miR-200b-3p与DNA甲基转移酶-3a在骨关节炎软骨细胞中的表达及作用机制

目的探讨mi R-200b-3p靶向DNMT3A对骨关节炎软骨细胞增殖和凋亡的影响。方法 RT-PCR法检测mi R-200b-3p,DNMT3A,MMPs和COLⅡ在正常软骨组织和骨关节炎软骨组织中的表达;采用双荧光素酶和western bolt验证mi R-200b-3p和DNMT3A之间的靶向关系;构建过表达的mi R-200b-3p和DNMT3A真核细胞载体;q RT-PCR和western bolt检测MMPs和COLⅡm RNA及蛋白质在稳定转染的软骨细胞中的表达;通过细胞活力测定(MTS法)、团块培养、Hoechst 33342染色法评估细胞的增殖与凋亡情况。结果 q RT-PCR法及western bolt结果显示,mi R-200b-3p和COLⅡ在骨关节炎软骨组织中呈低表达,而DNMT3A和MMPs呈高表达;双荧光素酶和western bolt证实mi R-200b-3p和DNMT3A之间存在靶向关系;MTS法、团块培养及Hoechst 33342染色法结果证实,在mi R-200b-3p过表达的软骨细胞中,DNMT3A和MMPs的表达水平明显下调,COLⅡ的表达水平则明显上调,且细胞的生存能力增强,凋亡率降低(P均<0.05);在过表达DNMT3A的软骨细胞中,MMPs的表达水平明显上调,COLⅡ的表达水平明显下调,且细胞的生存能力减弱,凋亡率增加(P均<0.05)。结论 mi R-200b-3p可以抑制MMPs分泌和促进COLⅡ合成,并且可以通过抑制DNMT3A的表达来增强骨关节炎软骨细胞的生长与增殖。

N^(6)-甲基腺苷(m6A)转移酶METTL3和m6A调控LINC01465在肝细胞癌增殖转移中的作用机制

目的探讨甲基转移酶样3(METTL3)在肝癌细胞中调控m6A水平,影响长链非编码(lncRNA)LINC01465的表达,促进肝癌细胞增殖转移的机制。方法利用人类癌症基因组图谱(TCGA)数据库分析METTL3在肝癌组织和正常肝组织中的表达差异及与患者预后的关系;用Western blot、RT-qPCR分析验证METTL3在细胞、组织中的表达;用m6A比色法验证肝癌细胞及正常肝细胞中的m6A水平;敲低METTL3后进行CCK-8、克隆形成、Transwell迁移、侵袭实验,研究METTL3对肝癌增殖转移的调控作用;转录组RNA m6A甲基化测序确定METTL3的下游调控基因LINC01465。RT-qPCR验证沉默METTL3后LINC01465的表达量,以及LINC01465在肝细胞癌中的表达水平。结果METTL3在肝癌组织和细胞中明显高表达且与患者预后较差相关;高表达的METTL3促进HCC细胞增殖、迁移和侵袭;METTL3影响LINC01465的m6A水平及其表达量来促进肝细胞癌的发展进程。结论METTL3可通过m6A依赖的方式来影响LINC01465的表达水平,促进肝癌细胞增殖转移,METTL3可能成为肝癌预后及治疗的靶向标志物。

非小细胞肺癌患者组织MutS同种组织蛋白2、O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶表达分析

目的探讨非小细胞肺癌(NSCLC)患者癌组织MutS同种组织蛋白2(MSH2)、O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(MGMT)表达情况及与临床病理参数、预后的关系。方法2021年7月至2022年7月我院收治的96例NSCLC患者,取其手术切除的NSCLC组织标本(NSCLC组)及距癌边缘3 cm处的癌旁正常组织(对照组)。检测两组MSH2和MGMT的表达水平,分析MSH2和MGMT表达水平与患者临床病理参数及预后的关系。结果与对照组比较,NSCLC组MSH2和MGMT阳性率更低(P<0.05);MSH2阳性与患者分化程度有关(P<0.05);MGMT阳性与患者吸烟史和分化程度有关(P<0.05);与MSH2和MGMT阴性患者比较,阳性患者1年生存率均更高(P<0.05)。结论MSH2和MGMT均在NSCLC组织中存在较低表达,其表达水平与临床病理参数、预后密切相关。

