机制还未完全阐明。许多抑癌基因通过启动子区域异常的甲基化而使表达缺失,去甲基化抑制能使其表达恢复。为了进一步了解RI的功能以及探讨RI与肿瘤发生的关系,本实验拟研究甲基化抑制剂5-aza-2'-deoxycytidine(5-Aza-CdR)对肿瘤细胞中RI表达的影响。方法:用5-Aza-CdR作用人乳腺癌细胞系MCF-7、人胃癌细胞系BGC-823、人的前列腺癌细胞系DU-145和人结肠癌细胞系HT-29。通过RT-PCR,蛋白免疫印迹法(Westernblot),免疫荧光(immunofluorescence)和免疫细胞化学(immunocytochemistry)技术分析RI基因的表达。结果:与对照组比较,5-Aza-CdR能显著提高RI基因在MCF-7、BGC-823和DU-145细胞中的表达,RT-PCR检测结果分别为37.2%、46.0%和32.4%,Westernblot检测结果分别为26.4%、20.9%和24.4%(P<0.01);但对HT-29细胞没有明显的影响。结论:RI基因可能与胃癌、前列腺癌和乳腺癌的发生有关。

DNA甲基化抑制剂作用机理及其在植物发育生物学研究中的应用

本文综述了DNA甲基化抑制剂作用机理及其在植物发育生物学研究中的应用。DNA甲基化抑制剂使甲基基团不能转移到腺嘌呤或胞嘧啶,导致DNA甲基化反应受阻,从而使基因组甲基化水平降低。DNA甲基化抑制剂已被用于因DNA甲基化引起的植物表观遗传研究中,同时它可以代替低温促进植物提早开花,并可能在植物性状改良中得到进一步的研究和应用。

DNA甲基化抑制因子5-AzaDc对犬卵母细胞体外培养核成熟的影响

本实验旨在研究DNA甲基化酶抑制剂5-氮-2-脱氧胞苷(5-Aza Dc)对犬卵母细胞体外成熟的影响。研究比较添加不同浓度5-Aza Dc(1、2μmol/L)处理不同时间(1、2、48、72 h)观察的犬卵母细胞成熟情况,并通过DNA甲基化的免疫荧光染色,观察5-Aza Dc对DNA甲基化在犬卵母细胞中的分布情况及趋势变化。结果表明:添加2μmol/L的5-Aza Dc处理48 h,所有卵母细胞均脱离GV期,并且与对照组相比显著提高进入GVBD-MⅡ期的比率(28.3%vs.87.1%);免疫荧光染色结果显示,成熟卵母细胞的DNA甲基化染色位点主要集中在细胞核内,并未在细胞质中出现,DNA甲基化程度显著降低,并使染色质凝集。综上所述,添加2μmol/L的5-Aza Dc处理48 h可以通过抑制DNA甲基化水平提高犬卵母细胞体外成熟率,短时间的抑制DNA甲基化水平对犬卵母细胞的减数分裂恢复有积极促进作用。

DNA甲基化抑制剂研究进展

DNA甲基化由DNA甲基转移酶催化发生,是真核细胞DNA正常的表观遗传学修饰方式。但异常甲基化常导致肿瘤的发生,以地西他滨为代表的DNA甲基转移酶抑制剂是一类甲基化调节剂,能通过对抑癌基因去甲基化调节达到治疗肿瘤的目的。本文阐述了DNA甲基化与肿瘤的关系,以及DNA甲基化抑制剂的研究进展。

DNA甲基化抑制剂在恶性淋巴瘤中的研究进展

DNA甲基化是生物基因表达调控的方式之一,其作为一种特殊的表观遗传事件在疾病的发生、发展中具有重要作用。近年来,随着基础医学研究的发展,研究人员在血液系统肿瘤尤其是恶性淋巴瘤中发现了基因的高甲基化,相关药物的研发及临床试验的开展也在不断推进。DNA甲基转移酶抑制剂(DNA methyltransferase inhibitors,DNMTIs)作为表观遗传药物通过抑制DNA甲基转移酶,干扰DNA转录的过程来发挥抗肿瘤作用,成为治疗肿瘤的新手段。目前,上市的DNMTI包括地西他滨和阿扎胞苷,其在血液系统恶性肿瘤和实体肿瘤的治疗中都取得了良好的疗效。本文主要针对DNA甲基化抑制剂在恶性淋巴瘤中的作用机制和临床研究的进展进行综述。