放射治疗对宫颈癌DNA甲基转移酶表达的影响

目的:研究放射治疗对宫颈癌(cervical cancer,CIN)组织中DNA甲基转移酶(DNA methyltransferase,DNMT)1、3A和3B表达的影响,探讨其在放射治疗耐受中的作用。方法:选用12例宫颈癌患者放射治疗前、中、后三个时期的组织,应用qPCR检测宫颈癌组织在放射治疗前期、中期和后期的DNMT1、DNMT3A和DNMT3B mRNA的表达变化。结果:宫颈癌放射治疗前、中、后三个时期DNMT1对β-actin mRNA的相对表达量分别是(0.1229±0.0217)、(0.5696±0.0217)和(0.1620±0.0352);放射治疗期间和放射治疗之前宫颈癌组织中DNMT1 mRNA的表达差异有统计学意义(P<0.05),放射治疗期间和放射治疗之后宫颈癌组织中DNMT1 mRNA的表达差异有统计学意义(P<0.05),放射治疗之前和放射治疗之后宫颈癌组织中DNMT1 mRNA的表达差异有统计学意义(P<0.05);DNMT3A对β-actin mRNA的相对表达量分别是(0.0012±0.0001)、(0.0021±0.0001)和(0.0014±0.0001),放射治疗期间和放射治疗之前宫颈癌组织中DNMT3A mRNA的表达差异有统计学意义(P<0.05),放射治疗期间和放射治疗之后宫颈癌组织中DNMT3A mRNA的表达差异有统计学意义(P<0.05),放射治疗之前和放射治疗之后宫颈癌组织中DNMT3A mRNA的表达差异无统计学意义(P>0.05);DNMT3B对β-actin mRNA的相对表达量分别是(0.6627±0.0348)、(0.8104±0.0845)和(0.2391±0.0470),放射治疗期间和放射治疗之前宫颈癌组织中DNMT3B mRNA的表达差异有统计学意义(P<0.05),放射治疗期间和放射治疗之后宫颈癌组织中DNMT3B mRNA的表达差异有统计学意义(P<0.05),放射治疗之前和放射治疗之后宫颈癌组织中DNMT3B mRNA的表达差异有统计学意义(P<0.05)。结论:放射治疗使宫颈癌组织中DNMT1,DNMT3A和DNMT3B表达发生变化,其可能在放射耐受中起到了作用。

何首乌饮通过DNA甲基转移酶1延缓大鼠睾丸间质细胞衰老

目的探讨何首乌饮能否通过DNA甲基转移酶1(DNMT1)延缓大鼠睾丸间质细胞衰老。方法40只Wistar雄性大鼠随机分为4组,每组10只。免疫组织化学检测各组大鼠睾丸组织中DNMT1表达水平。ELISA实验检测各组大鼠血清中的睾酮含量。通过自由基氧化损伤建立大鼠睾丸间质细胞衰老模型。在睾丸间质细胞中使用慢病毒敲低DNMT1,通过β-半乳糖苷酶(β-GAL)染色、免疫荧光染色和ELISA实验检测细胞衰老状态和细胞上清液中睾酮和睾酮合成关键酶3β羟基类固醇脱氢酶(3β-HSD)、细胞色素P450家族成员11A1(CYP11A1)的含量。结果与青年对照组相比,自然衰老组大鼠睾丸组织中P16蛋白表达和β-GAL阳性率明显升高,DNMT1表达和血清睾酮含量降低(P<0.05);何首乌饮干预能够降低衰老大鼠睾丸组织P16蛋白表达和β-GAL阳性率,提高DNMT1表达和血清中的睾酮含量(P<0.05)。衰老的睾丸间质细胞中呈现相同的趋势。在睾丸间质细胞中敲低DNMT1后,β-GAL阳性率和P16蛋白表达明显增加,睾丸间质细胞的睾酮分泌量和睾酮合成关键酶3β-HSD、CYP11A1含量明显减少,与正常组相比差异具有统计学意义(P<0.05)。加入何首乌饮后,上述现象得到改善。结论何首乌饮可以通过DNMT1延缓大鼠睾丸间质细胞衰老。

p53、O^(6)-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶在老年脑胶质瘤患者中的表达及其与预后的相关性分析

目的探究p53、O^(6)-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(O6-methylguanine-DNA methyltransferase,MGMT)在老年脑胶质瘤患者中的表达及其与预后的相关性。方法选取2019年8月至2022年6月新疆喀什地区第二人民医院收治的49例老年脑胶质瘤患者的组织标本为试验组,另选取新疆喀什地区第二人民医院同期收治的35例高血压性脑出血患者的正常脑组织标本为对照组。根据WHO分级将老年脑胶质瘤患者分为Ⅰ/Ⅱ级老年脑胶质瘤组(21例)和Ⅲ/Ⅳ级老年脑胶质瘤组(28例)。根据预后不同将老年脑胶质瘤患者分为预后不良组(27例)和预后良好组(22例)。比较分析对照组与试验组患者的p53、MGMT阳性表达率,不同级别老年脑胶质瘤患者的p53、MGMT阳性表达率,不同预后老年脑胶质瘤患者的p53、MGMT阳性表达率。分析p53、MGMT阳性表达率与老年脑胶质瘤患者临床病理特征的关系以及p53、MGMT阳性表达率与老年脑胶质瘤患者预后的相关性。采用受试者工作特征曲线分析p53、MGMT阳性表达率对老年脑胶质瘤患者预后不良的预测价值。结果试验组患者的p53、MGMT阳性表达率均显著高于对照组(P<0.05)。Ⅲ/Ⅳ级老年脑胶质瘤组患者的p53、MGMT阳性表达率均显著高于Ⅰ/Ⅱ级老年脑胶质瘤组(P<0.05)。预后不良组患者的p53、MGMT阳性表达率均显著高于预后良好组(P<0.05)。p53、MGMT阳性表达率与老年脑胶质瘤患者的性别、年龄、肿瘤大小、肿瘤位置等临床病理特征无关(P>0.05)。Pearson相关性分析结果显示,p53、MGMT阳性表达率均与老年脑胶质瘤患者的预后呈显著负相关(r=-0.575,P=0.001;r=-0.528,P=0.001)。受试者工作特征曲线分析结果显示,血清p53、MGMT阳性表达率联合指标预测老年脑胶质瘤患者预后不良的曲线下面积为0.912,显著高于p53阳性表达率(曲线下面积为0.734)和MGMT阳性表达率(曲线下面积为0.788)单一指标(P<0.05)。结论脑胶质瘤组织中的p53、MGMT阳性表达率明显升高,与肿瘤分级、预后显著相关,且对老年脑胶质瘤患者的预后不良具有一定预测价值。

急性脑出血患者血清E盒锌指结合蛋白1及DNA甲基化转移酶1与神经功能缺损和预后的相关性分析

目的探讨急性脑出血(ACH)患者血清E盒锌指结合蛋白1(ZEB1)、DNA甲基化转移酶1(DNMTl)与神经功能缺损、预后的关系。方法选取2019年7月—2022年7月本院收治的105例ACH患者为ACH组,依据ACH患者入院时美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分将其分为轻度组(n=34)、中度组(n=41)、重度组(n=30)。根据改良Rankin量表(mRS)评分将ACH患者分为预后良好组(n=65)和预后不良组(n=40)。另纳入同期105例体检健康者为对照组。选取2021年7月—2022年7月本院诊治的45例ACH患者对构建的ACH预后模型的受试者工作特征(ROC)曲线进行验证。采用酶联免疫吸附试验检测血清ZEB1、DNMT1水平;采用Spearman法分析ACH患者ZEB1、DNMT1水平与NIHSS评分的关系;采用多因素Logistic回归模型分析ACH患者预后的影响因素,采用ROC曲线评估血清ZEB1、DNMT1水平对ACH患者预后的预测价值。结果与对照组相比,ACH组血清ZEB1、DNMT1水平升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与轻度组相比,中度组和重度组ACH患者血清ZEB1、DNMT1、NIHSS评分均升高,差异有统计学意义(P<0.05);与中度组相比,重度组ACH患者血清ZEB1、DNMT1、NIHSS评分均升高,差异有统计学意义(P<0.05)。Spearman分析结果显示,ACH患者血清ZEB1、DNMT1水平与NIHSS评分均呈正相关(r=0.569、0.763,P均<0.001)。单因素分析结果显示,与预后良好组比较,预后不良组患者NIHSS评分、血肿体积、ZEB1及DNMT1水平均升高或增大,差异有统计学意义(P<0.05)。Logistic回归分析结果显示,ZEB1、DNMT1、NIHSS评分、血肿体积增大是ACH患者预后不良的危险因素(P<0.05)。血清ZEB1、DNMT1预测ACH患者预后的曲线下面积(AUC)分别为0.834、0.854,ZEB1、DNMT1联合预测ACH患者预后的AUC为0.944,灵敏度为95.0%,特异度为86.2%。以验证组人群对预测预后的ROC曲线进行验证,结果显示AUC为0.903(95%CI:0.854~0.951),提示预后预测曲线具有较好的区分度。结论ACH患者血清ZEB1、DNMT1水平较高,二者均与ACH患者神经功能缺损、预后显著相关,且血清ZEB1、DNMT1联合可能更有利于临床评估ACH患者预后情况。