DNA甲基化抑制物对雌激素受体β在乳腺癌细胞中表达的影响及意义

目的:研究甲基化抑制物作用于乳腺癌细胞后对其ER-β表达的影响及意义。方法:抽取细胞总RNA,采用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测MCF-7与MDA-MB-231中ER-β的表达状况。在两种细胞中按作用浓度加入甲基化抑制药物5-AZA-CdR,反应一定时间后用RT-PCR的方法测定药物处理后ER-β的表达情况,分析影响及意义。结果:MCF-7的ER-β平均表达水平(0.54±0.44),药物处理后平均表达水平(0.76±0.53),较未经药物处理的细胞明显升高(P<0.05);MDA-MB-231是雌激素受体阴性的细胞株,不表达ER-β,药物处理后ER-β出现表达平均水平为(0.32±0.11),P<0.05。结论:DNA去甲基化可以诱导ER-β表达增强或再表达,对于提高乳腺癌的内分泌治疗疗效和指导新辅助化学治疗有重大意义。

DNA甲基化抑制剂诱导Kasumi-1细胞分化和凋亡作用

目的 :探讨 DNA甲基化抑制剂 5 -氮 - 2′-脱氧胞苷 (5 - Aza- Cd R)体外诱导 Kasum i- 1细胞分化和凋亡作用。方法 :应用 MTT比色法观察 5 - Aza- Cd R对细胞的生长抑制作用 ,普通光学显微镜观察细胞形态和结构改变 ,流式细胞术检测髓系分化抗原的表达 ,DNA凝胶电泳分析细胞凋亡。结果 :5 - Aza- Cd R明显抑制 Kasumi- 1细胞的生长 ,半数抑制浓度 (IC50 )约为 0 .6 5 μmol/L。 5 - Aza-Cd R可诱导 Kasum i- 1细胞髓系分化抗原 CD1 1 b和 CD1 3表达增加。 5 - Aza- Cd R诱导 Kasumi- 1细胞凋亡。用 5 - Aza- Cd R处理后的细胞出现单核细胞样分化和凋亡细胞形态改变。结论 :5 -氮 - 2′-脱氧胞苷抑制 Kasum i- 1细胞生长 。

DNA甲基化抑制剂治疗骨髓增生异常综合征的荟萃分析

目的：系统评价DNA甲基化抑制剂治疗骨髓增生异常综合征的有效性和安全性，为其临床应用提供可靠的依据。方法：检索Medline、Embase等主要外文数据库，应用RevMan5软件进行荟萃分析，选用比值比（OR）、风险比（HR）作为效应量，绘制森林图，评估治疗的有效性及不良反应。结果：共获得符合标准的研究4个。DNA甲基化抑制剂的完全反应率、部分反应率、血液指标改善率均优于传统的支持疗法，合并OR值分别为19．14195％可信区间（CI）（5．33～68．70）]、9．40195％CI（3．83～23．05）1、4．18195％CI（1．71～10．19）]，总生存风险、转化为急性髓系白血病风险差异无统计学意义（均P〉0．05）。在不良反应方面，血小板减少率、中性粒细胞减少率、贫血率DNA甲基化抑制剂治疗与传统支持治疗差异无统计学意义（均P〉0．05）；阿扎胞苷、地西他滨的个别血液不良反应方面可能高于支持治疗组。结论：DNA甲基化抑制剂治疗骨髓增生异常综合征具有一定的疗效．但该类药物的安全性仍需进一步仔细评估。

胆囊癌DNA甲基化修饰与治疗研究进展

胆囊癌是一种罕见但恶性程度极高的肿瘤,早期诊断困难,预后差,多药耐药,发病机制尚不明确。关于胆囊癌的研究主要集中在早期诊断生物标志物和治疗靶点的寻找。胆囊癌被认为是一种表观遗传异常肿瘤,DNA甲基化是其中最常见的一种修饰异常,且随肿瘤进展不断增加,DNA甲基化促进胆囊癌演变及发展,可作为其潜在生物标志物。此外,由于DNA甲基化的可逆性,DNA甲基化抑制剂有望通过与其他药物的联合应用,改善患者预后及耐药性。本研究我们将从DNA甲基化对胆囊癌的调控进行讨论,希望能为胆囊癌的早期诊断、预防和治疗提供一些研究思路。

DNA甲基化抑制剂对水稻幼苗生长及耐盐性的影响

DNA甲基化抑制剂能够通过改变植物基因组的DNA甲基化水平从而对植物的开花、生长发育和抗逆性产生影响。以耐盐和盐敏感水稻品种为材料,分别在水稻萌发期和幼苗期用DNA甲基化抑制剂进行处理,并对处理后的幼苗进行盐胁迫。结果表明:萌发期抑制剂处理导致种子萌发率显著降低,幼苗出现矮化、成簇、死亡等症状,株高、根长和干重也受到了显著的抑制;同时,DNA甲基化抑制剂处理可以降低盐胁迫时地上部的钠离子浓度、提高抗坏血酸过氧化物酶(APX)的活性。上述结果表明DNA甲基化抑制剂通过改变基因组DNA的甲基化水平来影响水稻的生长发育,并通过影响离子吸收和抗氧化酶类的活性来影响水稻的耐盐性。