刺五加DNA甲基转移酶基因的适应性进化分析

本研究以刺五加(Eleutherococcussenticosus)的DNA甲基转移酶(cytosine-5DNA methyltransferase,C5-MTase)基因为研究对象,探究其适应性进化的特征。在刺五加的基因组中共鉴定出11条C5-MTases序列,对其进行生物信息学分析和系统发育分析,并分别利用PAML软件的分支模型、位点模型、分支-位点模型以及MEC模型、SLAC(singlelikelihood ancestorcounting,SLAC)和FEL(fixed effects likelihood model,FEL)等方法对刺五加C5-MTases基因的选择位点进行检测。生物信息学分析结果表明刺五加C5-MTases的基因结构高度保守。系统发育分析结果显示,11条C5-MTases基因序列可分为CMT、MET和DNMT三大分支。适应性进化分析结果表明,纯净选择在刺五加C5-MTases基因的进化过程中占主导地位。

甲基转移酶样3调节食管鳞癌细胞功能的研究

目的:探究甲基转移酶样3(methyltransferase-like 3,METTL3)在食管鳞癌中的表达水平和作用机制。方法:体外构建食管鳞癌细胞Eca-109的METTL3敲低模型,利用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRTPCR)、Western Blot验证敲低水平,检测肿瘤细胞的增殖、迁移能力。利用差异分析、富集分析以及生存分析等寻找METTL3的靶基因。结果:敲低METTL3可以显著抑制食管癌细胞的增殖和迁移能力;利用生物信息学分析寻找到受METTL3调控的9个可能的靶基因(精脒/精胺N1-乙酰基转移酶1(spermidine/spermine N1-acetyltransferase 1,SAT1)、低密度脂蛋白受体(low density lipoprotein receptor,LDLR)、整合素β1(integrin subunit beta 1,ITGB1)、细胞间黏附分子5(intercellular adhesion molecule 5,ICAM5)、富含谷氨酸的WD重复序列蛋白1(glutamate-rich WD40 repeat containing 1,GRWD1)、含纤维连接蛋白Ⅲ型结构域3A蛋白(fibronectintype-Ⅲdomain-containing protein 3A,FNDC3A)、DnaJ热休克蛋白家族成员C2[DnaJ heat shock protein family(Hsp40)member C2,DNAJC2]、卷曲螺旋域蛋白88C(coiled-coil domain containing 88C,CCDC88C)、Rho GTP酶激活蛋白12(Rho GTPase activating protein 12,ARHGAP12),其中SAT1高表达与食管鳞癌患者预后不良密切相关,差异有统计学意义。结论:METTL3在食管鳞癌中发挥促癌作用,可能通过调控SAT1等靶基因的m6A甲基化影响食管鳞癌患者的预后。

甲基转移酶3调控pri-miR-21甲基化修饰在糖尿病肾病肾脏纤维化中的作用

目的·探讨甲基转移酶3(methyltransferase like 3,METTL3)调控pri-miR-21的N^(6)-甲基腺苷(N^(6)-methyladenosine,m^(6)A)甲基化修饰在糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)小鼠肾脏纤维化发病机制中的作用。方法·采用8周龄雄性db/db小鼠作为DN模型小鼠,db/m小鼠作为对照,同时按照是否经尾静脉注射S-腺苷高半胱氨酸水解酶抑制剂3-脱氮腺苷(3-deazaadenosine,DAA),共随机分为4组(5只/组),分别为db/m组、db/db组、db/m+DAA组和db/db+DAA组;8周龄开始注射DAA,注射1次/5 d,共注射8次。DAA干预结束后继续饲养小鼠至19周龄,收取各组小鼠血、尿、肾脏组织标本。检测血糖、血肌酐、尿白蛋白肌酐比(albumin-to-creatinine ratio,ACR),肾脏行苏木精-伊红(H-E)染色、Masson染色及天狼星红染色观察病理变化;试剂盒检测肾脏总RNA中m^(6)A的甲基化水平;Western blotting检测肾脏METTL3及纤维化相关蛋白表达;实时定量PCR检测肾脏总pri-miR-21和成熟miR-21;使用免疫磁珠富集肾脏组织中m^(6)A甲基化RNA,并通过PCR检测其中m^(6)A甲基化的pri-miR-21。结果·相较于db/m组,db/db组小鼠血糖,血肌酐,ACR,肾脏METTL3、m^(6)A甲基化修饰水平、纤维化相关蛋白、总pri-miR-21、m^(6)A甲基化pri-miR-21和成熟miR-21表达水平均显著增加(均P<0.05),小鼠肾脏系膜基质增多、肾小球基底膜增厚、胶原纤维累积显著增加。相较于db/db组,db/db+DAA组血糖,血肌酐,ACR,肾脏m^(6)A甲基化修饰水平、纤维化相关蛋白、m^(6)A甲基化pri-miR-21和成熟miR-21表达水平均显著下降(均P<0.05),总pri-miR-21表达水平显著升高(P=0.000),METTL3蛋白表达水平未见显著变化,小鼠肾脏损伤及纤维化程度显著减轻。结论·pri-miR-21的m^(6)A甲基化修饰促进miR-21成熟,进而促进DN小鼠肾脏纤维化的发生发展;抑制METTL3可通过调控pri-miR-21的m^(6)A甲基化修饰抑制DN小鼠肾脏纤维化。

m6A甲基转移酶METTL3通过AFF4/NF-κB/MYC信号网络影响膀胱癌的研究进展

膀胱癌(BCa)是泌尿外科最常见的恶性肿瘤之一,发病机制目前尚未明确。甲基转移酶3(METTL3)是N6-甲基腺苷甲基转移酶复合物(m6A MTC)的核心部分,介导mRNA的甲基化修饰,影响mRNA的稳定性和翻译过程。研究表明METTL3可以通过AFF4/NF-κB/MYC信号网络对BCa细胞分裂增殖起到促进作用。该信号网络涉及多种信号分子,METTL3可分别影响AFF4、NF-κB和MYC的表达水平影响其下游通路,促进肿瘤发展。

miR-214-5p通过DNMT1介导的AXIN2基因DNA甲基化修饰在皮肤基底细胞癌中的作用机制

目的探讨皮肤基底细胞癌中轴抑制蛋白2(Axis inhibition protein 2,AXIN2)基因启动子甲基化对基因转录的影响及miR-214-5p通过靶向DNA甲基转移酶1(DNA methyltransferase1,DNMT1)对AXIN2甲基化率的调控机制。方法收集2022年1月-2023年6月在广州市皮肤病防治所就诊治疗的102例皮肤基底细胞癌(Cutaneous basal cell carcinoma,BCC)患者作为研究对象,提取癌组织和癌旁正常组织标本及基线资料。焦磷酸测序法检测AXIN2基因启动子区甲基化率。实时荧光定量PCR检测AXIN2、DNMT1基因mRNA和miR-214-5p的表达水平。将miR-214-5p模拟物(mimic)、抑制物(inhibitor)及其阴性对照(mimic NC和inhibitor NC)分别对基底细胞癌A431细胞进行转染,48 h后检测DNMT1基因mRNA表达水平和AXIN2基因甲基化率。结果BCC癌组织的AXIN2基因甲基化率显著高于癌旁正常组织(t=5.128,P<0.001),AXIN2基因mRNA相对表达水平显著低于癌旁正常组织(t=7.826,P<0.001),DNMT1基因mRNA表达水平显著高于癌旁正常组织(t=4.838,P<0.001),miR-214-5p表达水平显著低于癌旁正常组织(t=5.426,P<0.001)。BCC癌组织的AXIN2基因甲基化率与其mRNA表达水平呈负相关(r=-0.793,P<0.001),DNMT1基因mRNA水平与AXIN2基因甲基化率呈正相关(r=0.814,P<0.001),miR-214-5p表达水平与DNMT1基因mRNA水平呈负相关(r=-0.747,P<0.001)。双荧光素酶报告基因实验结果证实,DNMT1是miR-214-5p的靶基因。细胞转染后,与mimic NC、inhibitor和inhibitor NC比较,mimic的DNMT1基因mRNA水平、AXIN2基因甲基化率显著降低(P<0.001);而inhibitor的DNMT1基因mRNA水平和AXIN2基因甲基化率相较于其他三组明显上升(P<0.001)。结论miR-214-5p可通过调控下游靶蛋白DNMT1表达,影响AXIN2基因的DNA甲基化率,调控AXIN2基因的表达水平,参与皮肤基底细胞癌的发生机制。