DNA甲基化转移酶抑制剂与胸苷酸合成酶抑制剂体外联合用药的抗肿瘤增效作用

通过在体外分别对DNA甲基化转移酶(DNAmethyltransferase,DNMT)抑制剂5-氮杂胞苷(5-azacytidine,5-aza-C)和新型胸苷酸合成酶抑制剂盐酸洛拉曲克(nolatrexeddihydrochloride,Nolatrexed)联合用药于人大肠癌细胞LoVo和人肝癌细胞Hep3B的相互作用性质的观察,探讨DNMT抑制剂和胸苷酸合成酶抑制剂联合用药的可能性.使用MTT法测定二者单独用药或联合用药的抗肿瘤活性,用抑制浓度的分数之和(sumoffractionalinhibitoryconcentration,SFIC)值及等效剂量分析方法(isobologram)评价联合用药的作用性质.结果显示,联合用药时其SFIC值均小于或等于1,由此得到的等效剂量曲线图形表现为凹形.可见,5-aza-C和Nolatrexed体外联合用药抗肿瘤相互作用性质为明显的增效作用,DNMT抑制剂和胸苷酸合成酶抑制剂联合用药达到抗肿瘤增效作用是可行的.

DNA甲基化转移酶及DNA甲基化转移酶抑制剂在肿瘤研究中的新视角

表观遗传改变例如DNA甲基化涉及多种癌症的发生和进展。DNA甲基化包括可逆的甲基基团添加至CpG二核苷酸中5’位胞嘧啶上。而DNA甲基化转移酶（DNA methyltransferases，DNMT）是负责甲基基团添加至CpG二核苷酸的酶，与组蛋白修饰一起，是发生于转录抑制所必须的起始事件。

脱氧核糖核酸甲基化抑制剂的研究进展

近年来,越来越多的研究发现异常的DNA甲基化和肿瘤、自身免疫性疾病、衰老等密切相关。由于DNA甲基化状态是可以改变的,故利用DNA甲基化抑制剂达到防治肿瘤的目的成为可能。本文综述了DNA甲基化抑制剂的种类、作用机制及临床研究的新进展,探讨了其抗肿瘤治疗推广到临床应用的可行性。

DNA甲基化和脑肿瘤

表观遗传学的研究表明,脑肿瘤细胞中某些基因的高甲基化可以用来标记肿瘤预后,甲基化后的沉默产物可作为化疗反应的生物标记分子,而对DNA甲基化抑制剂的研究已成为肿瘤治疗的新方向。总之, 在脑肿瘤的发生和发展中,DNA甲基化起着重要的作用。本文总结了肿瘤甲基化方面的最新进展。

体外建立dsRNA结合甲基化转移酶抑制剂转染猪肾细胞的模型

猪病毒性疾病对现代养猪业造成了巨大的经济损失。猪RNA病毒基因组在复制过程中形成双链RNA(ds RNA)的复制型中间体,并诱导I型干扰素的产生,从而对病毒的增殖起抑制作用,这是宿主抗RNA病毒感染的重要天然防线。猪许多病毒的ds RNA对上皮细胞有明显的趋化作用,而DNA甲基化转移酶抑制剂Aza-Cd R可诱导感染细胞凋亡并发挥抗病毒作用。本实验结合荧光定量PCR,计算干扰素相关基因(TLR3、IRF、IFNA)的相对表达量。同时,通过设计剂量和时间依赖实验,利用CCK8实验方法,计算细胞生存比率,最终确定ds RNA模拟物Poly I:C体外转染PK15细胞后,Aza-Cd R处理的理想细胞转染模型。此模型能有效地在体外模拟活病毒感染细胞的效果,更便于在常规实验室使用,是研究猪宿主与病毒感染关系的理想细胞模型。

甲基化转移酶抑制剂对2型糖尿病KKAy小鼠血糖和体重的影响

目的观察甲基化转移酶抑制剂地西他滨对2型糖尿病KKAy小鼠血糖和体重的影响,探讨其可能机制。方法将20只2型糖尿病KKAy小鼠按随机数字表法分为两组,实验组10只使用地西他滨治疗,剂量为15 mg.m-2.d-1,对照组10只使用生理盐水治疗,记录两组治疗前后的血糖、体重。结果治疗结束后,对照组小鼠的血糖和体重均增加(P<0.05),实验组体重增加(P<0.05),而血糖治疗前后差异无统计学意义(P>0.05)。治疗后实验组血糖、体重及增加幅度均低于对照组(P<0.05)。结论甲基化转移酶抑制剂能缓解2型糖尿病小鼠血糖和肥胖的恶化,其机制可能与能量代谢通路和胰岛素信号的重要基因发生了去甲基化有关。