基于MRI的神经网络模型预测胶质母细胞瘤O^(6)-甲基鸟嘌呤-DNA-甲基转移酶启动子状态

目的基于神经网络模型使用术前常规模态磁共振图像预测胶质母细胞瘤O^(6)-甲基鸟嘌呤-DNA-甲基转移酶(MGMT)启动子甲基化状态。方法回顾性分析兰州大学第二医院经手术病理证实的129例胶质母细胞瘤患者的T2WI序列和T1WI对比增强序列的磁共振图像,其中MGMT甲基化患者66例,MGMT非甲基化患者63例。基于EfficientNet卷积神经网络分别构建T2-net、T1C-net及两种序列联合的TS-net,通过受试者工作特征(ROC)曲线、曲线下面积(AUC)敏感度、准确度及特异度评价模型预测效能。结果TS-net在训练和验证数据集的AUC分别为0.944和0.838,T1C-net模型的AUC分别为0.951和0.830,T2-net的AUC分别为0.929和0.781。结论基于磁共振常规序列图像训练深度学习模型可有效预测胶质母细胞瘤患者的MGMT甲基化状态,帮助制定进一步治疗计划。

不同级别胶质瘤中P53蛋白与O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶表达的区别与联系

目的探讨不同级别胶质瘤中P53蛋白与O6.甲基鸟嘌呤.DNA甲基转移酶(MGMT)表达的关系。方法2013年1月至2013年12月在我院进行神经外科手术切除的98例脑胶质瘤组织作为研究对象,采用免疫组织化学的方法分析不同级别胶质瘤组织中P53蛋白与MGMT表达的关系。结果在不同级别胶质瘤组织间,MGMT阳性表达无统计学差异(P=0.462),但表达强度差异明显(P=0.019)。MGMT表达强度与肿瘤分级呈负相关(r=-0.629,P<0.05)。MGMT与P53在阳性表达强度上呈负相关(r=-0.750,P<0.05)。结论P53蛋白与MGMT在不同级别的胶质瘤中的表达有一定的关系,而且P53表达增强和MGMT表达减弱均会对胶质瘤的发生及其恶性程度产生影响。

DNA甲基转移酶3B-149C>T多态性与致癌风险相关性的Meta分析

目的:评估DNA甲基转移酶3B-149C>T(DNMT3B-149C>T)多态性与致癌风险之间的相关性。方法:依据Newcastle-Ottawa Scale(NOS)文献质量评价量表,对1990～2017年国内外公开发表的相关文献进行评价并提取资料;对DNMT3B-149C>T各基因型模型进行比较,包括CC与TT、CT与TT、CC+CT与TT,综合分析其在病例组和对照组中的分布情况;通过Q检验和I^2值分析各研究间的异质性,应用Begg秩相关法和Egger回归法验证发表偏倚,使用Review Manager 5.0软件和STATA version 12.0进行统计分析,计算比值比(OR)及95%置信区间(95%CI),评估DNMT3B-149C>T多态性与致癌风险的相关性。结果:分析文献中的7 612名癌症病例和9 679名健康对照。按不同癌症类型进行亚组分析,DNMT3B-149C>T多态性与肺癌的患病存在相关性[OR=1.51,95%CI(1.08,2.12),P=0.02]。结论:DNMT3B-149C>T多态性可能是肺癌的易感性因素。