5-Aza-CdR对人结肠癌Caco-2细胞系P16基因甲基化状态及其生物学表型的影响

目的观察人结肠癌Caco-2细胞系P16基因启动子区甲基化状态,并探讨去甲基化制剂5-氮杂-2-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)诱导高甲基化失活的P16基因重新表达的可能性及其对细胞生长的影响。方法用不同浓度的5-Aza-CdR处理Caco-2细胞系,MSP法检测用药前后P16基因的甲基化状态,RT-PCR方法检测P16基因mRNA表达。MTT法观察细胞生长速度,流式细胞仪检测细胞周期、细胞凋亡率。结果 P16基因在人结肠癌细胞系Caco-2中启动子区呈甲基化状态,经过5-Aza-CdR处理后,P16基因启动子区呈去甲基化状态,其mRNA重新表达。CpG岛去甲基化后能明显地抑制细胞的生长,诱导细胞凋亡,影响细胞周期分布,并具有良好的量效依赖关系。结论 5-Aza-CdR能够逆转P16基因甲基化状态,调控P16基因表达并有效地抑制肠癌细胞增殖。

5-Aza-CdR体外诱导人肺癌细胞株p16基因去甲基化

目的观察人肺癌细胞株H719p16基因启动子区甲基化状态,并探讨去甲基化制剂5-氮杂-2′-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)诱导H719细胞株高甲基化失活的pl6基因重新表达的可能性。方法MSP法检测体外培养的人肺癌细胞株p16基因启动子区甲基化状态,并应用不同浓度的5-Aza-CdR处理人肺癌细胞株H719,MSP法检测用药后细胞中p16基因的甲基化状态,并用RT-PCR方法及Western Blot方法检测用药前后细胞中p16基因mRNA和蛋白水平变化。结果p16基因在人肺癌细胞株H719中启动子区呈甲基化状态,经过5-Aza-CdR处理后,p16基因启动子区呈去甲基化状态,并且其mRNA及蛋白恢复表达。结论启动子区异常甲基化是人肺癌细胞株p16基因失活的可能原因,5-Aza-CdR能逆转p16基因甲基化状态。

DNA甲基化酶抑制剂对前列腺癌中XAF1 mRNA表达的影响

目的探讨前列腺癌中XAF1 mRNA表达及DNA甲基化抑制剂对其表达的影响。方法培养前列腺癌细胞株LNCaP、DU145和PC3及肾癌细胞株A498,提取正常人外周血单核细胞(PBMC)、A498和PBMC用作阳性对照。搜集临床10例前列腺癌及邻近前列腺组织作对照。RT-PCR法检测各细胞株和正常人外周血单核细胞中XAF1 mRNA表达,甲基化特异性PCR法检测甲基化酶抑制剂(5'-aza)处理前后前列腺癌细胞株LNCaP、DU145中XAF1 mRNA表达。结果 LNCaP和DU145中XAF1 mRNA的表达水平低于肾癌细胞株A498,PC3中XAF1mRNA不表达。8例患者中有6例XAF1 mRNA在癌组织中的表达低于邻近前列腺组织。使用5'-aza处理后的LNCaP和DU145中XAF1 mRNA均以全长形式表达。结论 XAF1 mRNA在LNCaP和DU14中均为低表达,在PC3不表达。DNA 5'-aza可诱导前列腺癌细胞株中XAF1 mRNA的全长表达。

DNA甲基化转移酶1介导体外高糖刺激诱导的小鼠足细胞损伤的实验观察

目的研究高糖刺激对体外培养的小鼠足细胞DNA甲基化转移酶(Dnmts)表达的影响及Dnmt1在高糖刺激诱导的小鼠足细胞损伤中的作用。方法以体外培养的小鼠永生化足细胞为研究对象,分为正常糖对照组、高糖刺激组、甘露醇组及高糖+干预组(DNA甲基化抑制剂5-氮杂-2′-脱氧胞苷,Dnmt1-siRNA),培养48h,RT-PCR检测其Dnmts mRNA表达;免疫印迹检测Dnmt1、nephrin及podocin蛋白表达;Transwell转板迁移实验观察不同处理后足细胞迁移数目。结果与正常糖对照组比较,高糖刺激组足细胞Dnmt1mRNA及蛋白表达增加(P<0.01),Dnmt3a及Dnmt3bmRNA表达未见明显改变。经5-氮杂-2′-脱氧胞苷或Dnmt1-siRNA处理48h后,高糖刺激组导致Dnmt1高表达得到抑制,降低的足细胞裂孔膜蛋白podocin、nephrin表达增加(P<0.01)。结论高糖上调足细胞Dnmt1蛋白表达,Dnmt1参与体外高糖诱导的小鼠足细胞损伤。