3-羟基-3甲基戊二酰辅酶A裂解酶缺乏症临床特点及基因变异分析

目的了解3-羟基-3甲基戊二酰辅酶A裂解酶缺乏症的临床特点及基因变异情况。方法分析6例3-羟基-3甲基戊二酰辅酶A裂解酶缺乏症患儿的临床资料及基因检测结果。结果6例患儿,男性3例,女性3例。1例家族史阳性。3例患儿当地医院行新生儿筛查提示该疾病,2例患儿为发病后临床诊断,1例患儿至今未发病。5例患儿发病年龄10天~5岁。初诊年龄为1个月~7岁,发病时均有不同程度的代谢危象、低血糖和高乳酸血症等表现。2例患儿死亡。血串联质谱显示3-羟基异戊酰肉碱升高,部分患儿伴有己二酰肉碱升高;尿有机酸分析提示3-羟基-3-甲基戊二酸显著升高,伴3-甲基戊烯二酸、3-羟基异戊酸等增高。4例患儿基因检测均发现HMGCL基因变异:2例c.122G>A(p.R41Q)纯合;1例c.697C>T(p.H233Y)纯合;1例c.145-2A>G和c.590G>A(p.C197Y)复合杂合。其中,c.697C>T(p.H 233Y)、c.145-2A>G和c.590G>A(p.C 197Y)变异均为首次报道,蛋白结构预测均为可能有害,ACMG评级为可能致病。另2例患儿未行基因检测。结论3-羟基-3甲基戊二酰辅酶A裂解酶缺乏症临床表型多样,结合血串联质谱、尿有机酸分析及基因诊断可确诊。对3-羟基-3甲基戊二酰辅酶A裂解酶缺乏症的筛查有助于早期确诊及合理治疗。

结直肠癌组织中METTL3、miR-23a-3p表达与病理参数及术后肝转移的关系

目的探讨结直肠癌(Colorectal cancer,CRC)组织中甲基转移样酶3(Methyltransferase-like protein 3,METTL3)、微小核糖核酸-23a-3p(miRNA-23a-3p,miR-23a-3p)表达与病理参数及CRC术后肝转移的关系。方法选取2018年3月至2021年6月中国医科大学附属盛京医院收治的145例CRC患者,患者均进行CRC根治术,术中取患者CRC组织及癌旁组织样本,采用荧光定量聚合酶链反应法检测METTL3 mRNA、miR-23a-3p水平,分析不同病理参数的CRC组织METTL3 mRNA、miR-23a-3p表达情况。收集患者临床病理资料,采用Cox比例风险模型对预后因素进行单变量和多变量分析。术后随访2年,统计患者术后肝转移发生情况,并采用受试者工作特征(Receiver operating characteristic,ROC)曲线分析血清METTL3 mRNA、miR-23a-3p对CRC术后肝转移的预测价值。结果CRC组织中METTL3 mRNA、miR-23a-3p水平均高于癌旁组织(P<0.05);国际抗癌联盟肿瘤通用分期(Tumor node metastasis,TNM)Ⅲ期CRC患者METTL3 mRNA水平高于Ⅱ期,低分化CRC患者METTL3 mRNA水平高于中-高分化(P<0.05);TNMⅢ期CRC患者miR-23a-3p水平高于Ⅱ期,发生淋巴转移CRC患者METTL3 mRNA水平高于未发生淋巴转移CRC患者(P<0.05);单因素及多因素Cox分析显示,TNM分期Ⅲ期、低分化、淋巴转移、METTL3 mRNA及miR-23a-3p高水平是CRC术后肝转移的独立危险因素(P<0.05);ROC分析结果显示,血清METTL3 mRNA、miR-23a-3p单独及联合预测CRC术后肝转移的曲线下面积(Area under the curve,AUC)分别为0.748(0.669~0.816)、0.778(0.701~0.842)、0.882(0.818~0.930),二者联合检测预测CRC术后肝转移的效能高于单独检测(Z=2.387、2.027,P均<0.05)。结论CRC组织中METTL3、miR-23a-3p表达均异常升高,METTL3与TNM分期、分化程度相关,miR-23a-3p与TNM分期、淋巴转移相关,METTL3、miR-23a-3p联合对预测CRC术后肝转移具有更高价值。

甲基转移酶样蛋白14对急性早幼粒白血病细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移的调节作用

目的 探讨过表达和敲低甲基转移酶样蛋白14(METTL14)对急性早幼粒白血病细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移的调节作用。方法 取人急性早幼粒白血病细胞NB4进行培养,分为过表达对照组、过表达组、干扰对照组、干扰组,过表达对照组及过表达组分别转染空白质粒和METTL14质粒,干扰对照组和干扰组分别转染si-NC和si-METTL14质粒。采用CCK-8法检测各组细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,Transwell实验检测细胞侵袭和迁移能力,Dot Blotting法检测细胞N-6甲基腺苷(m6A)修饰水平。结果 与过表达对照组相比,过表达组细胞增殖率升高、细胞凋亡率降低、细胞迁移数、细胞侵袭数升高,NB4细胞m6A修饰水平提高(P均<0.05);与干扰对照组相比,干扰组细胞增殖率降低、细胞凋亡率增加、细胞迁移数、细胞侵袭数降低,NB4细胞m6A修饰水平降低(P均<0.05)。结论 METTL14可促进NB4细胞增殖、迁移、侵袭,其机制可能与提高m6A修饰水平有关。

DNA甲基化转移酶1与2,3,7,8-四氯二苯并对二噁英诱导小鼠腭裂的相关性研究

目的:通过检测DNA甲基转移酶1(DNA methyltransferase 1,DNMT1)在四氯二苯并对二噁英(2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-paradioxin,TCDD)诱导的腭裂小鼠体内的表达,探讨其与腭裂发病机制的相关性。方法:TCDD通过对腭部中嵴上皮细胞的毒性作用,导致胎鼠腭裂发生。应用TCDD(64μg/kg)处理胚胎处于第10.5天(E10.5)的C57BL/6J怀孕小鼠建模。分别获取E13.5、E14.5、E15.5和E17.5胎鼠的口腔组织,苏木精-伊红(hematoxylin-eosin staining,HE)染色检测胎鼠腭裂组织。逆转录-定量聚合酶链反应(reverse transcription-quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)检测以上各组胎鼠DNMT1mRNA表达水平的变化,Western blot检测DNMT1蛋白表达水平的变化。结果:HE染色结果显示TCDD组腭裂发生率为98.25%,对照组无腭裂发生。RTqPCR结果显示TCDD组DNMT1mRNA水平与对照组比较显著增高,差异有统计学意义(P<0.01)。Western blot结果表明与对照组比较,TCDD组DNMT1蛋白表达水平显著增高,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:在TCDD诱导胎鼠腭裂的形成过程中,DNMT1发挥重要的作用。

子宫内膜癌中DNA甲基转移酶3B的表达特点与临床意义

目的:探讨子宫内膜癌中DNA甲基转移酶3B(DNA methyltransferase 3B,DNMT3B)的表达特点、与雌激素受体(estrogen receptor,ER)和孕激素受体(progesterone receptor,PR)的相关性及意义。方法:免疫组织化学法检测DNMT3B、ER、PR在104例子宫内膜癌组织中的表达并与临床病理特点及预后相对照。结果:104例子宫内膜癌组织中DNMT3B阳性率为50%,Ⅰ型内膜癌(内膜样癌)中DNMT3B过表达率(54.8%)显著高于Ⅱ型内膜癌(30.0%,P=0.028),且Ⅰ型内膜癌中,随肿瘤分化变差,DNMT3B阳性率增加(1级、2级、3级分别为43.3%、51.3%、86.7%),差异有统计学意义(P=0.019)。DNMT3B在肌层侵犯程度重、存在脉管癌栓、淋巴结转移及分期晚的病例中过表达率更高,DNMT3B过表达的患者组预后更差,但差异未见统计学意义(P>0.05)。Ⅰ型内膜癌DNMT3B与ER、PR表达呈负相关,ER、PR阴性组DNMT3B过表达率(78.9%、86.7%)高于ER、PR阳性组DNMT3B过表达率(47.7%、47.8%),差异有统计学意义(P=0.016,P=0.006);ER、PR均阴性时,DNMT3B过表达率最高(92.9%),差异有统计学意义(P=0.002)。Ⅱ型内膜癌中DNMT3B与ER、PR表达未见相关性(P>0.05)。序列分析显示,DNMT3B基因启动子区有多个ER、PR结合位点。结论:内膜样癌与非内膜样癌中DNMT3B表达特点不同,DNMT3B过表达有可能作为预后或预测因子而辅助病理诊断和生物学行为评估。Ⅰ/Ⅱ型子宫内膜癌的甲基化特点可能不同,Ⅰ型内膜癌中DNMT3B过表达与ER、PR表达呈负相关,Ⅱ型内膜癌中DNMT3B表达与ER、PR表达关系不大。